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肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸抑瘤作用的体外实验研究
目的:通过全硫代修饰的肝细胞癌差异表达基因P-02反义寡核苷酸对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖活性的影响,探讨P-02基因的功能.方法:以脂质体为载体,采用MTT法、RT-PCR、流式细胞术检测P-02 AS-ODN(antisense oligonucleotide)对SMMC-7721细胞生长、增殖、细胞周期的作用.结果:脂质体介导的P-02基因反义寡核苷酸可抑制SMMC-7721增殖,RT-PCR结果显示P-02基因的扩增条带明显减弱,流式细胞术显示G1期细胞增多,M期及S期细胞数减少.结论:脂质体介导的AS-ODN可抑制SMMC-7721的恶性表型,证实P-02基因在肝细胞癌的发生发展中可能有重要作用.
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用镭射激光捕获技术研究LEC鼠p53基因突变和肝癌发生的关系
目的:研究p53基因突变与原发性肝癌发生发展的关系.方法:利用LEC鼠(long evan cinnamon)作为肝癌的动物模型.选取15、37、101周的LEC鼠17、15和12只,正常对照SD大鼠15只,取出肝脏组织进行切片.切片一部分用于谷胱甘肽S-转移酶(GST-P)免疫组化染色,另一部分利用镭射激光捕获技术(laser capture microdissection, LCM)定位切割,进行p53基因外显子5、6/7、8突变的分析.结果:37周龄LEC鼠和101周龄LEC鼠GST-P阳性率高于对照组(P＜0.05),15周龄LEC鼠GST-P阳性率与对照组相比差异无统计学意义,P＞0.05.p53基因在GST-P表达阳性肝炎组有3例突变(3/12),GST-P表达阳性肝癌组有12例发生突变(12/17), 肝癌组显著高于肝炎组,P＜0.05.结论:p53突变发生在肝癌形成的早期阶段,随着发展过程,突变率明显增高.GST-P虽然特异性不强,但是不失为一种灵敏的判断肝损伤的指标.
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逆转录肿瘤病毒在细胞增殖和凋亡中的双向机制
目的:研究逆转录肿瘤病毒在L615小鼠T细胞白血病增殖和凋亡中的机理.方法:615近交系小鼠20只,随机分为病毒感染组和正常对照组.感染组动物皮下接种携带小鼠逆转录病毒的L615白血病肿瘤株,检测外周血白细胞总数,观察肿瘤细胞凋亡形态特征及DNA电泳图谱,并检测肿瘤细胞中c-myc和ras基因的表达.结果:感染组在接种肿瘤细胞株后第8天外周血中的肿瘤细胞急剧增高[(0.219 9±0.109 9)×109/L],与正常对照组比较差异有极显著性(P＜0.01).肿瘤细胞中c-myc和ras基因的表达率分别为(76.00±3.231 8)%和(56±2.0138)%.在肿瘤细胞中还能观察到典型的细胞凋亡小体,凋亡率为(4.60±0.97)%,外周血淋巴细胞DNA电泳也显示典型的梯形电泳带.结论:L615小鼠逆转录肿瘤病毒在引发T细胞白血病过程中,可导致肿瘤细胞c-myc和ras基因异常表达,同时还激活宿主对肿瘤细胞的凋亡路径.
