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重组活化Ⅶ因子在普通外科手术出血并发症中的应用
目的 研究观察出现手术中出血并发症后使用或者预防使用重组活化人凝血因子Ⅶ(γFVKa)的止血效果.方法 回顾分析56例外科患者(53例为肝胆外科疾病患者,3例胃肠疾病患者)使用重组活化人凝血因子Ⅶ(γfⅦa)的止血效果,分析术中使用(12例),肝移植术前预防(30例)以及术后使用(14例)的治疗效果.结果 12例患者术中出血时使用.11例患者使用后迅速止血.其中1例肝移植患者以及1例肝癌患者术中成功止血,但术后发生肝功能衰竭死亡.另外1例肝移植患者用药后仍有继续渗血,血流动力学不稳定,无法完成手术,死亡.30例行肝移植术患者术前使用预防出血,手术均成功,患者顺利出院.14例患者术后出血使用,11例用后腹腔血性引流液减少至用药前50%以下.3例使用后,血性引流液减少不明显,血流动力学指标以及生命体征仍不稳定,死亡.总体上56例患者使用γFⅦa后,有50例患者达到救治,救治率达到89%.结论 γFⅦa可以安全地应用于多种外科手术中以及手术相关的出血并发症.
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重组活化凝血因子Ⅶ治疗心血管手术后渗血的临床探讨
目的 总结重组活化凝血因子Ⅶ(rFⅦa)治疗常规止血措施无效的心血管手术后渗血的初步经验.方法 回顾性分析2006年5月至2007年12月16例接受rFⅦa治疗的患者资料,其中男性15例,女性1例,年龄36～77岁,平均52岁.手术包括主动脉手术8例.瓣膜置换术6例,肺动脉内膜剥脱术1例和房间隔缺损修补术1例.应用rFⅦa治疗心血管外科术后渗血.结果 rFⅦa首次剂量27.6～54.5 ug/kg,平均40.2ug/kg,给药后6例达到止血效果.9例因出血持续于30 min内第2次给药,累计剂量59.3～90.9 ug/kg,平均80.3 ug/kg,8例获得止血,1例开胸探查.1例7 h内给药4次,累计剂量203.4 ug/kg后止血.给药后患者胸腔引流量明显下降,红细胞悬液、新鲜冰冻血浆、冷沉淀、血小板输注量明显减少.术后12 h内总引流量及红细胞悬液、冷沉淀输注量与给药距转流停机时间呈正相关.给药后凝血功能指标改善,全组患者在观察期间未发生血栓性并发症.结论 中小剂量rFⅦa应用于其他止血处理无效的心血管手术后渗血,可以减少引流量,降低血制品输注量.
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凝血因子Ⅶa促进SW620细胞增殖与迁移的机制探讨
目的 体外探讨凝血因子Ⅶa促进结肠癌细胞株SW620增殖与迁移的作用机制.方法 采用蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、凝血因子Ⅶa等处理SW620细胞,以实时定量PCR检测SW620细胞中白细胞介素8(IL-8)、组织因子(TF)及半胱氨酸蛋白酶7(caspase-7)mRNA的表达水平;以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清IL-8蛋白的含量;以Xa生成法检测细胞TF活性;以Western blot法检测细胞磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)水平.结果 PAR2-AP、凝血因子Ⅶa能够增加SW620细胞中IL-8基因和蛋白的表达,上调TF mRNA水平及活性,下调caspase-7基因表达和p-p38 MAPK水平,单克隆抗TF及抗PAR2抗体均可抑制凝血因子Ⅶa的作用.结论 凝血因子Ⅶa与细胞表面TF形成复合物,通过活化PAR2,上调结肠癌细胞株SW620中IL-8、TF的表达,下调细胞caspase-7表达,从而促进细胞增殖与迁移能力,p38 IVIAPK在此过程中起负性调节作用.
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结肠癌细胞中组织因子/活性凝血因子Ⅶ-表皮生长因子受体通路间交互作用机制
目的:探讨结肠癌细胞中组织因子/活性凝血因子Ⅶ(tissue factor/active coagulation factorⅦ,TF/FⅦa)通路与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)通路之间是否存在交互作用.方法:在KRAS野生型的HT-29及KRAS突变型的LoVo结肠癌细胞中,以FⅦa活化TF/FⅦa通路,采用qRT-PCR、Western blot检测EGFR配体双调蛋白(amphiregulin,AREG)及表皮调节素(epiregulin,EREG)基因、蛋白表达改变;利用RNA干扰技术敲低TF表达后活化TF/FⅦa通路,检测其对AREG、EREG基因表达的影响,以证实FⅦa对AREG、EREG表达调节作用依赖TF.以表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)激活两细胞EGFR通路后,检测TF/FⅦa通路关键分子TF、FⅦ基因表达改变.结果:TF/FⅦa通路活化后,HT-29细胞AREG、EREG基因表达及EREG蛋白表达水平均较对照组显著下调(AREG、EREG基因表达量分别为0.55±0.09 vs.0.99±0.09、0.67±0.10vs.1.02 ±0.02,EREG蛋白表达量0.54±0.09 vs.1.04±0.13,p均＜0.05);LoVo细胞AREG基因表达及AREG、EREG蛋白表达水平较对照组显著上调(AREG基因表达量1.87±0.39 vs.0.93±0.23,AREG、EREG蛋白表达量3.09 ±0.73 vs.1.11 ±0.21、1.53±0.19 vs.0.97±0.23,P均＜0.05);TF敲低后均可部分阻断FⅦa对两细胞AREG、EREG表达调节作用;EGFR通路激活后,HT-29细胞TF基因表达较对照组无显著变化,FⅦ基因表达未检测到,而LoVo细胞的FⅦ及TF基因表达均较对照组显著上调,表达量分别为1.53±0.23 vs.1.00±0.23、53.20±6.08 vs.1.00±0.15(P均＜0.05).结论:结肠癌LoVo细胞TF/FⅦa通路与EGFR通路的活化可分别上调另一通路的关键分子表达并发生交互作用,KRAS基因突变可能对该交互作用的发生发挥关键作用.
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组织因子/活化凝血Ⅶ因子复合物对大肠癌LoVo细胞系表达基质金属蛋白酶-7的调控作用
目的:观察活化凝血Ⅶ因子(actived factor Ⅶ,FⅦa)对大肠癌LoVo细胞系表达基质金属蛋白酶-7(ProMMP-7)的影响,探讨其可能的组织因子信号转导通路.方法 :(1)用Western blot检测100 nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞系不同时间点及不同浓度FⅦa刺激LoVo细胞系12 h后细胞ProMMP-7蛋白水平;用Western blot检测5 mg/L组织因子(tissue factor,TF)抗体预孵育LoVo细胞系0.5 h后再给予100 nmol/L FⅦa刺激12 h后细胞ProMMP-7蛋白水平.(2)观察用100 nmol/L FⅦa刺激时丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)各亚通路信号蛋白(包括细胞外信号调节激酶ERK1/2,丝裂原激活蛋白激酶P38及c-Jun-N末端蛋白激酶JNK)磷酸化水平变化.(3)在FⅦa刺激前0.5 h分别加入ERK1/2,P38和JNK信号通路特异阻断剂PD98059,SB203580和SP600125,培养12 h后检测细胞ProMMP-7蛋白的变化.结果 :(1)FⅦa可刺激LoVo系细胞表达ProMMP-7并呈时间依赖性和剂量依赖性,在刺激的12 h左右ProMMP-7达峰值,是正常对照组的5.5±0.6倍(P=0.006);用TF抗体预处理的LoVo细胞系,其FⅦa上调ProMMP-7表达的作用被完全阻断.(2)用100 nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞5 min时,MAPKs磷酸化活性蛋白p-ERK1/2和p-P38表达水平开始增加,至10 min时达峰值(分别为对照组的2.2±0.3倍和3.9±0.5倍,P值分别为0.02和0.01),存在时间效应关系,而p-JNK活性无改变(为对照组的1.1±0.1倍).(3)ERK1/2通路阻断剂PD98059及P38通路阻断剂SB203580可部分减少FⅦa上调LoVo细胞系表达ProMMP-7的效应,分别降低了32%±5%(P=0.01)和61%±10%(P=0.009),JNK通路特异性阻断剂SP600125对ProMMP-7的表达无明显影响.结论: FⅦa通过与LoVo细胞表面的TF结合诱导ProMMP-7的表达,并呈时间依赖性和剂量依赖性;ERK1/2和P38 MAPKs亚通路参与LoVo细胞TF信号转导通路并与TF/FⅦa调控ProMMP-7表达有关.
关键词： 因子Ⅶa 结直肠肿瘤 基质金属蛋白酶类 丝裂原激活蛋白激酶类 -
基因重组活化凝血因子Ⅶ制品对肝移植术中凝血功能的影响
目的观察基因重组活化凝血因子Ⅶ(rFⅦa)制品对肝移植手术中患者凝血功能的影响.方法20例因终末期肝硬化行背驮式原位肝移植(OLT)的患者,随机分为试验组和对照组,分别于切皮前10分钟单次静注rFⅦa(70μg/kg)、生理盐水.并于注药前(T1)、注药后30分钟(T2)测定患者的凝血酶原时间(PT)、国际标准化比率(INR)、活化部分凝血激酶时间(aPTT)、纤维蛋白原、血小板.观察两组患者凝血参数的变化.结果与对照组相比,试验组的PT(P=0.026)、INR(P=0.029)和aPTT(P=0.032)在T2时段明显降低.而纤维蛋白原和血小板则无明显变化.结论rFⅦa能快速、有效地改善肝移植患者的凝血功能,纠正PT、INR和aPTT比值,进而减少患者术中出血.
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重组人凝血因子Ⅶa治疗16例血液病及异基因造血干细胞移植术后合并中至重度出血患者的疗效观察
目的 观察重组人凝血因子Ⅶa(rFⅦa)对血液病及其异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后出血患者的止血疗效.方法 以2013年5月至2016年5月住院治疗的16例合并中至重度出血的血液病患者为观察对象,非移植组及移植组患者各8例,两组患者应用rFⅦa的用法、用量无明显差异.同时,以同期15例allo-HSCT后发生肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)肠出血患者为对照组(未应用rFⅦa),将其与allo-HSCT后肠道aGVHD肠出血应用rFⅦa患者进行生存比较,总结患者应用rFⅦa治疗的临床疗效.结果 ①非移植组与移植组患者中,rFⅦa止血显效率分别为75.0%(6/8)和37.5%(3/8),显效中位时间分别为38.5和63.0 h,中位总生存(OS)时间分别为201.0和29.0 d,OS率分别为50.0%(4/8)和25.0%(2/8),出血相关死亡率分别为50.0%(2/4)和83.3%(5/6).②16例患者中显效者9例,无效者7例,显效组与无效组患者中,中位OS时间分别为268.0和24.0 d,OS率分别为66.7%(6/9)和0(0/7).③同期肠道aGVHD合并肠出血患者,观察组(6例)与对照组(15例)患者的中位OS时间分别为25.5和20.0 d.结论 血液病患者尤其是allo-HSCT患者出血相关死亡率高,rFⅦa治疗有一定止血疗效;显效组患者OS率较无效组高;allo-HSCT后肠道出血患者采用rFⅦa治疗止血效果不佳的原因可能与移植后导致出血的并发症控制不佳有关.
关键词： 血液病 异基因造血干细胞移植 出血 因子Ⅶa 重组 -
组织因子/活化因子Ⅶ复合物影响人卵巢癌细胞侵袭及转移能力的研究
目的研究组织因子/活化因子Ⅶ(TF/FⅦa)复合物对人卵巢癌细胞体外侵袭能力及体内转移能力的影响.方法①采用分子克隆及基因转染技术构建高效表达TF的人卵巢癌细胞系A2780/TF;②采用Boyden小室法计数FⅦa刺激后A2780、A2780/TF穿透Matrigel迁移到PVPF膜背面的细胞数;③建立人卵巢癌细胞转移的实验动物模型,研究TF对人卵巢癌细胞在裸鼠体内形成转移灶的能力.结果①经分子克隆技术构建得到pcDNA3-TF cDNA重组体;②稳定转染的A2780/TF细胞内TF mRNA水平显著增高:转染细胞为3.99±0.15,未转染细胞为0.97±0.23(P＜0.01);转染细胞表面TF表达也显著增高:转染细胞中约(48.56±9.53)%细胞表面有TF抗原,而未转染细胞中仅(2.73±1.15)%(P＜0.01);③A2780/TF细胞穿膜细胞数为157.3±19.2,经FⅦa刺激后穿膜细胞数显著增多,为447.7土39.4(P＜0.01);与FⅦa和抗TF单抗共孵育的A2780/TF,穿膜细胞数接近刺激前的基础水平;④种植A2780细胞的裸鼠中22.2%可见肺部转移灶,种植A2780/TF细胞的裸鼠中88.9%发生肺转移(P＜0.01).结论①将所构建的TF真核表达载体转入人卵巢癌细胞系,获得稳定、高效表达TF的人卵巢癌细胞系A2780/TF,为研究TF在肿瘤侵袭、转移中的作用及其机制,探索抑癌基因治疗新途径建立了初步的实验基础;②TF可通过与FⅦa形成复合物而增强人卵巢癌细胞的体外侵袭能力及体内转移能力.
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肝移植术患者术前应用重组活化入凝血因子Ⅶa的效果
目的 评价肝移植术患者术前应用重组活化入凝血因子Ⅶa(rFⅦa)的效果.方法 择期行原位肝移植术的终末期肝病患者20例,ASAⅡ或Ⅲ级,Child-Pugh分级B或C级,术前均存在凝血功能障碍,凝血酶原时间(PT)＞20 s.切皮前5 min静脉注射rFⅦa 40～80 μg·kg-1.分别于注药前即刻(T0)、注药后5(T1)、15(T2)、30(T3)、60(T4)、120 min(T5)、无肝期15 min(T6)及新肝期30 min(T7)取颈内静脉血4.5 ml,测定PT、凝血酶原活度(PTA)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、国际标准化比值(INR)、纤维蛋白原(Fib)、D-二聚体(DD)、血小板计数(PLT).结果 与T0比较,PT和INR在T1～6降低,PTA在T1-6增加,APTr在T2～5缩短,TT在T7延长(P＜0.05),各时间点nb、PLT、DD差异无统计学意义(P＞0.05).术中输注浓缩红细胞(11±6)U,出血总量600～4000 ml,其中使用rFⅦa后120min内出血量200～2 400 ml.给药期间未发生过敏反应,术后未发生静脉血栓等并发症.结论 肝移植术前应用rFⅦa可改善患者术中凝血功能,且无明显副作用.
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华法林相关性脑出血
华法林相关性脑出血发病率逐渐升高,早期病死率高达50%.危险因素包括高龄、国际标准化比率>3.5、高血压、卒中史、白质疏松、淀粉样脑血管病、伴随抗血小板治疗等.预后较差,尚无佳治疗.
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慢性荨麻疹患者血浆D二聚体、活化凝血因子Ⅶ及活化凝血因子Ⅻ水平的研究
目的 探讨血浆D二聚体、活化凝血因子Ⅶ(FⅦa)及活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)在慢性荨麻疹(CU)患者中的表达及其与CU发病的关系.方法 对50例CU患者及50例健康对照用干式免疫散射色谱法检测血浆D二聚体水平,用酶联免疫吸附法检测FⅦa及FⅫa的水平,并结合患者病情严重程度情况进行分析.对43例CU患者自体血浆皮肤试验(APST)及41例CU患者作自体血清皮肤试验(ASST)结果与其血浆D二聚体水平进行比较.结果 CU患者血浆中D二聚体及FⅦa的水平均明显高于健康对照组(P＜0.05),前者升高水平与病情严重程度呈正相关(P＜0.05);CU患者FⅫa水平与健康对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).APST(+)患者的D二聚体水平明显高于APST(-)患者(P＜0.05),而ASST(+)患者D二聚体水平与ASST(-)患者比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 凝血机制与CU相关,外源性凝血途径起着作用,针对凝血机制的研究对于CU的病情评估和临床治疗具有一定的意义.
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荨麻疹患者血浆D二聚体、活化凝血因子Ⅶ及组织因子途径抑制物-活性凝血因子X复合物与症状的关系
目的 探讨荨麻疹患者血浆D二聚体、活化凝血因子(FⅦa)、TFPI/Xa水平与症状的关系. 方法 酶联免疫吸附法检测急、慢性荨麻疹患者和健康献血者血浆D二聚体、FⅦa、TFPI/Xa的水平,分析它们之间及其与症状评分、病程的关系. 结果 急性荨麻疹患者的血浆D二聚体水平(450.57 ±242.13)ng/mL高于正常人对照组(266.81±40.68)ng/mL.血浆FⅦa水平(2.23±0.74)ng/mL低于正常人对照组(5.23±1.35)ng/mL,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01).急性荨麻疹患者血浆TFPI/Xa水平(0.87±0.13)nmol/L与正常人对照组(0.88±0.12)nmol/L比较,组间差异无统计学意义(P>0.05).慢性荨麻疹患者的血浆D二聚体水平(593.80±294.04)ng/mL高于正常人对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);慢性荨麻疹患者血浆FⅦa水平(3.98±0.35)ng/mL低于正常人对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.01).慢性荨麻疹患者血浆TFPI/Xa水平(0.87±0.16)nmol/L与正常人对照组比较,组间差异无统计学意义(P>0.05).急性荨麻疹患者D二聚体水平和FⅦa水平低于慢性荨麻疹患者,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).急、慢性荨麻疹患者血浆D二聚体与症状评分旱正相关关系(r=0.68,P<0.01;r=0.82,P<0.01),与病程无明显相关性(P>0.05),FⅦa和TFPI/Xa水平与症状评分关系及病程无明显相关性(P>0.05). 结论 荨麻疹患者存在凝血系统激活和凝血因子消耗及继发性纤溶,提示D二聚体、FⅦa可能与荨麻疹症状有关.
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EGCG对因子Ⅶa促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用及机制
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对因子Ⅶa促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用及机制.方法 用EGCG、因子Ⅶa等处理SW620细胞,应用流式细胞术、Transwell法分别检测细胞增殖周期及迁移能力；Western blotting检测细胞NF-κB抑制蛋白(IκB-α)、核NF-κB (p65/RelA)的蛋白水平变化.结果 EGCG( 100 mg/L)能干预因子Ⅶa对SW620细胞增殖与迁移的促进作用；EGCG能抑制因子Ⅶa对IκB-α表达的下调作用及对核NF-κB (p65/RelA)表达的促进作用.结论 EGCG可能通过干预信号分子IκB-α和NF-κB (p65/RelA)的表达和调节作用,抑制因子Ⅶa对SW620细胞增殖与迁移的促进作用.
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重组因子Ⅶa在出血性疾病中的临床应用进展
1983年Hedner和Kisiel采用灭菌技术从人血浆中纯化出因子Ⅶa,之后将纯化的因子Ⅶa用于2例产生高滴度抗体的血友病A的治疗,出血症状很快控制.随后纯化的因子Ⅶa越来越多用于常规治疗无效且已产生抑制物的血友病的出血治疗,均产生很好的疗效.但此种方法提纯因子Ⅶa需要消耗大量血浆,过程烦琐,重组因子Ⅶa(rfⅦa)技术则很好解决了以上问题.
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组织因子/凝血因子Ⅶa复合物和肿瘤
组织因子(TF )又称为III因子或组织凝血活酶,是分子量为47 kD的单链跨膜糖蛋白,按细胞表面抗原命名为CD142.TF即是FⅦ(FⅦa)在细胞膜表面的受体,又是FⅦa的辅因子,通过胞外区和FⅦ或FⅦa结合而形成具有蛋白酶活性的TF/Ⅶ(Ⅶa)复合物,同时使FⅦ裂解为有活性的FⅦa,TF/Ⅶa复合物通过活化因子Ⅹ(FⅩ)和因子Ⅸ(FⅨ)来启动凝血过程,在生理性止血过程中发挥着重要的作用.近几年研究发现TF与FⅦ结合后,可通过信号转导影响肿瘤组织的血管形成、肿瘤生长、侵袭和转移,在炎症、动脉粥样斑块形成及胚胎发育等多种生理、病理过程中都有一定作用[1].
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FⅦa依赖TF及FX活化PAR2上调SW 620细胞IL-8表达
目的 探讨凝血FⅦa、Ⅹ、Ⅱa在蛋白酶激活受体2(PAR2)活化及诱导SW620细胞IL-8表达中的作用.方法 用PAR2激动剂(PAR2-AP)、FⅦa、Ⅹ、Ⅱa等不同刺激物处理SW 620细胞,以ELISA法检测细胞上清IL-8水平,以实时定量PCR检测细胞IL-8 mRNA表达.结果 血浆浓度的Ⅶa需在FⅩ存在下才能促进细胞IL-8表达;单克隆抗TF及抗PAR2抗体均可抑制FⅦa的作用;FⅡa轻微下调细胞IL-8表达,Hirudin、抗PAR1及抗PAR2抗体均可阻断此作用.结论 TF-FⅦa及TF-FⅦa-FⅩa复合物,而非FⅡa,活化PAR2上调SW 620细胞IL-8表达,从而促进细胞增殖及迁移.
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组织因子与FⅦa的研究进展
1组织因子启动凝血概述众所周知,血管损伤后,由于细胞表面作为血浆丝氨酸蛋白酶辅因子的组织因子(TF)暴露,血液内的凝血系统在局部被激活而引起凝血.TF除了在止血方面的作用外,还与炎症有关的败血症、许多心血管疾病如动脉粥样硬化(AS)、急性冠脉综合征以及某些疾病的血栓栓塞性并发症密切相关.因此,FⅦa/TF已成为医学领域的研究热点之一.
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慢性荨麻疹患儿血清25-OH-VD、FⅦa、FⅫa及D-D表达及意义
目的 研究血清25羟维生素D(25-OH-VD)、活化凝血因子 Ⅶ(FⅦa)、活化凝血因子 Ⅻ(FⅫa)及D-二聚体(D-D)在慢性荨麻疹患儿中的表达及其临床意义.方法 选取2016年9月至2017年5月本院收治的慢性荨麻疹患儿78例(慢性荨麻疹组)、慢性荨麻疹恢复期患儿62例(慢性荨麻疹恢复期组)及同期健康体检儿童71例(健康对照组)作为研究对象.采用酶联免疫吸附法检测3组研究对象血清25-OH-VD、FⅦa、FⅫa,采用干式免疫散射色谱法检测血清D-D水平.结合病情对慢性荨麻疹患儿血清D-D水平进行分析,并研究各指标的相关性.结果 慢性荨麻疹组患儿血清FⅦa及D-D水平均显著高于慢性荨麻疹恢复期组和健康对照组,25-OH-VD水平均显著低于慢性荨麻疹恢复期组和健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);3组研究对象血清FⅫa水平相当,差异无统计学意义(P>0.05).随着慢性荨麻疹患儿血清D-D水平升高,患儿慢性荨麻疹患病程度具有随之加重的趋势.慢性荨麻疹患儿血清D-D水平与25-OH-VD水平呈负相关(r=-0.335,P<0.05),与FⅦa呈正相关(r=0.225,P<0.05),与FⅫa无关(r=0.058,P>0.05).结论 慢性荨麻疹与血清25-OH-VD水平及凝血机制存在关联性,且外源性凝血机制在慢性荨麻疹的发生 、发展中具有重要作用.血清D-D水平可对慢性荨麻疹病情程度的界定提供一定的参考价值.
