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胆囊癌细胞中P-糖蛋白的检测及临床意义
对胆囊癌多药耐药性的研究罕见报道.我们用免疫组织化学染色的方法检测了29例手术切除的胆囊癌组织标本中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达情况,并对其临床意义进行探讨.
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胆囊癌细胞增殖与凋亡分子机制的研究进展
胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤,约占全部胆道恶性肿瘤的64.7%.我国的胆囊癌发生率在消化系统肿瘤中占第6位,仅次于胃癌、大肠癌、食管癌、肝癌和胰腺癌.胆囊癌在临床上却并不十分常见,约占全部癌肿的0.8%～1.2%,故对于胆囊癌细胞的增殖与凋亡分子机制的研究相对较少.但胆囊癌的预后一般不良,因此对于其细胞增殖与凋亡方面机制的研究尤为重要.近年来该方面的研究已取得了一定的进展,本文就此内容进行综述,以供参考.
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小干扰RNA靶向血管内皮生长因子基因抑制胆囊癌细胞的增殖体内外实验
背景:已有研究发现RNA干扰可通过抑制血管内皮生长因子基因表达抑制肿瘤细胞增殖,但目前关于应用RNA干扰胆囊癌血管内皮生长表达的研究国内外尚无相关报道.目的:构建并筛选靶向血管内皮生长因子的shRNA,观察RNA干扰血管内皮生长因子的效果及对胆囊癌细胞增殖的影响.方法:设计VEGF-shRNA片段,连接到pCYU6/GFPINeo-shRNA质粒载体上.shRNA转染胆囊癌细胞.建立裸鼠胆囊癌模型,随机分成空白组、阴性对照组、实验组(干扰pShRNA-VEGF2),每组6只.瘤内注射shRNA.荧光显微镜观察细胞生长状态,半定量反转录-聚合酶链反应法与实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰效果,观察胆囊癌裸鼠模型肿瘤体积变化. 结果与结论:RNA干扰血管内皮生长因子后,胆囊癌细胞细胞变圆,皱缩,部分细胞死亡脱落.ShRNA片段血管内皮生长因子2、血管内皮生长因子1均可抑制VEGF mRNA表达,抑制率可达86%,82%.裸鼠肿瘤模型中实验组肿瘤与对照组、阴性组相比明显变小,且生长缓慢(P<0.05),而对照组和阴性组在肿瘤大小及生长趋势上没有明显的差别.实验构建的hVEGF-shRNA质粒表达载体通过抑制血管内皮生长因子的表达,抑制胆囊癌细胞增殖,从而达到间接治疗肿瘤的目的.
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三氧化二砷对离体人胆囊癌细胞的放射增敏作用
目的:观察三氧化二砷( As2O3)对人胆囊癌GBC-SD细胞的放射增敏作用.方法:0.2 μmmol·L-1 As2O3处理胆囊癌细胞后给予递增剂量(0 、2 、4 、6 、8 、10 Gy)的137Cs γ射线照射,观察GBC细胞的存活率.结果:细胞存活率随放射剂量的增加逐渐下降;同等放射剂量下,As2O3处理的细胞存活率明显低于单纯照射组,Dq值明显下降,放射增敏比为1.5131.结论:As2O3对离体人胆囊癌细胞有放射增敏作用.
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人胆囊癌肝转移模型的建立及初步的影像学评估
目的:建立胆囊癌肝脏转移动物模型,对其进行初步影像学评估,为晚期胆囊癌的各种干预治疗提供实验动物模型及评估工具.方法:用脾内接种法建立人胆囊癌细胞系(GBC-SD)的裸鼠肝脏转移模型.接种后第45天对肝脏行CT检查,并处死裸鼠后取下肝脏行病理检查.结果:组织学检查证实裸鼠的胆囊癌肝转移率为50%(5/10),CT检查肝转移率为40%(4/10),CT检查的阳性率为80%(4/5).结论:脾脏接种法可以成功建立胆囊癌肝脏转移动物模型,CT可以作为初步评估该模型的影像学工具.
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雷公藤甲素体外增强氟尿嘧啶诱导人胆囊癌细胞NOZ凋亡作用的研究
目的:探讨雷公藤甲素和氟尿嘧啶(5-FU)对人胆囊癌细胞NOZ增殖及凋亡的影响.方法:人胆囊癌细胞NOZ用含有10％ 胎牛血清的William's Medium E培养基置于37℃ 、5％CO2恒温细胞培养箱中进行培养.采用CCK-8实验、Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测,及细胞周期检测实验,测定雷公藤甲素、氟尿嘧啶及雷公藤甲素+氟尿嘧啶联合应用对人胆囊癌细胞NOZ增殖及凋亡的影响.结果:单独使用雷公藤甲素、氟尿嘧啶及联合使用雷公藤甲素+氟尿嘧啶都可以抑制人胆囊癌细胞NOZ的增殖,并诱导其凋亡.CCK-8实验显示细胞接受48 h处理后,雷公藤甲素、氟尿嘧啶单独给药组及联合给药组的IC50分别为15.6、11.2和6.85μmol/L.Annexin V-FITC/PI双染实验显示,联合给药组细胞凋亡率明显高于单独给药组(P<0.05).细胞周期实验显示,联合给药组处于G1期细胞的比例明显高于单独给药组(P<0.05).结论:雷公藤甲素能显著增强氟尿嘧啶对人胆囊癌细胞NOZ的抑制及凋亡作用.
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金黄色葡萄球菌L型对胆囊癌细胞的致病变研究
目的 研究金黄色葡萄球菌L型对胆囊癌细胞(GBC-SD)的致病变作用.方法 金葡菌L型感染GBC-SD细胞后,采用光学显微镜、透射电子显微镜及PCR检测其能否侵入细胞,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法、增殖细胞核抗原(PCNA)法检测其能否促进细胞增殖,采用基因芯片检测其引起的细胞基因改变.结果 PCR检测以及光镜、电镜拍照显示金葡菌L型能够粘附并且进入GBC-SD细胞,MTT法、PCNA检测表明金葡菌L型能够促进GBC-SD细胞增殖.基因芯片结果 显示金葡菌L型作用后的GBC-SD细胞有15个基因表达异常,取表达上调基因含表皮生长因子组件粘蛋白类似激素受体2(EMR2)、表达下调基因细胞外基质蛋白2(ECM2)进行RT-PCR法验证,与基因芯片结果 符合.结论 金葡菌L型能够进入GBC-SD细胞中并促进其增殖,引起细胞EMR2基因上调、ECM2基因下调,提示金葡菌L型可能与胆囊癌的发生、发展存在一定相关性.
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反应停对胆囊癌细胞的作用机制研究
目的 初步探讨反应停对胆囊癌细胞的作用机制.方法 应用RT-PCR技术检测经反应停处理后胆囊癌细胞株GBC-SD中survivin、VEGF、MMP-9的表达.结果 survivin、VEGF、MMP-9在经反应停处理的人胆囊癌细胞株GBC-SD中表达下降,且与反应停的浓度有关.结论 反应停可能通过促进细胞凋亡和抑制血管生成等机制作用于胆囊癌细胞.
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白藜芦醇抑制胆囊癌细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究
目的:探讨白藜芦醇(Res)对胆囊癌细胞(GBC)和正常成纤维细胞(3T3)体外增殖的影响,进而观察Res对GBC和3T3细胞凋亡的影响.方法:MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期,检测细胞凋亡;SABC法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:Res呈浓度依赖性抑制GBC细胞的生长与增殖(P＜0.01),抑制率高可达54%.Res能明显诱导GBC细胞凋亡,凋亡率高为30.52%;处理组较对照组G1期细胞由34.88%上升至55.47±3.95%,S期细胞减少8.41%～17.54%,呈明显的G0/G1期阻滞现象.GBC细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.结论:Res能通过诱导GBC细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用.
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重组pcDNA3.0-WWOX构建对胆囊癌细胞表达及△Ψ m的影响
目的 体外构建及鉴定PeDNA3.0-WWOX真核表达载体,探讨过表达WWOX对人胆囊癌细胞WWOXmRNA表达、蛋白表达及跨膜电位(△Ψm)的影响.方法 提取人胆囊癌细胞总RNA,RT-PCR反应合成WWOX的cDNA,PCR产物回收纯化.目的基因WWOX和pcDNA3.0载体经限制性内切酶ECOR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切,将双酶切WWOX片段与pcDNA 3.0载体在T4DNA连接酶的作用下进行连接重组.pcDNA 3.0-WWOX重组质粒转化后,提取质粒经双酶切鉴定及测序鉴定.将pcDNA 3.0-WWOX重组质粒转染人胆囊癌GBC-SD细胞,应用RT-PCR、Western Blot检测WWOX基因的表达水平、JC-1染色检测胆囊癌细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)变化.结果 成功构建了pcDNA3.0-WWOX重组载体,经测序DNA序列与Gene Bank中WWOX序列一致.成功转染pcDNA3.0-WWOX重组质粒至胆囊癌GBC-SD细胞中.RT-PCR及Western blot结果显示:胆囊癌GBC-SD细胞转染pcDNA3.0-WWOX重组质粒48 h后pcDNA-3.0-WWOX组灰度比值明显高于各对照组(P＜0.05),对照组间mRNA表达量差异无统计学意义(P＞0.05).pcDNA3.0-WWOX组蛋白表达灰度比值均明显高于各对照组(P＜0.05),对照组间蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05).pcDNA3.0-WWOX组细胞线粒体内绿色荧光信号较对照组增高(P＜0.05),而对照组间细胞线粒体内绿色荧光信号差异无统计学意义(P＞0.05).结论 体外成功构建了PcDNA3.0-WWOX重组载体,顺利进行了重组载体的转化和转染实验.靶向PcDNA3.0-WWOX重组载体可有效抑制胆囊癌细胞WWOXmRNA降解,促进其蛋白的表达,同时有效促进细胞的早期凋亡.WWOX可能参与线粒体依赖的凋亡途径调控胆囊癌细胞的生长.
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温热对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响
目的:研究温热作用在体外对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响.方法:体外培养的胆囊癌GBC-SD细胞,给予43℃热作用1h,以37℃正常培养温度为对照,分别收集作用0、6、12h后的细胞.应用MTT、免疫细胞化学和Western-blot等技术,检测GBC-SD细胞经温热作用后增殖活性和PCNA蛋白表达的改变.结果:43℃热作用1h对胆囊癌细胞具有较明显的抑制效应,可有效抑制PCNA的表达.结论:43℃温热作用1h是抑制胆囊癌GBC-SD细胞增殖活性的有效热剂量.
