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阴道翻新术加用猪小肠黏膜下层补片的临床效果及安全性
目的 探讨阴道翻新术(VRR)中首次加用猪小肠黏膜下层(SIS)补片的临床疗效.方法 对18例Ⅵ度阴道松弛者.阴道前壁横向折叠缩窄缝合膀胱外筋膜,7号丝线缝合盆筋膜腱弓、膀胱筋膜、SIS补片和阴道黏膜下组织,两侧各3针固定.阴道后壁横向折叠缩窄缝合直肠阴道隔,7号丝线缝合盆筋膜腱弓、直肠筋膜、SIS补片和阴道黏膜下组织,两侧各3针固定.丝线缝合断裂的肛提肌、肛门括约肌浅肌群、会阴浅横肌和球海绵体肌.失败为阴道横径大于3.5 cm.结果 术后随访中位数13个月.18例外阴道横径、生殖道裂孔(gh)长度和会阴体(pb)长度改变差异有统计学意义(P＜0.01).13例盆底器官脱垂/尿失禁性功能问卷(PISQ-12)评分提高差异有统计学意义(P＜0.01),18例盆底功能障碍问卷(PFDI-20)和盆底功能影响问卷(PFIQ-7)评分下降差异有统计学意义(P＜0.01).1例阴道直径4.0 cm,手术失败.5例因其他原因没有性生活.没有感染、侵蚀和排斥.没有压力性尿失禁.结论 解剖学修复损伤的盆底组织是VRR有效的手术方法.加用SIS补片可以增加阴道强度,减少瘢痕形成,特别是减少复发.
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纳米银-猪小肠黏膜下层与聚丙烯网片修复兔腹壁损伤对比
背景:因为自体取材修复腹壁缺损是以伤治伤,而且取材有限,限制了临床应用,因此寻找理想的腹壁替代材料至关重要.目的:比较复合修复材料纳米银-猪小肠黏膜下层与聚丙烯网片在腹壁缺损中的应用效果.方法:大耳兔制备兔腹壁损伤实验模型后随机数字表法分为2组,实验组应用复合材料修复腹壁缺损;对照组应用聚丙烯网片修复腹壁缺损.观察修复后动物一般恢复情况,于修复后1,2,4个月进行腹壁抗张强度测定、腹腔内粘连评分以及组织学检测.结果与结论:相同时间点实验组粘连度显著低于对照组(P < 0.05);各组4个月腹腔粘连度均较1个月增加(P < 0.05).两组抗拉力强度修复后4个月均高于修复后1个月(P < 0.01);实验组修复后1,2个月抗拉力强度高于对照组(P < 0.05),到第4个月时,修补处强度几乎相等(P > 0.05).提示两种修复材料均具有良好的修复能力,修复后均能维持足够的腹壁抗张强度.但复合材料在组织相容性、抗腹腔粘连方面优于聚丙烯网片.自制的纳米银-猪小肠黏膜下层补料无细胞毒性,作为组织工程材料修复腹壁损伤具有可行性.
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猪小肠黏膜下层支架复合兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨膜对T淋巴细胞增殖的影响
背景:小肠黏膜下层为无细胞胶原层.含有多种生长因子,主要由Ⅰ、Ⅲ型纤维胶原蛋白构成,与骨膜相似.目的;观察猪小肠黏膜下层支架构建兔组织工程骨膜对兔外周血T淋巴细胞增殖的影响,探讨兔组织工程骨膜的免疫学特性.设计、时间及地点:体外细胞学对比观察,于2005-09/2007-03在兰州大学附属第二医院骨科研究所完成.材料:健康家猪小肠,出生20 d的新西兰纯种兔4只.方法:采用沉淀法以猪小肠黏膜下层作为支架材料,复合培养兔骨髓间充质干细胞成骨诱导细胞构建兔组织工程骨膜.分离兔外周血T淋巴细胞作为单向混合淋巴细胞反应中的效应细胞.实验分3个刺激组:成骨诱导细胞组(间充质干细胞成骨诱导14 d)、组织工程骨膜组(间充质干细胞成骨诱导14 d复合小肠黏膜下层支架)、单纯小肠黏膜下层组(单纯小肠黏膜下层支架),分别加入单相混合淋巴细胞反应液中.主要观察指标:MTT法体外检测各组对外周血T淋巴细胞增殖水平的影响.结果:成骨诱导细胞组、组织工程骨膜组、单纯小肠黏膜下层组的淋巴细胞增殖抑制率分别为(11±3)%,(23±5)%,(48±10)%.成骨诱导细胞组和组织工程骨膜组淋巴细胞增殖抑制率低于单纯小肠黏膜下层组,差异有显著性意义(P<0.01),成骨诱导细胞组与兔组织工程骨膜组比较差异无显著性意义(P>0.05).结论:构建的组织工程骨膜可抑制兔外周血T淋巴细胞增殖,组织工程骨膜与单纯间充质干细胞成骨诱导细胞同样具有调节免疫作用.
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转染碱性成纤维细胞生长因子骨髓间充质干细胞复合小肠黏膜下层构建的组织工程皮肤
背景:研究证实,小肠黏膜下层不存在免疫原性,不会引起异种移植中常见的排斥反应,是一种比较理想的人工真皮替代物.目的:通过基因转染的方法将碱性成纤维细胞生长因子基因转染至骨髓间充质干细胞,并复合猪小肠黏膜下层构建组织工程皮肤.方法:日本大耳兔骨髓间充质干细胞进行体外培养扩增后,通过pCDNA3.1质粒将碱性成纤维细胞生长因子基因转染至生长状态良好的骨髓间充质干细胞,并将转染后的细胞接种于制备好的猪小肠黏膜下层上,进行体外联合培养,构建组织工程皮肤.观察细胞生长情况,流式细胞术检测骨髓间充质干细胞表型,WesternBIot检测pCDNA-bFGF真核表达载体转染兔骨髓间充质干细胞的结果,并观察组织工程皮肤的结构.结果与结论:传代后骨髓间充质干细胞生长迅速,呈长梭形,形态良好.细胞的表面抗原CD90、CD44有阳性表达,而CD45为阴性.碱性成纤维细胞生长因子基因转染入兔骨髓基质干细胞并能稳定表达,转染后的骨髓间充质干细胞在猪小肠黏膜下层中生长良好,可体外构建组织工程皮肤.
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注射型猪小肠黏膜下层与脂肪间充质干细胞的体外共培养
背景：经脱细胞处理的猪小肠黏膜下层是一种具有生物活性的细胞外基质，主要由胶原、糖蛋白、蛋白多糖等组成，富含胶原、氨基葡聚糖和各种生长因子，这些组分在促进组织细胞的分化和快速增殖中发挥了重要作用。
目的：制备可注射型猪小肠黏膜下层，观察其与大鼠脂肪间充质干细胞的体外共培养情况。
方法：制备可注射型猪小肠黏膜下层与SD大鼠脂肪间充质干细胞。①CCK-8法检测细胞增殖：将第3代脂肪间充质干细胞接种到可注射型猪小肠黏膜下层上(实验组)，以正常培养的细胞为对照组，培养1，3，5，7 d观察细胞增殖；②Live/dead染色法检测细胞存活：分别以猪小肠黏膜下层浸提液(实验组)与完全培养基培养(对照组)第3代脂肪间充质干细胞，培养1，3，5，7 d观察细胞存活。
结果与结论：①扫描电镜观察结果：脂肪间充质干细胞能在材料上很好黏附，呈椭圆形和条索状生长；②细胞增殖结果：实验组培养1，5 d的细胞A值高于对照组(P<0.05)；③细胞存活：随时间延长，两组中细胞数量均呈上升趋势，共培养第1天时，两组细胞基本全部存活，随后可见两组均有死细胞出现，两组死细胞数在各时间点无明显差别；④结果表明：可注射型猪小肠黏膜下层具有良好的细胞相容性。 -
两种不同生物补片对感染性腹壁缺损患者的疗效
目的：探讨两种不同生物补片治疗感染性腹壁缺损患者的效果。方法将37例感染性腹部缺损患者采用随机数字表法分为治疗组（n＝18）和对照组（n＝19），治疗组使用猪小肠黏膜下层（SIS）生物补片治疗，对照组使用人体真皮脱皮细胞基质（HDM）补片治疗，观察两组患者的治疗效果和并发症发生情况。结果治疗组患者疼痛评分、住院时长和引流管保留时长明显优于对照组，差异有统计学意义（t＝9．224、18．486、13．632，P均＜0．05）。治疗组皮下积液和感染的发生率明显低于对照组，差异有统计学意义（χ2＝5．482、4．251，P均＜0．05）；腹壁疝、腹壁膨出、瘘、肠梗阻发生率两组差异不明显（χ2＝3．324、2．931、3．324、3．057，P＞0．05）。对两组患者进行3－6个月随访，治疗组的复发率为11．11％（2／18），对照组的复发率为26．32％（5／19），差异无统计学意义（χ2＝2．931，P＞0．05）。结论 SIS生物补片临床应用效果较好，值得推广。
关键词： 生物补片 猪小肠黏膜下层 人体真皮脱皮细胞基质 腹壁缺损 -
猪小肠黏膜下层细胞外基质促进肝细胞活力和功能基因表达的研究
目的 探讨猪小肠黏膜下层细胞外基质(porcine small intestinal submucosa extracellular matrix,PSISM)对肝细胞活力及相关基因表达的调控,为PSISM应用于肝脏组织工程提供实验依据.方法 实验分为两部分.①取PSISM添加至含10％FBS的H-DMEM培养基中,制备终浓度为50、100、200 μtg/mL的PSISM培养基;将大鼠肝细胞系BRL细胞分别用以上浓度PSISM培养基培养(A1、B1、C1组),以单纯H-DMEM培养基培养作为对照(D1组).②取PSISM溶解于含0.1 mol/L NaOH的PBS无菌溶液中,调整溶液浓度为1％、2％、3％,制备PSISM凝胶;将BRL细胞分别接种于以上浓度PSISM凝胶进行培养(A2、B2、C2组),鼠尾Ⅰ型胶原凝胶作为对照(D2组).培养后第1、3、5天,采用Live/Dead荧光染色观察细胞形态及存活情况,细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测肝细胞特异基因白蛋白(albumin,ALB)、细胞角蛋白18 (cytokeratin 18,CK18)和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的表达.结果 Live/Dead荧光染色显示各组细胞均存活良好.细胞活力检测显示,PSISM培养基培养后,第5天C1组吸光度(A)值显著高于D1组(P＜0.05),其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);PSISM凝胶培养后,A2、B2、C2组第3天和第5天A值显著高于D2组(P＜0.05),A2组第5天A值显著高于B2、C2组(P＜0.05),其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).实时荧光定量PCR检测显示,A1、B1、C1组ALB、CK18基因相对表达量较D1组显著增高(P＜0.05)、AFP基因相对表达量降低(P＜0.05),C1组CK18基因相对表达量显著低于A1、B1组(P＜0.05);A2、B2、C2组ALB、CK18基因相对表达量较D2组显著增高(P＜0.05)、AFP基因相对表达量降低(P＜0.05),A2组CK18基因相对表达量显著高于B2组(P＜0.05)、AFP基因相对表达量显著低于C2组(P＜0.05).其余各组间各基因相对量表达比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 PSISM无毒性,对肝细胞有良好相容性,能促进肝细胞活力和功能基因表达,有望作为细胞培养添加物或细胞移植载体用于肝脏组织工程.
