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烟草特异性亚硝胺NNK对支气管上皮细胞端粒酶活化作用的探讨
目的:了解4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶)-1-丁酮[4-(methyl-nitrosamino)-1-(3-py-ridyl)-1-butanone,NNK]时支气管上皮细胞(BEP2D)端粒酶活性的影响.方法:NNK处理BEP2D细胞后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞存活率,用端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAp-EL-ISA)检测端粒酶活性,蛋白质印迹法检测端粒酶催化亚单位人端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白的表达.结果:10 mg/LNNK孵育24、48及72 h后,BEP2D细胞存活率不受影响,但其端粒酶活性均增高,而hTERT蛋白表达增高则在孵育48及72 h时间点.结论:NNK可刺激BEP2D细胞端粒酶活化及hTERT蛋白的表达.
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氯化镉诱发16HBE细胞恶性转化中hOGG1基因表达和序列变化的研究
目的:探讨氯化镉诱发人支气管上皮(16HBE)细胞系恶性转化过程中hOGG1基因mRNA和蛋白动态变化的规律及其序列变化情况.方法:用反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)和免疫组织化学(SP法)检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE细胞系不同阶段(第5、15和35代细胞及成瘤细胞)hOGG1基因mRNA和蛋白的表达情况;用直接测序法分析hOGG1基因第7外显子的序列情况.结果:随着转化代数的增加,hOGG1基因mRNA和蛋白的表达逐渐降低,到第15代细胞后表达明显下降(P＜0.05);hOGG1基因第7外显子第162位点插入一个腺嘌呤A,为移码突变.结论:hOGG1基因水平的下调和突变可能是氯化镉分子致癌的重要机制.
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卷烟烟气凝集物诱发人支气管上皮细胞转化的初步研究
目的 建立卷烟烟气凝集物(CSC)诱发细胞转化的模型,模拟吸烟致肺癌的过程.方法 利用CSC染毒体外培养的人支气管上皮细胞系BEP2D,诱导转化.结果 以0.001支烟/ml剂量每代染毒24 h,连续染毒30代共720 h后,诱发细胞发生明显转化改变,细胞逐渐发生生长动力学和形态学的改变,生长失去接触抑制,获得对血清诱导末端分化的抗性和锚着独立性生长能力,与对照细胞比较均有统计学意义上的增强.结论 从BEP2D到CSC转化的细胞能够在一定程度上模拟体内肿瘤的发生发展过程,可以为深入了解吸烟致肺癌发生多阶段过程中的细胞和分子机制提供研究模型.
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体外构建气管黏膜上皮组织的研究
目的:应用组织工程原理和方法在体外构建气管黏膜上皮组织.方法:将原代兔气管上皮细胞种植在铺有鼠尾胶原的小肠黏膜下层(SIS)上培养,在体外构建气管黏膜上皮组织,培养1 wk后行HE染色,对气管上皮细胞行免疫细胞学鉴定.结果:原代气管上皮细胞培养1 wk后增殖旺盛,10 d时上皮细胞分布范围更广. 将构建的气管黏膜上皮组织行HE染色,显示有气管黏膜上皮和SIS双层结构. 抗角蛋白单克隆抗体免疫细胞化学反应阳性显色率可达90%左右.结论:将铺有鼠尾胶原的SIS复合气管上皮细胞生长,成功的在体外构建出组织工程化的气管黏膜上皮组织.
