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5-氮杂脱氧胞苷增强苯丁酸钠对Kasumi-1细胞的诱导分化和凋亡作用
目的探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)联合DNA甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)阻断AML1-ETO的生物学功能,消除AML1-ETO的转录抑制,诱导t(8;21)急性髓系白血病细胞系Kasumi-1细胞的分化和凋亡作用.方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察PB单药或联合5-Aza-CdR对细胞生长的抑制作用;流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原CD11b和CD13的表达,判断细胞分化;Annexin V和碘化丙啶(PI)双标记,经流式细胞术分析细胞早期凋亡.结果(1)5-Aza-CdR可增强PB对Kasumi-1细胞的生长抑制作用,半数抑制浓度(IC50)下降为1.95mmol/L.(2)PB处理使Kasumi-1细胞阻滞于G0/G1期,5-Aza-CdR与PB联合则使细胞阻滞于G2/M期.(3)低剂量5-Aza-CdR增强PB诱导Kasumi-1细胞髓系分化抗原CD11b和CD13的表达.(4)低剂量5-Aza-CdR不能增强PB诱导的Kasumi-1细胞凋亡,而高剂量5-Aza-CdR增强PB诱导的Kasumi-1细胞早期凋亡.结论DNA甲基化抑制剂5-Aza-CdR增强脱乙酰化酶抑制剂PB抑制Kasumi-1细胞生长、诱导分化和凋亡的作用.
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脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠体外诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用
目的探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外阻断AML1-ETO的生物学功能,消除AML1-ETO的转录抑制,诱导Kasumi-1细胞生长抑制、分化和凋亡作用.方法应用MTT比色法观察PB对细胞的生长抑制作用,普通光学显微镜和透射电镜观察细胞形态和结构改变,流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原的表达,Annexin Ⅴ标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡.结果① PB明显抑制Kasumi-1细胞的生长,半数抑制浓度(IC50)约为2.3?mmol/L;②经PB作用后细胞阻滞于G0/G1期,伴有S期细胞减少;③ PB可诱导Kasumi-1细胞髓系分化抗原CD11b和CD13表达增加,并呈剂量和时间依赖性;④ PB诱导Kasumi-1细胞凋亡,呈时间剂量依赖性,PB 3 mmol/L培养2 d早期凋亡细胞增加,培养3 d晚期凋亡细胞增加,培养5 d出现明显DNA梯形条带;⑤处理后的细胞出现单核细胞样分化和凋亡细胞形态改变.结论脱乙酰化酶抑制剂PB抑制Kasumi-1细胞生长,使细胞阻滞于G0/G1期;诱导细胞部分分化和凋亡.
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丙戊酸钠逆转AML1-ETO融合蛋白转录抑制作用的研究
目的:探讨组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(valproic acid,VPA)逆转AML1-ETO融合蛋白转录抑制作用.方法:VPA处理t(8;21)急性白血病细胞株Kasumi-l细胞后,应用流式细胞术检测髓系分化抗原CD11b表达水平的变化,DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡变化,分子生物学半定量RT-PCR的方法检测粒-单核细胞刺激因子(GM-CSF)和半胱氨酸天冬氨酸酶7(Caspase7)mRNA表达水平的变化.结果:①VPA诱导Kasumi-1细胞的髓系分化抗原 CD11b表达的阳性率增加,并呈现时间及剂量依赖性;②VPA诱导Kasumi-1细胞凋亡,出现的典型梯形DNA条带;③VPA诱导AML1靶基因GM-CSF和凋亡相关因子Caspase7的mRNA表达水平的增加,呈时间和剂量依赖性.结论:丙戊酸钠可以通过抑制脱乙酰化酶的活性,消除AML1-ETO融合蛋白转录抑制,诱导细胞分化和凋亡.
关键词： 细胞分化 脱乙酰化酶 丙戊酸钠 AML1-ETO融合蛋白 Kasumi-l细胞株 凋亡 -
苯丁酸钠对Kasumi-1细胞的生长抑制作用
目的:探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外对Kasumi-1细胞的生长抑制作用.方法:应用MTT比色法、锥虫蓝拒染法和集落细胞培养连续传代方法观察PB对细胞的生长抑制作用和自我更新能力的影响.结果:PB呈剂量依赖性抑制Kasumi-1细胞的生长,半数抑制浓度(IC.)约为2.3 mmol/L.结论:脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠抑制Kasum-1细胞的生长.
