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高草酸尿和输尿管梗阻对鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响
目的探讨高草酸尿和输尿管梗阻(UUO)对鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响. 方法雄性成年Wistar大鼠40只,随机分为4组,每组10只,A组为对照组,B组为高草酸尿组,C组为输尿管梗阻组,D组为高草酸尿并输尿管梗阻组.所有大鼠均在术后2周处死并取左肾,常规HE染色检测肾小管间质草酸盐结晶沉着情况;原位末端标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡情况. 结果 B组和D组组织切片肾小管腔内可见明显草酸盐晶体沉着,A组和C组未见晶体沉着.计数5个高倍镜视野的细胞,A、B、C、D各组肾小管上皮细胞凋亡数分别为1.1±1.1,31.3±8.0,145.0±33.4,275.8±51;A组与各组相比差异均有显著性意义(P<0.001),B组与C组、D组相比差异有显著性意义(P<0.001),C组与D组相比差异亦有显著性意义(P<0.01). 结论高草酸尿可致肾小管间质草酸盐结晶沉着;完全性输尿管梗阻并高草酸尿使肾小管上皮细胞凋亡水平明显增高,且造成肾脏损害,输尿管梗阻是比高草酸尿更重要的促细胞凋亡因素.
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草酸钙肾结石的研究现状:问题与方向
有5%～15%的人群一生中会罹患肾结石,其中大部分的结石成分是草酸钙(calcium oxalate,CaOx)[1].多数CaOx肾结石患者未发现伴有其他系统性疾病的存在,称之为特发性草酸钙结石(idiopathic calcium oxalate,iCaOx);一些患者存在原发性甲状旁腺功能亢进或其他钙代谢异常疾病;一些患者的主要表现为高草酸尿症,其中因肠道疾病导致草酸吸收增多而引起的称为肠源性高草酸尿症,因基因缺陷导致草酸代谢异常而引起的称为原发性高草酸尿症(primary hyperoxaluria,PHO).
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高草酸尿和输尿管梗阻对肾实质草酸盐结晶沉积的影响
目的: 探讨高草酸尿和单侧输尿管梗阻(UUO)对肾实质草酸盐结晶沉积的影响.方法: 取40只雄性成年Wistar大鼠,随机分为四组,每组10只,A组为对照组,B组为高草酸尿组,C组为输尿管梗阻组,D组为高草酸尿并输尿管梗阻组.A组和B组给予假手术,B组和D组给予1%乙二醇为饮用水,A组和C组给予蒸馏水,C组和D组用4～0丝线行左侧输尿管近端结扎.所有大鼠均在术后2周处死并取左肾,行常规H-E(苏木素-伊红)染色检测肾小管间质草酸盐结晶时沉着情况.结果: B组和D组组织切片肾小管腔内可见明显的草酸盐晶体沉着,A组和C组未见有晶体沉着.A组草酸盐结晶沉积情况与B组和D组相比差别均有显著意义(P＜0.01),B组和D组相比差别也有显著意义(P＜0.01).结论: 高草酸尿可致肾小管间质草酸盐结晶沉着,合并梗阻时沉着加重;单有梗阻并不能造成草酸盐结晶沉积.
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表达产甲酸草酸杆菌草酸分解基因的人肝细胞系的构建
目的:构建表达产甲酸草酸杆菌(Ox.F)草酸分解基因的人肝细胞系,探索高草酸尿的治疗方法.方法:分离培养人肠道Ox.F并克隆其功能基因oxc和frc,构建同时表达oxc和frc的真核双表达载体质粒pIRES-oxc-frc,将pIRES-oxc-frc转染人正常肝细胞系L-02.用RT-PCR和Western blot技术了解转基因细胞的目的基因表达状况;用离子色谱法测定转基因后细胞培养液中草酸浓度,了解其草酸分解功能.结果:转基因后人肝细胞系L-02在mRNA和蛋白质水平均成功表达oxc和frc基因,其草酸分解功能较转染前明显增强(P＜0.01).结论:Ox.F分解草酸的两个重要功能基因oxc和frc能在体外转入人正常肝细胞(L-02)中,并使后者草酸分解能力明显增强.转草酸分解基因的人肝细胞系的构建,有望用于高草酸尿,尤其是PH的病因治疗,值得进一步研究.
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高草酸尿症大鼠肾骨桥蛋白表达与尿液草酸排泄的关系
研究表明,骨桥蛋白在肾结石的形成过程中发挥重要作用.不论是在细胞系培养还是在动物模型中[1,2],草酸都能够有效地刺激肾脏合成和分泌骨桥蛋白.
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中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因的分离、克隆和鉴定
目的 克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达.方法 用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒.重组质粒转染人胚肾293细胞,检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达.被转染细胞在含草酸培养液中培养,检测0～72 h培养液中草酸浓度的变化.结果 frc基因的真核表达载体构建成功.转染293细胞后24～72 h,可观察到明亮的绿色荧光,在mRNA和蛋白水平上可检测到frc基因在真核细胞中的表达.转染pEGFP-frc细胞12～72 h培养液中草酸浓度明显低于转染空载体的细胞(P＜0.05).结论 中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可分离出frc基因;frc基因可在真核细胞293细胞中表达并使293细胞获得代谢草酸的能力.
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产甲酸草酸杆菌基因frc和oxc在人骨髓间充质干细胞中的表达
目的:将产甲酸草酸杆菌(OXF)草酸分解基因frc和oxc分别克隆到逆转录病毒载体pLEGFP-N1和pBaBE-puro,共转染正常成人骨髓间充质干细胞(hMSCs),使frc和oxc基因在hMSCs中稳定表.方法:以本实验室保存的OXF基因组为模板,PCR法扩增出frc和oxc基因的编码序列,采用逆转录病毒载体将frc和oxc导入hMSCs中,Q-PCR和Western blot检测其表达.结果:重组载体pLEGFP-N1-myc-frc、pBaBE-puro-flag-oxc构建成功;并检测出frc和oxc基因在hMSCs中的稳定表达.结论:逆转录病毒载体介导的frc和oxc能成功转染hMSCs,能为以后体外诱导分化为肝细胞,治疗内源性高草酸尿奠定基础,为下一步的实验提供原材料.
