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乏氧射线双调控的TK腺病毒载体对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响
目的:观察乏氧射线双调控的TK腺病毒载体-Ad.HRE.CArG.HSV-TK对体外培养的乳腺癌细胞Bcap37和MDA-MB-435生长和凋亡的影响.方法:MTT法检测腺病毒转导联合放疗对常氧(37℃,19%0:,5%C02)和乏氧(37℃,0.1%02,5%C02)状态下细胞的生长抑制作用,Annexin v-FITC染色检测细胞凋亡.结果:HSv-TK/GCV系统对乳腺癌细胞具杀伤效应和旁观者效应,Bcap37和MDA-MB-435细胞对GCV的IC50分别为9.09和7.83 μg/mL.常氧状态下腺病毒栽体(Ad)与放疗(RT)联用组(Ad+RT)细胞生长抑制率和凋亡率明显高于Ad组和相应同等剂量放疗组(P<0.05),对Beap37和MDA-MB-435细胞的增敏比(SER)均为1.55.乏氧和(或)放疗处理后,乏氧+Ad+RT组抑制率明显高于常氧+Ad+假照射组和常氧+Ad+RT组,P<0.05.结论:Ad.HRE.CArG.HSvrTK腺病毒裁体联合放疗可显著抑制乳腺癌细胞生长并诱导凋亡,为进一步开展乳腺癌的基因一放射治疗研究奠定了基础.中华肿瘤防治杂志,2009,16(1):22-26
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基于HPV16肿瘤基因治疗载体的构建与鉴定
目的:构建基于人乳头状瘤病毒16型(human papilloma virus type-16, HPV16)的肿瘤基因治疗栽体,并鉴定其对Hela肿瘤细胞的转染活性.方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中用病毒蛋白包装绿色荧光表达质粒EGFP形成治疗载体.透射电镜观察治疗栽体的结构,并转染Hela肿瘤细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率.结果:透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)的结构,在转染Hela肿瘤细胞后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达.结论:基于HPV16的新型肿瘤基因治疗载体能成功转染Hela肿瘤细胞,为肿瘤的基因治疗策略提供了理想的工具.
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小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测
目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1( NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础.方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分别包含NMNAT1 cDNA全长、一个针对NMNAT1的小干扰序列和一个用于干扰对照的阴性序列.把这些质粒包装进慢病毒载体,并检测病毒滴度,再用慢病毒感染Hela细胞检测NMNAT1表达量和RNA干扰效率.结果:测序结果证明目的序列正确地插入到载体内.通过qPCR方法鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度均为2×108 TU/ml以上.表达NMNAT1的重组慢病毒感染Hela细胞,该细胞能够高水平表达NMNAT1蛋白,而携带RNAi序列的慢病毒能够显著抑制其表达,干扰效率在70％以上.结论:针对NMNAT1的过表达和RNAi重组慢病毒制备成功,为进一步研究NMNAT1基因的功能和用慢病毒进行基因治疗提供了良好的研究工具.
