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脑肿瘤干细胞起源的探讨
一、脑肿瘤干细胞1.脑肿瘤干细胞的发现:1997年,Bonnet和Dick~([1])率先在人类急性粒细胞自血病中发现了肿瘤干细胞,后来用干细胞培养液对恶性胶质瘤组织进行培养,得到了一群悬浮生长,能够自我更新,并且表达干细胞标记物的细胞,称之为脑肿瘤干细胞~([2-3]),在传过上千代的胶质瘤细胞株中也得到了这种细胞~([4]).
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c-myc内含子结合蛋白1基因转染人脑胶质瘤细胞的研究
c-myc内含子结合蛋白1(MIBP1)基因是c-myc的上游调控基因之一,在前期的工作中我们检测了该基因在人脑胶质瘤中的表达,并完成了全长基因测序,Genebank注册:DQ231041,并构建了完整的MIBP1基因的真核表达载体pLX-SN-MIBP1[1].我们将此基因转染到胶质瘤细胞株SHG-44中,观察对人脑胶质瘤细胞的作用.
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抑癌基因Deleted in Liver Cancer 1在人胶质瘤细胞株中的作用及机制
目的 探讨抑癌基因DLC1表达的isoform 1及isoform 2两个亚型在人胶质瘤细胞株中的表达、功能及机制.方法 KT-PCK方法检测体外培养的胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44中DLC1 isoform 1,2的mRNA水平;10μM 5-aza-2'-de-oxycytidine(5'-AzA)或者共含有500 nM trichostatin A(TSA)处理细胞36 h,检测DLC1 isoform 1,2的表达;MTT方法检测转染DLC1 isoform 2及没有GAP活性的isoform 2突变体DLC1-K714E表达质粒对胶质瘤细胞株U87-MG和SHG-44增殖的影响.结果 在U87-MG细胞株中没有检测到DLC1 isoform 1;在SHG-44中检测到微量的DLC1 isoform 1,5'-AZA或者共含有TSA处理使其表达上调;DLC1 isoform 2在上述细胞株都能检测到,5'-AZA或者共含有TSA处理细胞未改变其表达水平:过表达DLC1 isoform 2及其突变体DCL1-K714E促进U87-MG和SHG-44细胞株增殖.结论 DLC1 isoform 1在胶质瘤细胞株中不表达或低表达,可能原因是由于不转录或者启动子发生甲基化.DLC1 isofonn 2有一定的表达水平.高表达的DLC1 isoform 2促进胶质瘤细胞增殖.且不依赖GAP活性.