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山腊梅内生真菌分离及其抑菌活性初步研究
目的 明确药用植物山腊梅内生菌资源及其抑菌活性.方法 通过组织块法对山腊梅内生真菌进行分离,并选择大肠杆菌和金色葡萄球菌为指示菌,采用打孔法对分离菌株进行抑菌活性筛选.结果 从山腊梅植物中分离获得42株内生真菌,13株菌株对指示菌具有抑菌活性,占总菌株数的30.95％,2株菌株对指示菌具有明显的抑菌活性.结论 山腊梅植物组织中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用.
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南海红树林内生真菌5094代谢产物研究
目的 研究南海红树林内生真菌5094的代谢产物.方法 采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶色谱法等进行分离纯化,并通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构.结果 从南海红树林内生真菌5094的菌体中分离得到6个代谢产物.经波谱解析,分别为:1,4-二羟基-7-甲基-9,10-蒽醌(1),大黄素甲醚(2),大黄素-1,6-二甲醚(3),Chrysophanol (4),1,4,6-trihydroxy-2-methoxy-7-methylanthracene-9,10-dione(5),大黄素(6).初步药理活性显示化合物1对口腔癌细胞KB,KBv200的抗肿瘤活性值分别为5.5和10.2 μmol.结论 所有化合物均首次从南海红树林内生真菌5094中分离得到.
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濒危药用植物南方山荷叶内生真菌分离及其抑菌活性初步研究
目的 探明濒危药用植物南方山荷叶内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征.方法 通过组织块法对内生真菌进行了分离,并选择5种植物病原真菌和4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性.结果 从南方山荷叶根、茎、叶中分离出11株内生真菌,茎部和叶部多,其次为根部；经形态学分类鉴定归于2个目,2个科,5个属,束丝菌属为优势菌属；在分离菌株中,有5株菌对1种或多种供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占分离菌株数的45.5％；有2株菌对2种供试植物病原真菌指示菌有明显的抑制作用,其占所分离菌株总数的18.2％；有1株菌对4种供试植物病原真菌指示菌有明显抑制作用；有2株内生真菌均对1种供试指示细菌具有明显的抑制作用.结论 南方山荷叶内生真菌具有多样性和明显的抗真菌活性,抑菌活性菌株主要分布在束丝菌属、曲霉属和短链霉属.
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内生真菌在中药中的应用前景
介绍了内生真菌在中药中的研究现状,包括内生真菌的分布特征、对植物的作用、次生代谢产物等方面的研究,旨在突出内生真菌在中药中的应用前景.
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厚朴内生真菌的研究(Ⅰ):菌种分离及其鉴定
从两个不同来源的厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的茎中,分离获得内生真菌48株,经显微形态观察,鉴定为1纲、3目、6科、16属.不同来源的厚朴内生真菌的种群、数量及分布部位存在显著差异.
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射干内生真菌SRAP-PCR反应条件的优化
以从射干中分离纯化出的96株内生真菌DNA为研究对象,采用单因素试验设计,对影响SRAP-PCR反应的DNA模板、Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶和引物对浓度进行了优化,以确定适合射干内生真菌的SRAP-PCR反应佳反应体系.结果表明,建立的射干内生真菌佳反应体系为20 μL,反应体系中含10×PCR buffer(不合Mg2)2.0 μL,DNA模板50 ng,Mg2+浓度为2.5mmol·L-1,dNTPs为0.5 mmol·L-1,引物1.0μmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5U.利用该反应体系从90对引物中筛选出可扩增清晰、稳定性好条带的引物38对.该体系为今后利用SRAP分子标记技术开展射干内生真菌的分子遗传学研究奠定基础.
关键词： 射干 内生真菌 相关序列扩增多态型标记 单因素优化 -
一株产胞外多糖丹参内生真菌ZDH1-1的分离鉴定及其胞外多糖的提取工艺优化
目的 对产胞外多糖的丹参内生真菌ZDH1-1进行菌种鉴定,并对其胞外多糖的提取工艺进行优化.方法 采用形态鉴定结合ITS序列分析对内生真菌ZDH1-1进行鉴定;采用苯酚硫酸法对内生真菌ZDH1-1胞外多糖进行含量测定;在单因素试验基础上,以乙醇浓度、醇沉时间、醇沉温度为自变量,胞外多糖浓度为因变量,通过Box-Behnken设计对3个自变量各水平进行二项式拟合,优选内生真菌ZDH1-1胞外多糖的提取工艺.结果 丹参内生真菌ZDH1-1胞外多糖的佳提取条件为乙醇-真菌发酵液体积比4:1,乙醇沉淀时间10h,乙醇沉淀温度12℃,ZDH1-1胞外多糖浓度为4.50mg/mL,与预测值的偏差1.96％.结论 优化的丹参内生真菌ZDH1-1胞外多糖提取工艺快速简便,稳定可靠,为丹参内生真菌多糖的开发利用提供参考.
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一株产龙胆苦苷的麻花秦艽内生真菌的分离鉴定
目的 从药用植物麻花秦艽的根、茎和叶中分离出可产龙胆苦苷的内生真菌菌株,以寻找可替代植物的微生物资源,从而可以更好地保护野生麻花秦艽资源.方法 用PDA培养基,采用组织分离法从四川阿坝红原麻花秦艽的根、茎和叶中分离内生真菌,并通过高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)对内生真菌的发酵产物进行检测.后用形态学和分子生物学手段对筛选出的内生真菌进行菌株鉴定.结果 从阿坝红原麻花秦艽的根、茎和叶中总共分离得到了10株内生真菌,其中的一株内生真菌G J-01的发酵液的正丁醇萃取物通过高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测,结果表明其次级代谢产物中存在龙胆苦苷,含量为4.16mg/L.经形态学和分子生物学手段鉴定,确认内生真菌GJ-01为腐皮镰刀菌.结论 从阿坝红原麻花秦艽中分离得到了一株产龙胆苦苷的内生真菌GJ-01,可作为一种新的产龙胆苦苷的微生物资源.
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白花丹参毛状根诱导体系的建立与其内生真菌提高毛状根中丹酚酸含量的研究
目的 建立白花丹参毛状根诱导体系及检测其丹酚酸的合成,研究内生真菌对毛状根中丹酚酸生物合成的影响.方法 通过发根农杆菌ACCC10060浸染白花丹参叶片,成功诱导出毛状根,毛状根在6,7-V液体培养基中扩大培养60d,并测定毛状根中丹酚酸的含量.白花丹参毛状根在6,7-V培养基中培养12 d后,添加从白花丹参分离的不同浓度的内生真菌诱导子,测定毛状根丹酚酸含量.结果 发根农杆菌ACCC10060能够成功从白花丹参叶片诱导出毛状根,毛状根培养40 d和50 d时丹酚酸B和丹参素的高产量可达9.38mg·g-1 DW和1.281 mg·g-1DW.60(μg glc equ).m1-1内生真菌诱导子是促进丹酚酸合成的佳浓度,内生真菌处理后30 d后,丹酚酸B和丹参素的产量分别增加1.55和2.68倍.结论 白花丹参毛状根诱导培养可以做为一种生产丹酚酸的有效途径,60(μg glc equ)·ml-1内生真菌诱导子可以显著提高毛状根中丹酚酸含量.
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高山红景天内生真菌的分离及产红景天苷菌株的筛选
目的 分离和鉴定珍贵药用植物高山红景天根及根茎中的内生真菌,并从中筛选出可产红景天苷的菌株.方法 用PDA培养基,通过组织分离法从高山红景天根及根茎中分离内生真菌,并采用传统的鉴定方法对纯化后的菌株进行分类鉴定.通过薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对分离得到的内生真菌发酵产物进行检测来获得产红景天苷的菌株.结果 分离获得内生真菌20株,初步鉴定为3目、5科、9属.其中镰孢霉属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)和曲霉属(Aspergillus)为优势种群.经TLC和HPLC法筛选得到一株可代谢产生活性物质红景天苷的内生真菌G5.结论 高山红景天内生真菌在数量和种类上存在极其丰富的多样性;而且其内生真菌具有产生与其宿主相同或相似生理活性成分的能力.
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濒危中药替代品的现状及替代途径
在自然资源短缺导致一些药用资源濒危的现实情况下，该文对寻求濒危中药替代品的途径进行分析，明确了应在中医药基本理论的指导下，充分结合现代研究成果，通过性味、功能、主治类同替代和扩大药用部位替代、近缘替代、内生真菌替代及现代生物技术、人工合成和培育替代等，确定濒危中药替代品的方法。这些方法在寻求濒危中药替代品的实践中具有一定指导意义。
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直缘乌头内生真菌Alternaria solani化学成分研究
目的:对直缘乌头内生真菌Alternaria solani的化学成分进行研究.方法:采用各种柱色谱对直缘乌头内生真菌Al-ternaria solani的甲醇提取物进行分离纯化,经波谱数据(1 H-NMR,13 C-NMR,MS)进行结构鉴定.结果:分离得到15个化合物,分别鉴定为:20-羟基麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(1)、(22E,24R)-麦角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮(2)、(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(3)、24-亚甲基-麦角甾-7-烯-3β-醇(4)、过氧麦角甾醇(5)、cyclo(D)-Pro-(D)-Leu(6)、cyclo-(L-Val-L-Pro)(7)、cyclo-(S-Pro-S-Ile)(8)、tentoxin(9)、porrotoxin(10)、7d-ehydroxyl-zinniol(11)、zinniol(12)、8-zinniol methyl ether(13)、3-甲氧基-4-甲基-5-(3',3′-二甲基烯丙氧基)-2甲-氧基甲基苯甲酸(14)、 拟盘多毛孢H2-倍半萜内酯(15).结论:从直缘乌头内生真菌Al etr nra ia soal ni中分离得到15个化合物,其中化合物2～10,12～15是首次从该植物内生真菌中分离得到.
关键词： 直缘乌头 Alternariasolani 内生真菌 化学成分 -
碧江乌头内生真菌Alternaria solani次生代谢产物研究
目的:对碧江乌头内生真菌Alternaria solani次生代谢产物进行研究.方法:将内生真菌Alternaria solani发酵产物用甲醇提取,回收甲醇至浸膏状,浸膏用乙酸乙酯萃取,得粗提物.粗提物用各种柱色谱进行分离纯化,经光谱数据(1 H-NMR,13C-NMR,MS)进行结构鉴定.结果:分离得到12个化合物,分别鉴定为:(22E,24R)-Ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(1),1,3-二油酸甘油酯(2),5-(3',3'-Dimethylallyloxy)-3-methoxy-4-methylphthalide(3),拟盘多毛孢H2-倍半萜内酯(4),过氧麦角甾醇(5),7-dehydroxyl-zinniol(6),麦角甾-7,22-二烯-3β,5,6-三醇(7),9-octadecenoic acid-2',3'-dihydroxy propyl es-ter(8),8-甲基塔拉胺(9),查斯曼宁(10),滇乌碱(11),crassicauline A(12).结论:从内生真菌Alternaria solani中分离得到12个化合物,其中化合物9~12均为首次分离得到.
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植物来源内生真菌Bipolaris sp.TJ-1的次生代谢产物研究
目的:研究植物内生真菌Bipolaris sp.TJ-1的次生代谢产物.方法:利用硅胶、凝胶Sephadex LH-20、高效液相等色谱方法,对菌种的大米发酵提取物进行系统的分离纯化,并根据波谱学数据和理化常数分析等手段鉴定化合物结构.结果:共分离鉴定9个化合物,分别为penicillide(1),dehydroisopenicillide (2),3,4-二甲氧基肉桂酸(3),N-苯乙基乙酰胺(4),(2R,4R)-harzialactone A(5),4-hydroxykigelin (6),6-methoxymellein (7),3,4-dihydro-6,8-dihydroxy-3-methylisocoumarin (8)和4-hydroxy-6-methoxymellein (9).结论:化合物1～9均为首次从离蠕孢属内生真菌中分离得到.
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中药内生真菌化学多样性的研究进展
中药植物内生真菌可以产生许多生物活性物质,有些代谢产物与宿主相同或相似.由于中药植物内生真菌的多样性,使其成为新药研发的宝库,同时对珍稀濒危植物的可持续利用具有重要意义.总结近年文献,对中药中蕨类植物、裸子植物和被子植物等内生真菌的代谢产物多样性及报道的生物活性进行综述,以供参考.
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植物内生真菌应用前景
内生真菌(endophyte)是存在于健康植物的茎叶中.形成不明显侵染的一类真菌.植物与内生真菌的关系是互惠共生的,表现在一方面植物为内生真菌提供光合产物和矿物质; 另一方面内生真菌的代谢物能刺激植物的生长发育,提高宿主植物对生物胁迫和非生物胁迫的抵抗能力.
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内生真菌Alternaria tenuissima PC-005抗耐药菌活性成分研究
目的 研究内生真菌Alternaria tenuissima PC-005次生代谢产物抗耐药菌的活性成分.方法 采用硅胶色谱、羟丙基葡聚糖凝胶柱色谱、高效液相色谱等分离纯化手段对内生真菌PC-005次生代谢物进行分离纯化,利用MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱分析技术对分离得到的单体化合物进行结构鉴定;采用96孔板法测试单体化合物对临床耐药菌的抗菌活性.结果 从内生真菌PC-005次生代谢物的活性组分中分离得到7个化合物,分别为5-甲氧基格链孢酚(1)、格链孢酚(2)、对羟基苯乙酮(3)、β-谷甾醇3-O-β-D-葡萄糖苷-6’-O-棕榈酸酯(4)、β-腺苷(5)、细格菌素(6)和十八碳二烯酸(7).化合物1、6和7对多重耐药肺炎克雷伯杆菌、普通变形杆菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌、屎肠球菌和鲍曼不动杆菌有抑制作用,低抑菌浓度为62.5～500 μg·mL-1.结论 化合物3～7均为从内生菌Alternaria tenuissima代谢物中首次分离.化合物1、6和7为内生真菌Alternaria tenuissima PC-005抗耐药菌的活性成分.
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中草药日本鸢尾内生真菌的分离及其初步鉴定
目的 分析日本鸢尾(Iris japonica)内生真菌的类群分布.方法 通过菌落形态特征、显微镜下的孢子观察及基于ITS序列分析的分子生物学鉴定分析日本鸢尾各部位内生真菌的类群组成.结果 从日本鸢尾的根茎叶中共分离得到5种内生真菌.根中分离得到的内生真菌为橘青霉(Penicillium citrinum)、 尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),茎中为小新壳梭孢菌(Neofusicoccum parvum),叶中为橘青霉(Penicillium citrinum)、肉色隔孢伏革菌(Peniophora incarnata)、首都叶点霉(Phyllosticta capitalensis).结论 自日本鸢尾分离获得5种内生真菌,其分布具有一定的组织特异性,可为药用植物内生真菌的开发和利用提供一定基础.
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FAAS法测定红树内生真菌Nigrospora sp.菌体中的微量元素
目的 测定红树内生真菌Nigrospora sp.菌体中的微量元素.方法 采用火焰原子吸收光谱法(FAAS)对湛江红树木榄内生真菌菌体中的Fe、Zn、Cu、Ca、Mg、Mn、Cd和Pb等微量元素进行了分析测定,结果 发现其Fe、Zn、Cu、Ca、Mg和Mn等元素的含量都比较丰富,未检出Cd和Pb.数据显示相对标准偏差为0.30％～3.93％,回收率为96.8％～102.6％,结论 该法快速、简单、结果可靠,为进一步对红树木榄内生真菌探讨研究提供更全面的分析数据.
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槲寄生内生真菌发酵产物抗肿瘤作用的初步研究
目的:初步研究槲寄生内生真菌发酵产物的抗肿瘤药理作用.方法:从槲寄生植株中分离出内生真菌,采用MTT法对JF、A1和G6的发酵产物进行了抗肿瘤药理活性研究.结果:从槲寄生中分离到JF、A1、G6等11株内生真菌.JF、A1和G6的发酵产物都具有一定的抗肿瘤活性,其中JF、G6对人胃癌细胞SGC-7901抑制作用较强;G6、A1对人肝癌细胞SMMC-7721抑制作用较强,且随发酵天数的增加作用明显加强;然而三者发酵产物对小鼠脾淋巴细胞增殖没有明显促进作用.结论:槲寄生内生真菌发酵产物同槲寄生一样具有抗肿瘤作用,值得进一步深入研究.
