首页 > 文献资料
-
表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478通过叉头转录因子O3a对非小细胞肺癌细胞中叉头转录因子M1表达的影响
目的 探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478对非小细胞肺癌细胞中叉头转录因子M1 (FOXM1)、叉头转录因子O3a(FOXO3a)的表达调控,以及RNA干扰技术下调FOXM1、FOXO3a的表达后对肺癌细胞增殖及其对AG1478药物敏感性的影响.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测肺腺癌细胞株A549中FOXM1和FOXO3a mRNA和蛋白的表达情况；瞬时转染FOXM1和FOXO3a小干扰RNA (siRNA)后,RT-PCR和Western blot法检测转染效率和相关蛋白的表达；采用CCK-8法、集落形成实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、集落形成能力及细胞周期分布的改变.结果 AG1478呈时间依赖性抑制FOXM1 mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05).转染FOXM1 siRNA后,FOXM1 mRNA和蛋白及其细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、c-Myc、Bcl-2蛋白的表达明显下降,p21和剪切后多腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)蛋白的表达则明显上调(均P ＜0.05).空白组、阴性对照组和FOXM1 siRNA转染组的集落数分别为(135.3±7.0)个、(125.3±7.5)个和(37.3±8.6)个,阴性对照组和FOXM1 siRNA转染组的集落形成抑制率分别为(7.40±0.94)％和(72.40±6.09)％(P＜0.05).FOXM1 siRNA转染组的G2/M期细胞比例为(55.60±4.83)％,明显高于空白组[(24.30±1.95)％]和阴性对照组[(21.30±2.06)％,P＜0.05].转染FOXM1 siRNA后,可明显增加A549细胞对AG1478的药物敏感性(P＜0.05).AG1478可诱导活化的FOXO3a分子表达并促进其核定位；转染FOXO3a siRNA后,FOXM1蛋白水平明显上调,并通过活化的AKT削弱AG1478对FOXM1表达的抑制.结论 AG1478通过诱导活化的FOXO3a表达及胞核重定位,下调FOXM1的表达,进而抑制肺癌细胞增殖,增加肺癌细胞对AG1478的敏感性.
-
siRNA下调叉头框M1基因表达对大肠癌细胞化疗敏感性的影响
目的:观察叉头转录因子M1(forkhead box protein M1,FoxM1)基因小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)对大肠癌细胞化疗药物敏感性的影响,并探讨其可能机制.方法:设计合成3个FoxM1 siRNA,转染人大肠癌SW620细胞后,采用定量PCR方法筛选下调FoxM1 mRNA效果好的siRNA,然后以不同浓度(3.125,6.25,12.5nmol/L)的该siRNA转染处理大肠癌细胞,用RPMI 1640代替FoxM1 siRNA作为空白对照组(Con-A);48 h后,各组细胞分别用伊立替康(Irinotecan,CPT-11,7.5μmol/L)处理,以MTT法检测siRNA转染对各组细胞增殖及对伊立替康敏感性的影响;以蛋白质印迹方法检测Akt磷酸化情况.结果:MTT结果显示,空白对照组、siRNA 3.125 nmol/L组、siRNA 6.25 nmol/L组和siRNA 12.5 nmol/L组SW620细胞生长抑制率分别为18.36％,39.78％,58.18％,78.28％.统计学分析显示,抑制率呈浓度依赖性(r =0.775,P＜0.05).蛋白质印迹结果表明,siRNA转染组Akt磷酸化水平明显下调.结论:FoxM1基因siRNA可提高大肠癌细胞化疗敏感性;下调Akt磷酸化水平是其重要机制之一.
-
硫链丝菌肽下调FOXM1的表达对肺癌细胞生长及凋亡的影响
目的 探讨硫链丝菌肽(TST)对肺癌细胞A549增殖、凋亡及其对AG1478 (EGFR-TKI)药物敏感性的影响.方法 CCK-8法检测TST、AG1478单药及两药联用后A549细胞的增殖抑制率;Western blot检测TST对叉头转录因子M1(FOXM1)表达的影响;Caspase-3比色测定法检测TST对Caspase-3活化程度的影响;利用RNAi技术沉默A549细胞中FOXM1基因,检测FOXM1及增殖凋亡相关分子表达变化.结果 TST增加A549细胞对肺癌靶向药物AG1478的敏感性,其IC50值由(4.35±0.45) μmol/L降至(0.73±0.05) μmol/L(t=11.02,P＜0.05);TST抑制FOXM1及下游c-Myc、Cyclin B1、Bel-2分子的表达,上调P21、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达的同时,呈时间及剂量依赖性诱导Caspase-3分子活化;沉默FOXM1后其下游分子c-Myc、Cyclin B1、Bcl-2、P21及Cleaved PARP的表达改变同TST作用后相似,细胞中Cleaved Caspase-3的荧光表达明显增多.结论 TST介导的FOXM1下调可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,并增加其对AG1478的药物敏感性.
-
RNA干扰下调叉头转录因子M1基因对人肿瘤细胞生长、克隆和侵袭的影响
目的 观察RNA干扰下调叉头转录因子M1(FoxM1)基因对肿瘤细胞生长、克隆形成和侵袭的影响.方法 培养8株人卵巢癌细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检查FoxM1基因mRNA水平.设计并用化学方法合成FoxM1基因小干扰RNA (siRNA),转染处理SKOV-3细胞,选择下调效果好的siRNA.SKOV-3和HO-8910PM细胞均分为3组:空白对照组(Con-A)、空载质粒对照组(Con-B)和siRNA组(siRNA),其中,siRNA组以FoxM1 siRNA转染处理.分别应用FQ-PCR和Western blot方法检测各组癌细胞FoxM1基因mRNA和蛋白水平.以细胞计数试剂盒(CCK-8)方法检测生长,以平板克隆方法检测癌细胞克隆形成能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 8株卵巢癌细胞株中,SKOV-3和HO-8910PM细胞FoxM1基因mRNA表达水平高.FoxM1基因siRNA转染SKOV-3细胞后,72 h Con-A、Con-B和siRNA组吸光度(A)值分别为2.455±0.033、2.442±0.025和1.312±0.028(P＜ 0.05);平板克隆结果显示,Con-A、Con-B和siRNA克隆形成数分别为(100 ±5)、(93±8)和(51±3)个(P＜0.05);TransweH结果显示,Con-A、Con-B和siRNA组穿膜细胞数分别为(93±4)、(86±3)和(36±1)个(P＜0.05).FoxM1基因siRNA转染HO-8910PM细胞后,72 h,Con-A、Con-B和siRNA组A值分别为2.691±0.039、2.560±0.033和1.455±0.027(P ＜0.05);平板克隆结果显示,Con-A、Con-B和siRNA克隆形成数分别为(146±7)、(145±8)和(85±2)个(P＜0.05);Transwell结果显示,Con-A、Con-B和siRNA组穿膜细胞数分别为(449±15)、(445±11)和(151±9)个(P＜0.05).结论 FoxM1基因在人卵巢癌细胞生长、增殖和侵袭起重要作用.
-
5，7-二甲氧基黄酮下调FoxMl基因表达对胰腺癌细胞上皮-间充质转化的影响
目的：探讨5，7二甲氧基黄酮（5，7-DMF）对胰腺癌细胞上皮-间充质转化的影响及分子机制。方法：用不同浓度DMF处理人胰腺癌Panc-1细胞，利用划痕法检测5，7-DMF干预后Panc-1细胞侵袭转移能力变化；用Western blot检测5，7-DMF干预后FoxM1蛋白表达情况；FoxM1siRNA转染人胰腺癌Panc-1细胞后，用Western blot进而检测 EMT相关上皮标志分子E-cadherin、间质标志分子N-cadherin蛋白水平的表达变化。结果：5，7-DMF以浓度依赖方式显著抑制Panc-1细胞侵袭转移能力。5，7-DMF干预胰腺癌细胞后显著下调FoxM1表达水平；FoxM1 siRNA转染胰腺癌细胞，EMT相关分子E-cadherin表达升高，而N-cadherin表达降低，且与对照组相比均有统计学意义。结论：5，7二甲氧基黄酮可逆转胰腺癌细胞上皮-间充质转化，可能通过下调FoxM1水平是其重要机制之一，但其内在的分子机制尚需进一步探讨。
-
RNA干扰下调FoxM1基因表达对胰腺癌细胞化疗敏感性的影响
目的 探讨RNA干扰下调叉头转录因子M1 (Forkhead box protein M1,FoxM1)基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胰腺癌细胞化疗药物敏感性的影响及分子机制.方法 设计合成3个FoxM1 siRNA,转染人胰腺癌Panc-1细胞后采用定量PCR方法筛选下调FoxM1 mRNA效果好的siRNA;然后以该siRNA转染Panc-1细胞后,分别以实时定量PCR检测各组细胞FoxM1 mRNA表达情况;以不同浓度siRNA转染胰腺癌细胞后,分别以MTT法检测吉西他滨(20 nM,Gemcitabine)对各组细胞生长和化疗敏感性的影响;以蛋白质印迹方法检测Akt磷酸化情况.结果 3个siRNA均明显下调FoxM1 mRNA水平,以S3效果好.MTT结果显示,Con-A+ Gem组、Con-B+ Gem组、siRNA(3.125nM)+GemsiRNA、siRNA(6.25nM)+ Gem、siRNA(12.5nM)+Gem组抑制率分别为17.78％、17.56％、35.39％、52.81％及70.98％.蛋白质印迹检测发现,siRNA转染组Akt磷酸化水平明显下调.结论 FoxM1基因siRNA可促进胰腺癌细胞化疗敏感性,通过下调Akt磷酸化水平可能是其重要机制之一,但其内在的分子机制尚需进一步探讨.
