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PTEN和p27Kip1共表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响
目的通过腺病毒介导转染前列腺癌PC-3细胞,探讨人10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白类似物(PTEN)和p27Kip1对肿瘤细胞增殖和凋亡等方面的影响及二者的协同作用. 方法构建携带人PTEN和p27Kip1基因的腺病毒载体,体外转染PC-3细胞,通过RT-PCR、Western blot检测目的基因不同水平的表达.采用细胞生长试验、流式细胞仪检测PC-3转染前后细胞增殖、细胞周期和早期凋亡率的变化.结果病毒滴度Ad-PTEN为1.8×107 pfu/ml、Ad-p27Kip1为1.2×109 pfu/ml,RT-PCR检测有PTEN-mRNA(462 bp)和p27Kip1-mRNA (320 bp),Western blot检测有PTEN蛋白(60 KD)和P27蛋白(27 KD)特异表达,可明显抑制PC-3细胞的增殖,诱导细胞凋亡,联合基因治疗组与单基因组相比差异有显著意义.结论成功构建携带人PTEN和p27Kip1的重组腺病毒载体,在前列腺癌细胞株PC-3得到了稳定、特异的高表达,联合基因疗法有望成为治疗前列腺癌的有效方法.
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脊髓神经元PTEN蛋白在大鼠糖尿病神经痛中的作用
目的 探讨脊髓神经元第10号染色体同源缺失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)蛋白在大鼠糖尿病神经痛中的作用.方法 雄性SD大鼠,2月龄,体重180 ～ 200 g,采用腹腔注射1％链脲佐菌素(STZ) 60 mg/kg的方法制备糖尿病模型.取糖尿病神经痛大鼠16只,采用随机数字表法,将其分为2组(n=8):糖尿病神经痛组(DNP组)和糖尿病神经痛+PTEN蛋白抑制剂bpv组(DPN-bpv组);另取16只大鼠,采用随机数字表法,将其分为2组(n=8):对照组(C组)和bpv组.DNP-bpv和bpv组于注射STZ后14-28 d时腹腔注射bpv 0.2 mg/kg,1次/d.分别于注射STZ前(T1)、注射STZ后2、7、14、21、28 d(T2-6)时测定机械缩足反应阈(MWT),测定MWT后处死大鼠,取L45脊髓组织,采用ELISA法检测PTEN蛋白活性,采用Western blot法检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)(s473)磷酸化水平.结果 与C组比较,DNP组和DNP-bpv组T4-6时MWT降低,脊髓PTEN蛋白活性和Akt(s473)磷酸化水平升高(P＜0.05或0.01);与DNP组比较,DNP-bpv组T6时MWT升高,脊髓PTEN蛋白活性和Akt(s473)磷酸化水平降低(P＜0.05).结论 脊髓神经元PTEN蛋白参与了大鼠糖尿病神经痛的维持.
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淋巴瘤细胞10号染色体基因表达的研究
目的 研究淋巴结淋巴瘤细胞不同染色体基因表达情况.方法 将淋巴瘤淋巴结标本液氮速冻,快速冷冻切片,使用激光显微切割技术分离淋巴细胞,提取淋巴细胞中的mRNA与表达谱芯片杂交,通过信号扫描、处理后获得表达基因杂交信号强度.每基因设11～20对探针.杂交信号与错配探针对比,扣除背景值后,使用Wilcoxon符号秩和检验选取与错配杂交信号差异有统计学意义的基因作为分析结果.结果 从快速冷冻保存的淋巴瘤标本中提取了RNA,使用表达谱芯片进行研究,基因表达密度分析显示10号染色体上的基因表达情况与编码基因分布情况有明显差异,10号染色体编码的117条基因在淋巴瘤细胞中表达,且根据胞内定位、基因功能和基因所属的代谢通路3种分类方法对所得基因进行分类分析.结论使用表达谱芯片研究了淋巴瘤细胞不同染色体的基因表达情况,发现10号染色体编码的基因有很大差异.
