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用镭射激光捕获技术研究LEC鼠p53基因突变和肝癌发生的关系
目的:研究p53基因突变与原发性肝癌发生发展的关系.方法:利用LEC鼠(long evan cinnamon)作为肝癌的动物模型.选取15、37、101周的LEC鼠17、15和12只,正常对照SD大鼠15只,取出肝脏组织进行切片.切片一部分用于谷胱甘肽S-转移酶(GST-P)免疫组化染色,另一部分利用镭射激光捕获技术(laser capture microdissection, LCM)定位切割,进行p53基因外显子5、6/7、8突变的分析.结果:37周龄LEC鼠和101周龄LEC鼠GST-P阳性率高于对照组(P＜0.05),15周龄LEC鼠GST-P阳性率与对照组相比差异无统计学意义,P＞0.05.p53基因在GST-P表达阳性肝炎组有3例突变(3/12),GST-P表达阳性肝癌组有12例发生突变(12/17), 肝癌组显著高于肝炎组,P＜0.05.结论:p53突变发生在肝癌形成的早期阶段,随着发展过程,突变率明显增高.GST-P虽然特异性不强,但是不失为一种灵敏的判断肝损伤的指标.
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SN-38与索拉非尼联合应用体外抗肝癌效果及其机制
目的：研究伊立替康的活性代谢物SN-38与索拉非尼联合作用于HepG-2和BEL-7402细胞株的抗肝癌效果及其相关机制。方法：利用磺酰罗丹明B显色法测定SN-38与索拉非尼单用或合用后HepG-2和BEL-7402细胞的存活率。利用PI染色结合流式细胞术及DAPI染色法检测细胞凋亡，同时利用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白、DNA损伤标志蛋白的表达情况。结果：与单药比较， SN-38与索拉非尼合用对细胞的抑制作用增强，合用指数小于0.9。对照组、SN-38组、索拉非尼组、合用组HepG-2细胞凋亡率分别为4.25％±2.45％、28.95％±10.75％、3.49％±2.49％、53.19％±11.21％，合用组细胞凋亡率增加（与其他组比较均P＜0.05）。同时合用组凋亡相关蛋白多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（ PARP）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（ Caspase ）8、Caspase-3的蛋白酶切量以及p53蛋白、p21蛋白、DNA 损伤标志蛋白磷酸化的组蛋白 H2 AX 的表达量均增加。结论：在细胞水平上，SN-38与索拉非尼联合应用能够通过p53表达增加促进肝癌细胞凋亡，因此具有抗肝癌效果。
