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藤黄酸调节急性白血病细胞HL-60核孔蛋白Nup88的意义
目的 观察藤黄酸对白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响及其对核孔蛋白Nup88的调控作用,探讨二者间的相互关系.方法 采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性;Annexin-V FITC/PI双标法和Hoechst33258染色法分析细胞凋亡的改变;流式细胞术分析细胞周期和细胞内核孔蛋白Nup88的改变;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测藤黄酸对白血病细胞内Nup88基因表达的影响;共聚焦显微镜下观察Nup88蛋白的分布情况.结果 藤黄酸能明显抑制HL-60细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其12 h的IC50Molecule targetecl therapy; Response evaluation criteria为1.797 μmol/L.藤黄酸具有较强的诱导白血病细胞凋亡的效应,0.4 μmol/L藤黄酸即能诱导15.1%的HL-60细胞发生凋亡.当藤黄酸浓度达到1.6 μmol/L时,总凋亡率为79.0%,且该效应并不依赖于细胞周期阻滞作用.核孔蛋白Nup88弥漫分布于白血病细胞的核浆之间,以细胞浆和核膜为主,经藤黄酸干预后,Nup88蛋白和mRNA的表达水平明显下降,主要集中于核膜的胞浆面,偶见胞浆中表达.结论 藤黄酸能明显抑制HL-60白血病细胞的增殖,并诱导其凋亡;藤黄酸诱导的核孔蛋白Nup88的重新分布和表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.
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藤黄酸对急性白血病细胞U937增殖和凋亡的影响及对核孔蛋白Nup88的调控作用
目的 观察藤黄酸对白血病细胞株U937增殖和凋亡的影响及其对核孔蛋白Nup88的调控作用,研究藤黄酸诱导凋亡作用与其调节Nup88的相互关系.方法 采用MTT比色法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI双标法及Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,流式细胞术分析细胞周期和细胞内核孔蛋白Nup88的改变,RT-PCR检测藤黄酸对白血病细胞内Nupp88基因表达的调控作用;共聚焦显微镜观察Nup88蛋白的细胞分布情况.结果 藤黄酸能明显抑制U937细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其24 h的IC50为(1.019±0.134)mg/L;此外,藤黄酸还具有诱导U937细胞凋亡和G0/G1期阻滞的作用.核孔蛋白Nup88弥漫分布于白血病细胞的核浆之间,以细胞浆和核膜为主,经藤黄酸干预后,Nup88的蛋白和mRNA表达水平明显下降,主要集中于核膜的胞浆面,偶见胞浆中表达.结论 藤黄酸能明显抑制U937白血病细胞的增殖,并诱导其凋亡.而藤黄酸诱导的核孔蛋白Nup88的重新分布以及表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.
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Nup88-shRNA对人结肠癌细胞株HT-29生长及侵袭力影响的实验研究
目的：构建重组慢病毒介导的Nup88-shRNA载体，由RNA干扰（RNAi）技术沉默Nup88，研究其对结肠癌HT-29细胞的增殖、黏附、侵袭和转移的影响，为结肠癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法 Nup88重组慢病毒载体的构建后包装检验效价，以佳感染复数转染结肠癌HT-29细胞，实验分为沉默组、阴性对照组和空白组3组，其中沉默组分为Nup88-shRNA1、Nup88-shRNA2、Nup88-shRNA3、Nup88-shRNA44个亚组。通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot印迹检测各组表达效率，主要是HT-29细胞的mRNA和蛋白；四甲基偶氮唑盐（MTT）法和流式细胞术检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞增殖和凋亡的影响；细胞侵袭实验检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞侵袭力的影响。结果沉默4组病毒及1组阴性对照均构建成功，滴度均为4E+8 TU/mL。沉默组Nup88 mRNA与阴性对照组和空白组相比，蛋白表达差异均有显著统计学意义（P<0．01）。 Nup88-shRNA1转染后，沉默率可达到86%。沉默组细胞增殖程度显著减少，与空白组和阴性对照组相比，差异有统计学意义（P<0．05）。沉默组细胞凋亡率（30．28%±0．19%）显著增加，与阴性对照组（4．15%±0．24%）和空白组（2．98%±0．27%）相比，差异有统计学意义（P<0．05）。培养肿瘤细胞常规24 h 后，沉默组穿膜细胞数（120．5±8．7）和抑制率（49．22%）与阴性对照组（232．2±13．4，-2．14%）和空白组（276．4±10．2，0）相比，穿膜细胞数明显减少，抑制率明显增加，差异具有统计学意义（P<0．05）。结论 Nup88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制HT-29细胞中Nup88基因的表达，并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。
关键词： Nup88 人结肠癌细胞HT-29 RNA干扰(RNAi) 慢病毒载体 -
Nup88在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响
为探讨核孔蛋白88 (nucleoporin 88,Nup88)在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响研究,用Western blotting检测收集胃腺癌组织中的Nup88.通过细胞转染siRNA Nup88和siRNA control抑制胃腺癌细胞中Nup88的表达.MTT检测转染后细胞增殖情况.流式细胞术检测转染后细胞凋亡情况.Western blotting检测细胞中NOTCH信号通路相关蛋白NICD1、NICD2、HES1和Cleaved Caspase-3水平.胃腺癌细胞与NOTCH信号通路抑制剂S2188作用后,检测细胞增殖和凋亡情况.结果显示Nup88在胃腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.01).siRNA Nup88组细胞中Nup88水平明显低于siRNA control组(P＜0.01).siRNA Nup88组细胞存活率明显低于siRNAcontrol组(P＜0.01).siRNA Nup88组细胞凋亡率明显高于siRNA control组(P＜0.01).siRNA Nup88组细胞中NICD1、NICD2、HES1水平明显低于siRNA control组(P＜0.01).siRNA Nup88组细胞中Cleaved Caspase-3水平明显高于siRNA control组(P＜0.01).抑制剂作用后的细胞增殖凋亡趋势与siRNA Nup88组一致.由此,Nup88在胃腺癌组织中表达上调.沉默Nup88后胃腺癌细胞增殖受到抑制,凋亡增多,作用机制与NOTCH信号通路有关.
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子宫颈腺癌组织中Nup88蛋白的表达及其意义
目的 探讨核孔蛋白88(nucleoporin 88,Nup88)在子宫颈腺癌组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化SP法检测20例正常子宫颈组织、20例子宫颈原位腺癌和60例子宫颈腺癌组织中Nup88蛋白表达;分析Nup88蛋白表达与子宫颈腺癌临床病理特征及预后的关系.结果 Nup88蛋白在子宫颈腺癌组织、子宫颈原位腺癌组织、正常子宫颈组织中的阳性率分别为78.3％ (47/60)、45.0％(9/20)、10.0％(2/20),在子宫颈腺癌组织中的表达高(P＜0.05);Nup88蛋白表达与患者年龄(≤50岁或＞50岁)、组织病理类型、肿瘤大小等无关(P均＞0.05);与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均＜0.05).Nup88蛋白阳性的子宫颈腺癌患者预后差.结论 Nup88蛋白可能与子宫颈腺癌的发生、发展有关,有望成为评估子宫颈腺癌生物学行为的指标之一.
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核孔蛋白88的研究进展
核孔蛋白88(nucleoporin88, Nup88)是位于细胞核膜表面的核孔蛋白,与其他蛋白一同构成核孔复合体( NPC)。NPC作为调控细胞膜内外物质转运的重要结构,对生命体生长发育的重要作用已被广泛认可。 Nup88作为核孔复合体中的一员,不仅参与细胞内核质转运,在调节细胞生长、分化、增殖、发育过程中发挥重要作用,并且其适度表达是防止非整倍染色体的形成及肿瘤发生的关键。研究发现,多数恶性肿瘤中Nup88表达较正常组织高,且其表达部位与肿瘤的分化程度、转移及预后相关。该文就Nup88的分子结构、功能及在临床方面的研究作一综述。
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Nup88蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的:探讨核孔蛋白复合体蛋白88(Nup88)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用Western blot技术及免疫组织化学染色SP方法检测Nup88蛋白在40例乳腺癌和40例乳腺良性病变中的表达,并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系.结果:Nup88蛋白在乳腺癌组织中的表达较乳腺良性病变明显升高CP.Nup88蛋白的表达与乳腺癌的组织学分级及TNM分期、淋巴结转移有关,该三特征分组间差异均有统计学意义(均P＜0.05).组织学分化越低及TNM分期越晚、有淋巴结转移的表达率越高.结论:Nup88蛋白与乳腺癌的发生、发展有关,其有望成为乳腺癌早期诊断和预后的一个新的辅助标记物.
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PINCH mRNA在乳腺癌中的表达意义及其与Nup88的相关性研究
目的 研究PINCH mRNA在乳腺癌组织中的表达及其与Nup88的关系.方法 采用半定量PCR法检测PINCH mRNA及Nup88 mRNA在乳腺癌及乳腺良性肿瘤组织中的表达.结果 PINCH mRNA在乳腺癌组织中的表达水平(0.725±0.060)较乳腺良性肿瘤组织中的(0.497±0.04)明显增高(P＜0.001).且在乳腺癌组织中PINCH mRNA的表达与患者年龄、肿瘤部位以及组织学分类无关(P＞0.05),与组织学分级、TNM分期及淋巴结转移有关(P ＜0.05);PINCH mRNA在乳腺癌组织中的表达与Nup88的表达呈正相关(P＜0.05),相关系数为0.325.结论 PINCH mRNA与乳腺癌的发生、发展及转移有关,联合检测PINCH及Nup88对进一步理解乳腺癌的生物学行为及判断预后有一定的价值.
