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编码基因pac的DNA疫苗经鼻粘膜免疫定菌鼠的研究
目的检测pCIA-P DNA防龋疫苗经鼻粘膜免疫定菌鼠的效果,并对两种不同的载体系统进行对比.方法将30只出生后20 d断乳的SD雌鼠随机分为6组,制备定菌模型.分别用裸DNA(A组)、DNA-Dosper复合体(B组)、DNA-Bupivacaine复合体(C组)、pCI质粒(D组)及无菌水(E组)经鼻粘膜免疫大鼠,裸DNA股四头肌注射(F组)为阳性对照.2周后加强免疫1次.70 d鼠龄时收集唾液、血清及粪便,酶联免疫吸附实验检测特异性抗体,处死大鼠进行Keyes记分,单因素方差分析法分析结果.结果 B、C、F组血清特异性抗PAc IgG水平和B、C组唾液中特异性抗PAc IgA抗体水平明显高于其他组(P<0.01).疫苗免疫组龋齿记分明显低于阴性对照组(P<0.01),其中B、C组效果好.结论编码基因pac的pCIA-P DNA防龋疫苗经鼻粘膜途径进行免疫可以有效预防龋病的发生,阳离子脂质体Dosper和局部麻醉药Bupivacaine能够增强核酸疫苗的免疫效能.
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汉坦病毒包膜糖蛋白G1、G2基因的DNA免疫
目的将编码汉坦病毒浙37(Z37)株包膜糖蛋白G1、G2的真核表达质粒免疫小鼠,观察其能否诱导体液免疫应答.方法重组质粒pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2以不同方式免疫BALB/C小鼠,用免疫荧光测定(IFA)法检测血特异性抗体,用半微量直接免疫酶斑减少中和试验检测血中和抗体.经肌内注射途径免疫15只BALB/C小鼠,3组小鼠分别注射100μg pcDNA3.1、pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2;每只小鼠免疫3次,初次免疫后4周,加强2次,间隔3周.经基因枪免疫9只BALB/C小鼠,3组小鼠分别注射1.5μg pcDNA3.1、pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2;每只小鼠免疫2次,初次免疫后4周,加强1次.结果 1.经肌内注射免疫时,产生特异性抗体的小鼠个数分别是:pcDNA3.1-G1组为5只中3只,pcDNA3.1-G2组为5只中2只;荧光抗体滴度1:20～1:80;产生中和抗体的小鼠个数分别是:pcDNA3.1-G1组为5只中1只,pcDNA3.1-G2组为5只中2只;中和抗体滴度1:10～1:20.2.经基因枪免疫时,实验组小鼠都产生了特异性抗体和中和抗体.荧光抗体滴度1:20～1:320,中和抗体滴度≥1:10.结论重组质粒pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2能诱导小鼠产生有效的体液免疫应答.
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重组人乙型肝炎病毒S基因表达的体内外评价
目的构建能表达乙型肝炎病毒(HBV)S基因的DNA疫苗,并在离体与活体条件下评价重组S基因的表达.方法将克隆的S-X基因片段插入真核细胞表达载体,获得重组质粒,在离体转录系统与转染细胞系中表达重组S基因,并在小鼠中评价HBsAg激发抗-HBs的效果.结果 S基因的表达已通过Northern印迹杂交、Western印迹杂交和ELISA(抗原及抗体检测)予以证实.结论 S基因已成功地实现体外重组与表达.
