首页 > 文献资料
-
天花粉蛋白通过抑制核因子κB促进顺铂诱导喉癌细胞凋亡的研究
目的 研究低剂量顺铂和低浓度天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)联合作用抑制喉癌细胞(Hep-2细胞株和AMC-HN-8细胞株)增殖的作用及其机制.方法 设立不同的实验组,包括低浓度顺铂组(3 μg/ml)、高浓度顺铂组(10 μg/ml)、TCS组(5μg/ml)、TCS和顺铂联合作用组(5μg/mlTCS和3μg/ml顺铂)和阴性对照组；连续5d使用细胞增殖检测法(cell counting kit-8,CCK-8)和乳酸脱氢酶法检测不同实验组对喉癌细胞的抑制作用和细胞毒性；流式细胞仪和Hochest33258染色观察细胞凋亡；Western blot检测C-Jun氨基端激酶(JNK),磷酸化JNK、核因子κB (nuclear factor κB,NF-κB)、p38、磷酸化p38、κB抑制蛋白(inhibitor of κB,I-κB)及磷酸化I-κB的变化.结果 与TCS和低剂量顺铂单独作用相比,TCS和顺铂联合作用可明显抑制喉癌细胞的生长(P值均＜0.01),凋亡细胞数量增加；联合作用组的抑制效果与高浓度顺铂组差异无统计学意义,细胞毒性同TCS和顺铂单独作用相比差异无统计学意义(P＞0.05),而毒性低于高浓度顺铂组(P＜0.01)；Westem blot显示顺铂增强NF-κB转录因子活性,抑制JNK信号通路,TCS组主要激活JNK信号通路而抑制NF-κB,TCS和顺铂联合作用后磷酸化JNK保持高水平抑制NF-κB活性.结论 TCS通过激活JNK信号通路,同时抑制NF-κB转录因子活性,增强顺铂诱导喉癌细胞凋亡比例,从而降低其对细胞的毒性并增强其抗肿瘤疗效,为中药天花粉蛋白联合顺铂应用于喉癌临床治疗奠定了实验基础.
-
聚乙二醇修饰前后天花粉蛋白性质的比较研究
目的 对天花粉蛋白(TCS)进行定点突变、聚乙二醇(PEG)修饰,并将修饰前后TCS的诸多性质加以比较.方法 选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点YFF81-83进行定点突变,并将所构建的突变体TCSYFF81-83ACS在大肠杆菌中表达及纯化.随后通过该突变体第82位刚引入的半胱氨酸残基进行PEG定点修饰.通过比较研究,分析所构建PEG修饰型TCS的DNA酶活性、致核糖体失活活性、免疫原性、急性毒性以及药代动力学性质.结果 所构建的突变型TCS其活性与野生型TCS(wTCS)活性几乎相当,而免疫原性已显著降低.PEG修饰型TCS虽有活性下降,但其免疫原性比wTCS低(P＜0.05),急性毒性比wTCS低,LD50值约为wTCS的1.8倍(P＜0.05),血液内平均滞留时间和半衰期明显长于wTCS(P＜0.05).结论 通过基因工程及化学修饰方法改造TCS是可行的,所构建的突变型及PEG修饰型TCS值得进一步研究.
-
自介素-4和其他因子在天花粉蛋白诱导的卵清白蛋白特异性IgE应答过程中的作用
目的：研究小鼠模型中天花粉蛋白(TCS)诱导的卵清白蛋白(OVA)特异性的E型免疫球蛋白(IgE)应答反应的可能机理.方法：首先用抗白介素-4(IL-4)的单抗治疗TCS和卵清白蛋白(OVA)免疫的小鼠，通过减少内源性IL-4的水平，以观察其对血清中IgE抗体水平的影响.其次，用重组IL-4处理小鼠，通过增加外源性IL-4的水平观察其对血清中OVA特异性IgE形成的影响.后，我们在TCS免疫小鼠IgE形成过程中，用半定量PCR方法检测了腹腔淋巴结中CD40的配体(CD40L)，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-13(IL-13)基因表达的趋势.结果：抗IL-4的单抗可以抑制TCS对OVA诱导的特异性IgE的形成，但重组IL-4本身并不能引起OVA特异的IgE应答反应.在TCS的初次和二次免疫中均有较高的表达峰，且CD40L的表达峰与IL-4类似，仅持续较短的时间.结论：IL-4对于TCS诱导的IgE应答反应为必要非充分条件.CD40L、TNF-α和IL-13可能也参与了此过程，其中CD40L可能具有与IL-4同样重要的作用.
