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白色念珠菌耐药株CYP51基因突变热点探讨
目的探讨耐唑类药物白色念珠菌CYP51基因突变发生热点. 方法从复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)患者分离出白色念珠菌,采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)公布的酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案(M-27方案)进行体外药敏试验,分离出氟康唑(FLC)及伊曲康唑(ITC)的耐药株;根据PCR-SSCP分析结果确定CYP51突变热点是1 364～1 774 bp之间,随机选择12株耐FCZ(MIC≥64 μg/ml)及ICZ (MIC≥16 μg/ml)的白色念珠菌用D1～D2、E1～E2 2对特异引物进行PCR扩增,将其产物测序,并与NCBI网站提供的白色念珠菌参考株进行比对、分析. 结果 12株耐FLC、ITC的白色念珠菌,扩增CYP51基因片段长度包括突变热点在内的667对碱基,即从1 108～1 774 bp;在12株菌当中,共发现13个位点38个碱基突变,突变频率高的位点是第1 587位中腺嘌呤(A)被鸟嘌呤(G)取代;37个碱基突变没有引起氨基酸的改变,为无意义突变,只有1 609位的鸟嘌呤(G)被腺嘌呤(A)所取代,导致第488位的缬氨酸被异亮氨酸取代(V488I). 结论 CYP51基因突变是白色念珠菌对唑类抗真菌药物耐药机制之一;CYP51基因突变热点在1 364～1 774 bp之间,但92.3%的碱基突变是无意突变.
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慢性应激致卵巢早衰大鼠C3与CYP51蛋白表达水平比较
目的:制作慢性应激致卵巢早衰大鼠模型并用中药木尼孜其合剂进行药物干预,检测各组大鼠C3与CYP51蛋白表达,为治疗慢性应激型致POF提供依据.方法:选用90只性成熟Wistar雌鼠,随机选取10只设为正常组,其余80只为慢性应激模型组,模型建成之后从中筛选出成卵巢早衰者分为POF模型组(POF组)及POF药物干预高、中、低剂量组.用免疫组织化学技术检测卵巢中C3与CYP51蛋白表达.结果:C3蛋白主要表达在颗粒层细胞及卵泡液中,POF组大鼠较C组表达显著升高(P<0.05),各药物干预组在不同程度上能够降低其表达;CYP51蛋白在各组主要表达在间质以及黄体中,POF组大鼠较C组表达显著下降(P<0.05),各药物干预组在不同程度上能够降升高其表达.结论:慢性应激能够导致POF的发生;POF模型卵巢结构及形态的变化及炎性反应的出现可能是促进POF的重要因素之一;中药木尼孜其合剂可能通过下调C3蛋白、上调CYP51蛋白从而改善慢性应激型卵巢早衰大鼠的卵巢功能.
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曲霉菌对唑类抗真菌药物的耐药机制研究进展
侵袭性曲霉病是由致病曲霉菌引起的危及生命的真菌感染,主要致病菌为烟曲霉,而唑类抗真菌药物是临床治疗的首选.目前己上市的唑类抗真菌药物包括伊曲康唑,伏立康唑,泊沙康唑和伊沙康唑.然而,流行病学研究发现曲霉菌对唑类抗真菌药物的耐药率呈逐年上升趋势,给临床治疗造成了威胁.其中,Cyp51A蛋白突变、外排系统高表达以及环境耐药机制等多种因素都参与唑类抗真菌药物的耐药.因此,本文综述近年来有关曲霉菌对唑类抗真菌药物的耐药机制,以期为耐药监测、耐药菌控制和新药研发提供理论依据.
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同位素掺入法测定耐药白念珠菌CYP51酶活性
目的通过同位素掺入法测定耐药白念珠菌CYP51酶活性.方法分别用[1-14C]乙酸整体细胞掺入实验和离细胞酶的[2-14C]甲羟戊酸掺入实验,再经薄层色谱和液体闪烁计数,计算氟康唑对真菌细胞膜麦角甾醇生物合成的半数抑制浓度IC50.结果耐药菌的IC50值有不同程度的提高,与敏感株相比提高显著.但不同菌株结果有差异.结论用同位素掺入法测定耐药白念珠菌CYP51酶活性,发现CYP51酶对氟康唑的敏感性有显著性差异.为真菌耐药性的研究和抗真菌药物的临床应用提供了一定的参考.
