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微囊化人头皮毛乳头细胞诱导小鼠耳毛囊再生的研究
目的观察人头皮毛乳头细胞海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)微囊是否具备诱导小鼠耳部毛囊再生的功能;寻找理想的微囊直径.方法以APA微囊包裹体外分离培养的人头皮毛乳头细胞;将毛乳头细胞微囊移植至小鼠耳部皮下,6周后局部取材行组织学检查;共聚焦显微镜下观察葡聚糖-荧光素在APA微囊中的扩散速度和扩散方式,并对比相同时间、不同直径的APA微囊中葡聚糖-荧光素的强度,综合分析确定佳的微囊直径.结果组织学检查显示:移植部位皮下有密集的同心圆状毛囊结构形成,其数量、大小、分化程度等与对照组明显不同.荧光素以同心圆状、逐层渗透的方式向APA微囊中扩散;相同时间内荧光强度比较:小囊组＞中囊组＞大囊组.结论微囊化毛乳头细胞具备诱导毛囊再生的生理功能;微囊理想的直径是400μm.
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小鼠毛囊再生与胸腺素β4的促进效应
背景：近年来研究表明，胸腺素β4与毛囊的生长发育和毛发的生长周期有着密切关系，但其作用机制尚不清楚。
目的：探讨胸腺素β4通过Wnt信号通路作用于毛囊干细胞对毛囊再生的促进作用。
方法：将实验小鼠随机分为低剂量胸腺素β4组、高剂量胸腺素β4组和对照组，使用松香/石蜡混合制剂建立脱毛模型。低剂量胸腺素β4组和高剂量胸腺素β4组给药浓度分别为0.3μg/50μL和3μg/50μL，对照组给予等量PBS，每隔12 h给药1次，均匀涂抹于小鼠脱毛背部。应用大体照相、苏木精-伊红染色、免疫组化及原位杂交技术，观察毛发生长情况，检测不同时间点和不同给药浓度下小鼠毛囊根部细胞β-catenin、LEF-1 mRNA的表达水平。
结果与结论：低剂量胸腺素β4组毛发再生速度高于高剂量胸腺素β4组和对照组。苏木精-伊红染色显示在脱毛初期，各组小鼠真皮和皮下脂肪层有一定炎性细胞浸润，9d时，低剂量胸腺素β4组生长期毛囊数量明显多于高剂量胸腺素β4组和对照组。免疫组织化学和原位杂交结果分别显示β-catenin和LEF-1 mRNA主要表达于毛囊隆突部和外根鞘处细胞的胞浆中，经积分吸光度分析发现低剂量胸腺素β4组阳性细胞数量和染色强度高于高剂量胸腺素β4组和对照组(P <0.05)，高剂量胸腺素β4组与对照组间差异无显著性意义。结果显示低剂量的胸腺素β4可以增加部分毛囊外根鞘处细胞内β-catenin和LEF-1 mRNA的表达。胸腺素β4可以促进毛囊再生的机制可能与影响Wnt信号通路有关。 -
小鼠尾断端愈合形态学观察及细胞增殖活跃区分析
背景:皮肤创面中起到修复再生作用的细胞主要为皮肤源性前体细胞,当皮肤创面发生后,皮肤中的皮肤源性前体细胞进行分裂增殖,迁移修复创面,尽可能恢复损伤处原有皮肤的生理及美观功能.目的:观察小鼠尾部结构以及离断后断端愈合形态,初步探讨这些特征与小鼠尾部皮肤创伤修复的关系.方法:利用眼科显微外科剪对2日龄昆明小鼠尾部尖端进行人工统一离断,建立鼠尾断端毛囊再生动物模型,定位皮肤创面愈合过程中细胞增殖活跃区域,定期获取小鼠尾部皮肤创面愈合样品,OCT 包埋.常规病理染色观察创面愈合形态;对鼠尾细胞增殖进行免疫荧光标记,利用免疫荧光染色鉴定小鼠尾部愈合部位皮肤激活蛋白AP-1的表达.结果与结论:①鼠尾结构复杂,血运丰富,小鼠尾尖离断后可以达到较好愈合形态;②鼠尾部位皮肤细胞的增殖活跃主要在毛囊部位以及真皮乳头层进行细胞分裂,参与修复创面与再生;③荧光染色发现激活蛋白AP-1 的表达主要集中在愈合皮肤的表皮层和真皮乳头层;④结果说明愈合处的皮肤表皮层和真皮乳头层具有较强的再生能力.
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LncRNAs和miRNAs在毛乳头细胞衰老与毛囊再生中的作用
毛乳头(dermal papilla,DP)细胞衰老能使毛囊失去诱导功能,是雄激素性脱发的主要机制.而Wnt信号通路与DP细胞衰老进程虽密切相关,但具体机制不明确.长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)和非编码单链小RNA (microRNAs,miRNAs)以各种不同的方式在基因表达的各个水平发挥着重要作用,并已证实在Wnt信号通路也存在这样的调控方式.因此,备受关注的lncRNAs和miRNAs,很可能是通过激活Wnt信号通路而发挥DP细胞的抗衰老作用,终维持毛囊诱导功能.笔者结合国内外文献,旨在通过对与DP细胞、毛囊再生以及与某些细胞衰老密切相关的lncRNAs/miRNAs和Wnt信号通路调控方式作一总结,以探讨完善脱发的分子机制,并提出可能的药物治疗靶点,从而为DP细胞衰老机制的研究提供新的思路.
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机械张力诱发小鼠增生性瘢痕的实验研究
目的：观察机械张力诱发小鼠产生增生性瘢痕的可能性。方法小鼠背部形成2 cm长的手术切口，术后第4天，使用牵拉装置给予创面持续的张力刺激，维持2周后拆除装置，分别在牵引结束后1 d、30 d、60 d观察瘢痕大体形态及组织学形态变化。检测瘢痕面积、细胞数目及胶原量变化情况。结果牵拉后小鼠背部形成类似于人增生性瘢痕组织，并且瘢痕组织可以维持至少60 d，但瘢痕的面积有逐渐减少趋势。结论机械张力诱发的增生性瘢痕动物模型可以形成增生性瘢痕。
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低频电磁场影响毛囊生长及KGF表达的实验研究
目的：观察低频电磁场（Low frequency electromagnetic field, LFEMF）对毛囊生长期中再生毛囊的形态学及该过程中角质化细胞生长因子（Keratinocyte growth factor，KGF）表达的影响。方法选用雌性C57BL/6成年鼠制作毛囊生长期模型，随机分为对照组和LFEMF组。LFEMF组采用50 Hz、5 mT磁场，30 min/d，连续作用16 d。取两组小鼠脱毛处的全层皮肤，HE染色法观察毛囊生长期中毛囊形态学的改变，荧光定量PCR法和Western-blot检测KGF表达情况。结果 HE染色显示：3 d时，对照组中未见球状基质包绕毛乳头，LFEMF组球状基质部分包绕毛乳头，毛乳头上部有黑色素形成；9 d、16 d时， LFEMF组中毛囊的长度显著增加（P<0.05）。荧光定量PCR及Western-blot检测结果表明LFEMF组较对照组的KGF基因转录水平及蛋白水平均上调。结论 LFEMF能促进毛囊的生长，其机制可能与KGF的分泌增加有关。
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小鼠皮肤表皮和真皮细胞共移植诱导毛囊再生实验研究
目的 探讨绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的C57小鼠皮肤表皮和真皮细胞共移植诱导裸鼠毛囊重建的实验研究.方法 取C57-GFP新生及成年小鼠分离表皮与真皮,分别制备成年小鼠原代真皮-表皮混合细胞(按1:1比例混合)、成年小鼠原代真皮细胞、新生小鼠第3代真皮细胞,荧光显微镜观察细胞激发绿色荧光情况,免疫细胞化学检测培养的新生小鼠第3代真皮细胞毛囊干细胞标志.取Balb/c裸鼠,分别将成年小鼠原代真皮-表皮混合细胞(A组)、成年小鼠原代真皮细胞(B组)、新生小鼠第3代真皮细胞(C组)及生理盐水(D组)移植至裸鼠皮下,术后4、5、6周行大体观察,6周时取移植部位皮肤行GFP免疫组织化学染色观察各组毛囊形成情况.结果 荧光显微镜观察示,分离、培养的C57-GFP新生及成年小鼠表皮及真皮细胞均能激发绿色荧光;免疫细胞化学检测培养的第3代真皮细胞中毛囊干细胞标志,显示波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白强阳性,表明细胞多为真皮鞘细胞;部分细胞表达毛乳头细胞标志CD133、多能聚糖及毛囊隆突部标志角蛋白15.裸鼠皮下移植实验:大体观察示A组可见接种部位皮下呈灰黑色,但未见毛发穿出皮肤表面;B、C、D组裸鼠皮肤均无着色.免疫组织化学染色示,A组形成新的、完整的毛囊结构或参与形成毛囊;B组GFP阳性细胞多表达于毛囊真皮鞘、外根鞘;C组GFP阳性细胞主要分布于毛囊真皮鞘、外根鞘、毛乳头,在汗腺中也有表达;D组GFP染色呈阴性.结论 小鼠皮肤的表皮和真皮细胞在裸鼠体内相互作用可形成完整的毛囊结构,而仅移植新鲜分离或培养的真皮细胞则主要参与毛囊形成,无法形成完整的毛囊结构.
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毛囊再生能力及其影响因素
毛囊是调控毛发周期生长的重要结构,呈周期性、有规律地自我再生,在人体内终生不断,是成人有此特征的唯一器官.它对研究上皮与中胚层起源细胞之间的相互作用,器官和组织再生、色素形成、伤口愈合及皮肤癌的发病机制等重要生命过程来说都是极好的模型.毛囊毛发的再生研究不但将给需要毛发移植的患者带来福音,更将对组织工程和细胞再生领域产生极大的影响.本文就毛囊再生的能力及其影响因素综述如下.
