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小干扰RNA阻抑人端粒酶催化亚基基因表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响
为研究RNA干扰对肾癌基因治疗作用,2004年本研究以针对人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase ,hTERT)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染肾透明细胞癌株786-0细胞,观察其对786-0细胞hTERT表达及增殖、凋亡的影响.
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人端粒酶反转录酶基因转染人胚胎大脑皮质神经元的凋亡
背景：人端粒酶反转录酶重组腺病毒转染原代培养的人胚胎大脑皮质神经元，可以促进细胞生存，抑制凋亡。
目的：观察人端粒酶反转录酶对β淀粉样蛋白(amyloidβ-protein，Aβ)诱导人胚胎大脑皮质神经元凋亡的影响。
方法：人胚胎大脑皮质神经元原代培养后，分为3组：对照组、Aβ25-35组和人端粒酶反转录酶组。Aβ25-35组和人端粒酶反转录酶组细胞在培养144 h后，用Aβ25-355μmol/L干预24 h。人端粒酶反转录酶组在Aβ25-355μmol/L干预72 h进行人端粒酶反转录酶基因转染。
结果与结论：原代培养的人胚胎大脑皮质神经元培养7d后，出现凋亡细胞，而Aβ25-35干预后使凋亡细胞数量增加，而人端粒酶反转录酶可防止Aβ25-35诱导的人胚胎大脑皮质神经元的凋亡。 -
端粒酶催化亚基hTERT在肿瘤治疗中的研究进展
人端粒酶催化亚基hTERT基因转录的从头激活是端粒酶活化的限速步骤,受到多种癌基因和抑癌基因产物的精密调控.构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体,使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达,有望用于肿瘤基因治疗.本文首先简单介绍了hTERT蛋白的结构和表达调控机制,然后对其在肿瘤发生发展中的生物治疗的功能作一简要综述.
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联合干扰人端粒酶催化亚基对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响
目的 探讨基因的联合干扰对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响.方法 将转染细胞分为共四组:psi-control对照组(A组)、psi-粒酶催化亚基(hTERT)1组(B组)、psi-hTERT1和psi-hTERT2共转染组(C组)、psi-hTERT1和psi-端粒酶调节相关蛋白(TRAP)1共转染组(D组).采用RT-PCR及Westem blot分别检测hTERT mRNA和蛋白表达,端粒重复序列扩增-PCR法检测端粒酶活性,MTT法检测SGC-7901细胞增殖.结果 与A组相比,B组、C组hTERT mRNA和蛋白表达、端粒酶活性降低(P＜0.05),细胞增殖减慢,细胞凋亡增加;而D组各指标与A组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 联合干扰的效果可能与剂量和目的 基因有关.
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胃癌组织端粒酶活性与催化亚基hTERT表达的关系
研究胃癌、胃黏膜肠化生及正常黏膜组织端粒酶活性与人端粒酶催化亚基(hTERT)表达的相关性及端粒酶激活在胃癌发生中的作用.方法:通过端粒重复序列扩增(TRAP)和逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)方法测定3种胃癌细胞株、26例胃癌、10例胃黏膜肠化生和36例正常胃黏膜组织标本端粒酶活性和hTERT表达.结果:3种胃癌细胞株、24例胃癌组织有端粒酶活性;4例肠化生端粒酶活性较弱;36例正常胃黏膜标本未测到端粒酶活性.hTERT在26例胃癌组织、5例肠化胃黏膜中表达;正常胃黏膜无表达.端粒酶活性、hTERT表达与肿瘤的分期和病理分级无关.结论:hTERT在肿瘤形成的早期阶段表达,端粒酶的激活是胃癌形成的关键步骤.
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大肠癌端粒酶活性的意义及其与人端粒酶催化亚基表达的相关性
目的:研究大肠癌组织中端粒酶活性在大肠癌发生发展中的作用及其与人端粒酶催化亚基(hTERT)表达的相关性.方法:运用PCR-TRAP-ELISA及免疫组织化学方法(免疫组化法)对30例大肠癌及相应的癌旁组织、正常大肠组织及20例大肠腺瘤性息肉组织中端粒酶活性和hTERT表达进行检测.结果:①端粒酶在大肠癌组织中的阳性表达明显高于癌旁组织、正常大肠黏膜及大肠腺瘤性息肉(P<0.05);②大肠癌组织端粒酶与淋巴结转移关系密切,伴淋巴结转移大肠癌端粒酶阳性表达率明显高于无淋巴结转移者(P<0.01);③相关分析显示端粒酶活性与hTERT表达存在相关性(P<0.05).结论:端粒酶在大肠癌的发生发展过程中可能起着重要作用,hTERT的表达与端粒酶活性密切相关.
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苦参碱对腺样囊性癌细胞周期阻滞和端粒酶催化亚基表达的影响
目的 观察中药苦参有效成分苦参碱对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的细胞周期及端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响.方法 体外培养ACC-M细胞,用不同浓度的苦参碱对体外培养的ACC-M细胞进行干预,以流式细胞仪检测对照组和不同浓度(0.25、0.50、0.75、1.00 mg·mL-1)苦参碱作用不同时间后细胞周期的变化;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测苦参碱作用48 h后细胞hTERT mRNA的表达改变;流式细胞术定量检测hTERT蛋白的表达变化.结果 苦参碱作用后明显抑制ACC-M细胞的增殖,使ACC-M细胞周期阻滞于Go/G1期,并与药物浓度和作用时间呈正相关;苦参碱作用后hTERT基因和蛋白表达明显下降.结论 苦参碱对ACC-M细胞有明显细胞周期阻滞作用,同时显著下调hTERT基因表达.细胞周期阻滞作用可能与苦参碱下调hTERT基因表达有关.
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人端粒酶催化亚单位hTERT基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
为构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)重组腺病毒载体,采用PCR法从pCI-neo-hTERT中钓取hTERT全长cDNA,定向克隆到pADTrack-CMV穿梭质粒.通过分步转化把pADEasy-1和重组穿梭质粒(pADTrack-hTERT)转化入BJ5183菌进行同源重组.hTERT重组腺病毒骨架质粒(pAD-hTERT)转染HEK293细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,收获重组腺病毒(AD-hTERT)提取DNA行PCR鉴定并扩增.经PCR、酶切和测序鉴定证实hTERT的cDNA正确插入穿梭质粒且与pADEasy-1正确同源重组;PCR鉴定及报告基因分析说明hTERT重组腺病毒包装正确且具有较好的感染活力.结果表明本研究已成功构建了hTERT重组腺病毒,为hTERT的神经保护作用研究奠定了基础.
关键词： Alzheimer病 端粒酶 人端粒酶催化亚基 重组腺病毒
