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一种生物可吸收性形状记忆聚合物的生物相容性研究
目的 步探讨生物可吸收性形状记忆聚合物(biodegradable shape-memory polymer,BSMP)的生物相容性.方法 体外试验:将鼠胚胎成纤维细胞与BSMP共培养,观察细胞形态特征,并通过MTT检测评价BSMP的体外生物相容性.体内实验:将BSMP植入新西兰兔皮下与肌肉内,术后不同时间点观察局部与宏观表现后取材送组织学检查,并检测材料埋入肌肉后的重量丢失百分比,综合评价BSMP的体内生物相容性.结果 与BSMP共培养的BSMP组鼠胚胎成纤维细胞与未与BSMP共培养的对照组相比,生长状态良好,MTT检测无明显差异(P>0.05);皮内植入BSMP 24、48、72 h后BSMP组及对照组手术部位均未发现红斑或水肿,皮内刺激检测的评分是0,且BSMP植入皮内后的第2周及第4周BSMP组及对照组的组织学观察没有发现明显的栓塞、水肿、坏死及炎性介质反应;BSMP植入肌肉后24周的降解总量达8.4%.结论 BSMP生物相容性良好,体内降解速率稳定,是一种良好的聚合材料.
关键词： 生物可吸收形状记忆聚合物 生物相容性 鼠胚胎成纤维细胞 -
高效制备昆明鼠胚胎成纤维细胞饲养层
背景:小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层是胚胎干细胞培养常用的方法,能有效抑制胚胎干细胞分化并促进其增殖,但其制备过程繁琐,工作量大,准备周期长.目的:探索建立小鼠胚胎成纤维细胞饲养层简单、高效的培养体系.方法:取13.5 d 胎龄胎鼠用改良组织块法及简化酶消化法分离培养原代成纤维细胞,倒置显微镜下观察不同方法培养的原代和传代鼠胚胎成纤维细胞的生长形态、结构及细胞数量变化.收集鼠胚胎成纤维细胞进行冻存,复苏后细胞经不同浓度作用时间的丝裂霉素C 处理,制备饲养层.结果与结论:两种简化方法培养的原代鼠胚胎成纤维细胞生长状态良好,得到高效优质足量细胞,操作过程简单,省去了多次消化、离心、细胞计数等繁琐操作,均适宜于鼠胚胎成纤维细胞的原代培养.简化复苏法复苏后的细胞,按其生长汇合情况,以丝裂霉素C 10 mg/L 作用1.5～2.0 h 或1 mg/L 培养过夜,省时并可获得细胞生长状态佳的饲养层.
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羟丁基壳聚糖的制备及其与鼠胚胎成纤维细胞的生物相容性研究
目的 制备温敏型壳聚糖衍生物羟丁基壳聚糖(Hydroxybutyl chitosan,HBC),研究鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embuonic fibroblasts,MEF)与HBC的相容性.探讨羟丁基壳聚糖作为组织工程材料的可行性.方法 对壳聚糖化学改性制备HBC,研究其佳制备条件.使用不同溶剂对HBC进行溶解实验;利用红外光谱、扫描电镜对产物结构进行观察.从小鼠胚胎中分离培养MEF;MTT法测定HBC对MEF活性的影响.结果 制备的4种HBC均能溶于水,55℃反应14 h的HBC 4水溶性较好.HBC溶液在37℃具有明显的溶胶-凝胶的转变,通过物理交联形成凝胶并可逆.不同反应条件下制得的4种HBC浸提液对MEF细胞的毒性均在0级或1级,表现出良好的生物相容性.结论 成功制备羟HBC,HBC具有良好的温度敏感性及体温(37℃)下凝胶的特性,与MEF生物相容性良好,是一种具有应用前景的新型组织工程材料.
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鼠角膜缘干细胞3D共培养模型的建立及生存率、表型维持
目的 探讨纤维蛋白凝胶、鼠胚胎成纤维细胞与鼠角膜缘干细胞的3D共培养模型是否有助于角膜缘干细胞的生存率提高和细胞表型的维持.方法 细胞采用96孔圆底培养板培养,并分为3组:①鼠角膜缘干细胞单独培养组(A组),含3×104个角膜缘干细胞;(2)鼠角膜缘干细胞与纤维蛋白共培养组(B组),将纤维蛋白原配成10 mg/mL的磷酸盐溶液,与鼠角膜缘干细胞混合成3×105/mL的混合悬液,取100 μL 细胞悬液培养;③鼠角膜缘干细胞、纤维蛋白和鼠胚胎成纤维细胞共培养组(C组),将鼠角膜缘干细胞与鼠胚胎成纤维细胞以1:0.5混合,配成含有10 mg/mL纤维蛋白原的4.5×105/mL混合悬液,取100 μL 进行培养.于培养后4、24和48 h,以Annexin Ⅴ染色,采用流式细胞仪检测其细胞生存率和凋亡率.以Western blot检测角膜缘干细胞分化蛋白Keratin K3/K76的表达.结果 角膜缘干细胞在4、24 和48 h的生存率高者为C组,分别是(95.7±2.0)%、(95.1±1.2)% 和(92.0±1.7)%;其次为B组,分别是(95.2±3.0)%、(89.8±1.5)% 和(80.0±0.8)%;低为A组,分别是(95.0±1.2)%,(84.5±1.2)% 和(70.0±0.9)%.细胞凋亡率的趋势与此相反.角膜干细胞分化蛋白的表达强度,在4 h时各组之间的表达强度无统计学差异,但在48 h时,C组的表达强度(70±4)明显低于B组(97±6)和A组(102±4).结论 鼠角膜缘干细胞与纤维蛋白和鼠胚胎成纤维细胞的共同培养模式有助于提高角膜缘干细胞在3D培养中的存活率,可减少鼠角膜缘干细胞的分化和有益于其表型的维持.
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人胚胎干细胞和诱导性多功能干细胞饲养层细胞的制备方法
目的 建立一种能维持人胚胎干细胞(ESC)和诱导性多功能干细胞(iPSC)生长的饲养层细胞的标准制备方法.方法 选取受孕12.5～14.5 d的CF-1雌鼠,原代培养的鼠胚胎成纤维细胞(MEF)经丝裂霉素C处理后作为饲养层细胞,观察其维持人ESC和iPSC的生长情况;同时研究不同培养器具所需细胞数量,制备高质量饲养层细胞.结果 经丝裂霉素C处理后,MEF可很好维持人ESC和iPSC的生长,使其保持自我更新能力和未分化状态;控制铺板的细胞密度,可得到高质量饲养层细胞.结论 本实验得到的饲养层细胞能很好支持人ESC和iPSC生长,可作为饲养层细胞制备的标准方法使用.
关键词： 人胚胎干细胞 人诱导性多功能干细胞 饲养层细胞 鼠胚胎成纤维细胞
