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天花粉蛋白通过抑制核因子κB促进顺铂诱导喉癌细胞凋亡的研究
目的 研究低剂量顺铂和低浓度天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)联合作用抑制喉癌细胞(Hep-2细胞株和AMC-HN-8细胞株)增殖的作用及其机制.方法 设立不同的实验组,包括低浓度顺铂组(3 μg/ml)、高浓度顺铂组(10 μg/ml)、TCS组(5μg/ml)、TCS和顺铂联合作用组(5μg/mlTCS和3μg/ml顺铂)和阴性对照组；连续5d使用细胞增殖检测法(cell counting kit-8,CCK-8)和乳酸脱氢酶法检测不同实验组对喉癌细胞的抑制作用和细胞毒性；流式细胞仪和Hochest33258染色观察细胞凋亡；Western blot检测C-Jun氨基端激酶(JNK),磷酸化JNK、核因子κB (nuclear factor κB,NF-κB)、p38、磷酸化p38、κB抑制蛋白(inhibitor of κB,I-κB)及磷酸化I-κB的变化.结果 与TCS和低剂量顺铂单独作用相比,TCS和顺铂联合作用可明显抑制喉癌细胞的生长(P值均＜0.01),凋亡细胞数量增加；联合作用组的抑制效果与高浓度顺铂组差异无统计学意义,细胞毒性同TCS和顺铂单独作用相比差异无统计学意义(P＞0.05),而毒性低于高浓度顺铂组(P＜0.01)；Westem blot显示顺铂增强NF-κB转录因子活性,抑制JNK信号通路,TCS组主要激活JNK信号通路而抑制NF-κB,TCS和顺铂联合作用后磷酸化JNK保持高水平抑制NF-κB活性.结论 TCS通过激活JNK信号通路,同时抑制NF-κB转录因子活性,增强顺铂诱导喉癌细胞凋亡比例,从而降低其对细胞的毒性并增强其抗肿瘤疗效,为中药天花粉蛋白联合顺铂应用于喉癌临床治疗奠定了实验基础.
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JNK信号通路和p38MAPK信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,200～ 230 g,尾静脉注射盐酸多柔比星2 mg/kg,1次/周,连续6周,建立大鼠慢性心力衰竭模型.于第8周末,取成功制备慢性心力衰竭模型的45只大鼠,采用随机数字表法分为5组(n=9):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、吗啡预处理组(MPC组)、JNK抑制剂SP600125+吗啡预处理组(MSP组)和p38MAPK抑制剂SB203580+吗啡预处理组(MSB组).采用结扎冠状动脉左前降支30 min,再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型;MPC组于缺血前股静脉输注吗啡0.1 mg/kg,输注5 min后停止输注5 min,重复3次进行预处理;MSP组和MSB组于吗啡预处理前10 min时股静脉注射SP600125 0.5 mg/kg或SB203580 0.2 mg/kg.于再灌注120 min时处死大鼠,取心肌组织,计算左心室与右心室总体积(LV +RV),测定缺血危险区体积(AAR)和梗死区体积(IS),计算IS/AAR比值;采用免疫组化法测定心肌组织蛋白激酶δ(PKC δ)的表达水平.结果 5组间LV+RV和AAR比较差异无统计学意义(P＞0.05);与S组比较,I/R组和MSB组IS和IS/AAR比值升高,心肌组织PKC δ表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,MPC组和MSP组IS和IS/AAR比值降低,心肌组织PKC δ表达下调(P＜0.05),与MPC组比较,MSB组IS和IS/AAR比值升高,心肌组织PKC δ表达上调(P＜0.05),MSP组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 p38MAPK信号通路的激活参与了吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与下调PKC δ的表达有关;JNK信号通路无此作用.
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JNK-c-Jun信号通路下调连接蛋白43的表达引起肾小管上皮细胞转分化
目的 观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)-c-Jun通路对连接蛋白43(Cx43)表达的影响及在转化生长因子(TGF)β1诱导的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(TEMT)中的作用.方法 大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)随机分成3组:对照组、TGF-β1(10μg/L)组和TGF-β1(10 μg/L)+JNK选择性抑制剂SP600125(50 μmol/L)组.用免疫细胞化学、Western印迹检测JNK、c -Jun、连接蛋白43( Cx43)、上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和肌成纤维细胞标志物α-SMA的表达.用RT-PCR检测Cx43的mRNA水平.用激光共聚焦显微镜荧光漂白恢复( FRAP)技术检测NRK-52E细胞间通讯功能.结果 TGF-β1引起肾小管上皮细胞α-SMA、JNK、c-Jun表达上调(均P＜0.05),Cx43、E-cadherin表达下调(均P＜0.05),Cx43的mRNA水平下降(P＜0.05),细胞间通迅功能下降(P＜0.05).JNK抑制剂处理后,上述改变明显减轻.结论 TGF-β1引起肾小管上皮细胞内JNK表达上调,增加c-Jun活性,从而抑制Cx43的表达和降低细胞间通迅功能,导致TEMT.
关键词： JNK丝裂原活化蛋白激酶 连接蛋白43 细胞系 转化 肾小管上皮细胞
