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豚鼠耳蜗不同发育阶段神经生长因子的分布及意义
多种神经营养因子参与内耳的发生、发育和听觉功能的维护,如脑源性神经营养因子,胶质细胞源性营养因子等[1-2].神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是早发现的神经营养因子,主要对神经元尤其是感觉神经元的存活、发育和正常功能的维持起重要作用[3-4].我们于2005年9月至2006年2月利用免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹技术检测豚鼠耳蜗各发育阶段NGF的表达及分布,初步探讨NGF在听觉通路发育中的作用.
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胶质细胞源性神经营养因子基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定
目的克隆大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因,构建含有GDNF基因的重组腺病毒载体,为转染神经干细胞和基因治疗奠定基础.方法从大鼠脑组织中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应方法扩增出约660bp的片段,并将该片段克隆到载体pAdTrack-CMV中,进行酶切鉴定和序列分析.结果证实成功构建了含有GDNF基因的重组腺病毒质粒.结论克隆到正确的大鼠GDNF基因,并构建出重组质粒pAd-GDNF,为下一步重组腺病毒颗粒和基因治疗打下基础.
关键词： 基因克隆 胶质细胞源性营养因子 逆转录聚合酶链反应 腺病毒载体 序列分析 -
胶质细胞源性神经营养因子对脑出血大鼠神经功能的保护作用
目的:研究胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对脑出血大鼠的保护作用,探讨其发生机制.方法:克隆胚胎鼠的GDNF基因,构建pCDNA3-GDNF-GFP质粒,注射于大鼠脑出血部位.选用成年SD大鼠制备脑出血模型,共分9组,每组20只,假手术Ⅰ组,脑出血Ⅰ组,干预Ⅰ组观察大鼠行为学、脑组织含水量、Na+,K+离子浓度的变化;假手术Ⅱ组,脑出血Ⅱ组,干预Ⅱ组观察血脑屏障的改变;假手术Ⅲ组,脑出血Ⅲ组,干预Ⅲ组观察组织形态学和GDNF阳性细胞的表达.结果:出血组和干预组相比,神经缺损评分在出血后24 h为8.53±1.44和8.34±1.28(P＞0.05),72 h,7 d,14 d为7.58±1.08,5.46±0.74,3.06±0.43和4.21±0.76,3.25±0.52,1.92±0.26(P＜0.01).72 h,7 d时脑组织含水量为(84.26±0.64)%,(80.38±0.86)%和(78.26±0.42)%,(77.51±0.33)%(P＜0.01).72 h,7 d时Na+,K+离子浓度两组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).干预组坏死体积较出血组减小,GDNF阳性细胞表达明显增加(P＜0.01).结论:GDNF能改善出血大鼠行为学,减轻脑水肿,促进神经功能恢复,增加脑组织抗损伤能力,有一定的治疗意义.
关键词： 脑出血 胶质细胞源性营养因子 基因疗法 -
GDNF基因克隆及表达载体的构建
目的:克隆大鼠胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)全长基因,构建真核细胞表达质粒.方法:从孕17 d大鼠胚胎脑组织中提取RNA,参照<分子克隆实验指南>,合成cDNA第一、二链,加入引物PCR扩增目的基因,与pcDNA3质粒连接,构建表达质粒.结果:提取的总RNA经纯化后电泳出现18 s和28 s 2个条带,PCR扩增目的基因为630 bp的条带,测序结果为633bp.结论:正确地克隆了大鼠GDNF基因全序列,为进一步获得重组活性的GDNF蛋白奠定基础.
关键词： 胶质细胞源性营养因子 基因序列 载体 克隆 -
胶质细胞源性营养因子和美金胺对脑室周围白质软化新生大鼠远期预后的影响
目的 评估胶质细胞源性营养因子(GDNF)和美金胺对脑室周围白质软化(PVL)新生Sprague-Dawley大鼠远期预后的影响.方法 32只5日龄新生大鼠随机分为假手术(Sham)组、PVL组、GDNF组以及美金胺(Mem)组.除Sham组外,其他3组均行右颈总动脉结扎及缺氧处理(PVL造模).GDNF组和Mem组分别于造模后即刻注射GDNF 100 μg/kg和Mem 20 mg/kg.每天对各组大鼠称重.于26日龄(造模后21 d)对各组大鼠进行Morris水迷宫测试及Rivlin斜板实验,记录水迷宫测试时的逃逸潜伏期(escape latency,EL)和游泳距离以及斜板测试时在斜板上至少停留5 s的大倾斜角度.结果 术后PVL组大鼠的平均体重明显低于Sham组和两个用药组(P<0.05);EI值和游泳距离均较Sham组和两个用药组显著延长(P <0.05或＜0.01);在斜板上至少停留5s的大倾斜角度明显低于Sham组和两个用药组(P<0.05).两个用药组和Sham组在体重、EI和游泳距离以及斜板的大倾斜角度之间的差异均无统计学意义.结论 GDNF和Mem均可增强PVL大鼠的空间辨识、学习记忆和运动协调能力,促进体重增长,明显改善远期预后.
关键词： 脑室周围白质软化 胶质细胞源性营养因子 美金胺 新生大鼠
