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听神经瘤S518磷酸化Merlin蛋白的表达及与CD44结合特性
目的 探讨听神经瘤组织中S518磷酸化对Merlin蛋白与细胞表面糖蛋白CD44结合能力的影响及其与肿瘤生长的关系.方法 35例听神经瘤组织标本均经过病理学证实,用免疫组织化学技术和免疫印迹技术分析S518磷酸化Merlin蛋白的表达、组织学分布情况,以手术中切除的正常颅神经作对照.将各标本中S518磷酸化Merlin条带的相对灰度值与听神经瘤临床分期、瘤体大小、病程及囊性变进行相关分析.用免疫沉淀技术比较野生型Merlin蛋白及S518磷酸化Merlin蛋白与CD44结合能力的差异.结果 在听神经瘤组织中Merlin蛋白发生S518磷酸化且分布集中于核周;正常对照神经组织中Merlin也发生S518磷酸化,但是其含量较听神经瘤组织低.S518磷酸化的Merlin蛋白在听神经瘤组织中的表达量与临床分期、肿瘤大小、病程及囊性变之间无统计学相关关系.在听神经瘤组织中,与S518磷酸化的Merlin蛋白结合的CD44量高于与野生型Merlin蛋白结合的CD44的量.结论 在听神经瘤组织中,S518磷酸化的Merlin蛋白与CD44的结合能力增加,CD44与野生型Merlin蛋白和S518磷酸化Merlin蛋白结合后可能产生不同细胞生物学行为.
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KiSS-1基因重组真核质粒的构建、鉴定及其表达
目的 构建KiSS-1基因重组真核质粒,将其导入人高转移肝癌MHCC97-H细胞中,获得瞬时表达的细胞株,为进一步研究KiSS-1基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响奠定基础.方法 Trizol试剂法提取新鲜胎盘组织总RNA,经RT-PCR扩增目的 片段,PCR产物及真核表达载体分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌Ecoli.Dh5α扩增以获得重组载体,采用脂质体介导转染技术将高纯度的KiSS-1质粒转染到人高转移肝癌细胞株中,用RT-PCR和Western blot技术加以鉴定.结果 RT-PCR获得预期大小的特异性DNA片段,经PCR、双酶切鉴定及测序,证实已将KiSS-1基因cDNA片段正确插入真核表达载体中;RT-PCR、免疫细胞化学和Western blot证实KiSS-1基因已转染入MHCC97-H细胞中.结论 成功获得pcDNA3.1/HisC/KiSS-1重组质粒和瞬时表达KiSS-1基因的肝癌细胞,为后续建立稳定转染的KiSS-1高表达阳性细胞克隆奠定基础,为体内外实验研究KiSS-1对人肝癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响提供前提条件.
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Survivin shRNA 表达质粒的构建及其抑制survivin 表达的初步研究
目的 探讨survivin短发夹RNA(shRNA)的表达质粒对胆囊癌细胞survivin mRNA及蛋白表达的抑制作用.方法 构建pshRNA-survivin重组质粒,在脂质体的介导下转染胆囊癌细胞株GBCSD.RT-PCR分析survivinmRNA的表达;Westem blot检测survivin蛋白表达.结果 PCR和DNA测序证实表达质粒构建成功,并能明显地抑制GBC-SD/survivin mRNA的表达.结论 构建的pshRNA-survivin表达质粒能有效地抑制转染细胞survivin mRNA的表达,从而为肿瘤的生物学治疗提供新的方法和材料.
关键词： 胆囊肿瘤/病理学 Survivin蛋白 肿瘤抑制蛋白类 -
子宫内膜癌患者ER、PR、C-erbB-2、nm23、Bcl-2检测的临床意义
目的研究雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、C-erbB-2蛋白、nm23蛋白、Bcl-2蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义.方法应用免疫组化S-P法检测30例子宫内膜癌中ER、PR、C-erbB-2、nm23、Bcl-2的表达情况,并以15例癌旁正常内膜组织作对照.结果 ER、PR 在子宫内膜癌的表达与临床分期及病理分级有关,即临床分期越高,PR表达越弱.ER、PR表达随病理分级增高而增高,即在低分化癌中ER、PR呈低表达或不表达.C-erbB-2、nm23、Bcl-2在子宫内膜癌均有过度表达, nm23阳性表达率随临床分期及病理分级的增高而减低,即在有浸润、转移和低分化癌中无表达.Bcl-2与病理分级有关,即在高分化癌中有较高的表达(92.7%).结论 ER、PR水平的高低对估计预后和临床选择内分泌治疗具有重要意义;nm23基因可能在抑制子宫内膜癌发生转移中发挥重要作用, Bcl-2基因的激活和失控可能在子宫内膜癌发生中具有重要作用,Bcl-2蛋白的检测有助于子宫内膜癌的诊断.
