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表皮生长因子受体反义重组腺病毒联合放射线对乳腺癌细胞的作用
目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)反义重组腺病毒联合放射线对乳腺癌细胞的作用.方法人EGFR的cDNA片段被反向亚克隆入E1/E3缺失的5型腺病毒载体中而得到AdE5,EGFR反义RNA的表达由CMV启动子控制.进而研究其联合γ射线对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231成克隆能力及细胞周期分布的影响.结果 MDA-MB-231细胞被AdE5感染后,EGFR蛋白质的表达被强烈地抑制.AdE5感染后以γ射线照射细胞,成克隆能力被抑制.且这种作用与病毒量和照射剂量相关联.进而流式细胞仪分析显示,300 pfu/细胞的AdE5感染可使MDA-MB-231细胞摆脱对放射线抗拒的G0+G1期,进入对放射线敏感的G2+M期,从而使AdE5联合放射线表现为协同效应.结论以腺病毒载体介导的EGFR反义RNA转导可有效地用于针对EGFR的反义治疗策略,提高放射线对乳腺癌细胞杀灭作用.
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基因重组HBV的构建及其表达反义RNA抗-HBV作用的研究
目的探索利用乙型肝炎病毒(HBV)作为基因治疗载体的可能性及检验其表达反义RNA抗HBV的作用.方法在表达完整HBV颗粒的质粒上,经基因修饰后分别表达S或S启动子区的反义RNA,整合于具有HBV复制的2.2.15细胞,形成细胞克隆,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养上清液中HBsAg和HBeAg,斑点杂交法检测细胞内HBV核壳中HBV DNA,聚合酶链反应(PCR)法检测上清液中重组HBV颗粒.结果2.2.15-pMEP4组、2.2.15-SAS组和2.2 15-PAS组对HBsAg平均抑制率分别为(2.74±3.83)%、(66.54±4.45)%(P＜0.01)和(55.18±3.27)%(P＜0.01);对HBeAg平均抑制率分别为(4.46±4.25)%、(26.36±1.69)%(P＜0.01)和(65.54±3.22)%(P＜0.01);对HBV复制的抑制率分别为17.0%、59.9%和72.8%.2.2.15-SAS组及2.2.15-PAS组培养上清液中能检测出突变型HBV颗粒.结论经过对HBV基因组的两处改造,分别在细胞内表达S区及S启动子区反义RNA具有干扰HBV复制及抑制HBV抗原表达的作用;在2.2.15细胞中野生型HBV辅助下,仍能包装并分泌完整的HBV样颗粒.
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视黄酸依赖反义cyclin D1对HL-60细胞细胞周期素依赖性激酶的影响
目的探讨视黄酸(retinoic acid,RA)及其诱导的反义(anti-sense,AS)cyclin D1对HL-60细胞的细胞周期素激酶CDK4的影响.方法通过构建含有视黄酸反应元件(retinoic acid response element, RARE)的反义cyclin D1 RNA表达载体pCI-neo/RARE3-TK/Ascyclin D1,使反义cyclin D1的表达可受视黄酸诱导调控.以脂质体转染HL-60白血病细胞后,运用MTT比色法检测细胞增殖功能、NBT还原实验观测细胞分化状况,RT-PCR以及western-blot等方法观测视黄酸处理后CDK4的mRNA和蛋白表达水平的改变.结果 RA处理后,细胞生长显著减慢,分化能力明显增强,CDK4 mRNA和蛋白表达水平均有所降低,其中,以反义cyclin D1转染细胞经RA处理后变化更为显著.结论 RA及其诱导的反义cyclin D1对HL-60细胞的抑制增殖与诱导分化效应可能与CDK4表达下调有关.
关键词： 视黄酸 细胞周期素D1 RNA反义 细胞/分化 细胞周期素依赖性激酶
