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芦荟提取物对脂多糖诱导的人牙周膜细胞炎性反应的抑制作用
目的:探讨芦荟(AVE)提取物对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜细胞(hPDLCs)炎性反应的作用.方法:将hPDLCs分为对照组,模型组(1 μg/ml LPS)和AVE组,浓度为0.05,0.1,0.2 mg/ml的AVE分别处理AVE组的hPDLCs;MTT法测定各组细胞存活率;ELISA法检测细胞上清中IL-6含量;用免疫细胞化学染色检测TLR4的表达情况;免疫荧光染色检测NF-κB-p65的核转情况.结果:各组细胞存活率差异没有显著性,模型组上清液中的IL-6含量显著升高,TLR4表达及NF-κB-p65的核转均明显上调;与模型组相比,芦荟提取物呈剂量依赖性抑制细胞上清液中IL-6的分泌,下调TLR4表达及NF-κB-p65的核转移.结论:芦荟提取物能有效抑制人牙周膜细胞的炎症反应,其机制与TLR4/NF-κB-p65信号通路有关.
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牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导小鼠成骨细胞表达白细胞介素-23
目的：探讨牙髓卟啉单胞菌（P．e）脂多糖（LPS）对小鼠成骨细胞 IL-23mRNA 和蛋白表达的影响，以及磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信号通路是否参与了该过程。方法：采用 real-time PCR 和 Western blot 法检测 P．e LPS 诱导 MC3T3-E1细胞表达IL-23mRNA 和蛋白的情况，以及用 PI3K 信号通路抑制剂 LY294002预处理细胞后，IL-23mRNA 和蛋白表达的变化。结果：P．e LPS 刺激 MC3T3-E1细胞后，IL-23mRNA 的表达增加具有浓度依赖性和时间依赖性（P ＜0．05），IL-23蛋白的表达增加具有时间依赖性（P ＜0．05）；LY294002预处理细胞后，P．e LPS 诱导的 IL-23mRNA 和蛋白的表达均显著降低（P ＜0．05）。结论：P．e LPS 能诱导小鼠成骨细胞表达 IL-23mRNA 和蛋白，PI3K 信号通路可能参与了此过程。
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黄芩苷抑制脂多糖诱导大鼠牙周炎的组织学观察
取10只正常大鼠作为对照组（A 组），用40只大鼠右上颌第一、二磨牙间牙龈局部注射脂多糖建立大鼠牙周炎模型，随机分为4组：牙周炎组（B 组）、实验组（C1、C2、C3组）（n ＝10），实验组实验牙的龈沟内每日注射黄芩苷溶液0．2 ml（浓度分别为0．01、0．1和1．0μg／ml），牙周炎组注射等量生理盐水，连续3 d。用药后7 d 处死大鼠取样，光镜下观察组织学变化。牙周炎组牙周炎症明显重于实验组，各组破骨细胞数由多至少依次为：B 组、C1组、C2组、C3组、A 组，组间差异有统计学意义（P ＜0．05）。结果表明黄芩苷可以抑制脂多糖对大鼠牙周组织的损害。
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脂多糖诱导成牙本质细胞凋亡模型的建立与评价
目的:建立并评价脂多糖(LPS)诱导的成牙本质细胞(OB)凋亡模型.方法:采用梯度LPS(0、0.1、1、10、100μg/mL)刺激法诱导小鼠OB细胞系MDPC-23细胞凋亡;分别于诱导后24、48、72、96 h各时间点,以MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡比例,确定合适的诱导浓度和时间后,建立OB细胞凋亡模型,并通过Hoechst染色观察细胞形态和凋亡比例.结果:0.1μg/mL和1 μg/mL的LPS作用24h可明显促进MDPC-23细胞增殖,72 h后则明显抑制细胞增殖(P<0.05);当LPS浓度大于1μg/mL时,对细胞的影响以毒性作用为主.在各个时间点不同浓度的LPS均可诱导MDPC-23细胞凋亡,其中以0.1μg/mL的LPS诱导MDPC-23细胞凋亡的效果较理想.Hoechst染色显示0.1μg/mL LPS可诱导细胞出现典型的凋亡形态学特征,且随着LPS作用时间的延长,凋亡细胞比例逐渐增高(P<0.05),但96 h时有大量细胞死亡.结论:LPS诱导MDPC-23细胞凋亡的合适浓度为0.1μg/mL,合适作用时间为24～72 h.
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低氧条件下红景天苷对脂多糖诱导牙周膜细胞表达活性氧及炎症因子的影响
目的：探讨红景天苷（SAL）对低氧条件下脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜细胞（hPDLCs）表达活性氧（ROS）及炎症因子的影响，并初步探讨其相关作用机制。方法：首先用含 SAL 终浓度为0、30、60、100μg／mL的 DMEM分别培养第5代 hPDLCs，并于培养后1、2、3、4、5、6 d 各时间点，采用 MTT 法检测各浓度组细胞的增殖活性。然后再取第5代 hPDLCs 并将其随机分为5组，分别用不含 LPS 和 SAL 的 DMEM（对照组）以及含10μg／mL LPS（单纯 LPS 组）、10μg／mL LPS ＋30μg／mL SAL、10μg／mL LPS ＋60μg／mL SAL、10μg／mL LPS ＋100μg／mL SAL 的 DMEM进行低氧（10 mL／L O2）培养；连续培养6 h 后，收集各组细胞及其上清液，分别用 DCFH －DA 法检测各组细胞中 ROS 的表达水平、RT －PCR 和 ELISA 法检测各组细胞中 TNF －α、IL －1β、IL －6的 mRNA 和蛋白的表达水平、Western －blot 法检测对照组、单纯 LPS 组和10μg／mL LPS ＋100μg／mL SAL 细胞的核转录因子－κB（NF－κB）信号通路的磷酸化水平。结果：30、60、100μg／mL SAL 对 hPDLCs 的增殖无明显影响（P ＞0．05）；上述3个浓度 SAL 均能明显降低 LPS 诱导的 hPDLCs 中 ROS 水平以及TNF －α、IL －1β、IL －6 mRNA 和蛋白的表达水平（P ＜0．05）；100μg／mL SAL 可明显降低 LPS 诱导的 hPDLCs 中NF －κB信号通路的磷酸化水平（P ＜0．05）。结论：SAL 可能通过抑制 NF －κB 信号通路的激活，降低低氧条件下 LPS诱导的 hPDLCs 中活性氧及炎症因子的表达水平。
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炎症状态下 A20基因沉默对人牙髓干细胞增殖及分化的影响
目的：探讨在体外模拟炎症状态下，A20基因沉默对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖及分化能力的影响。方法：用脂多糖（LPS）刺激 hDPSCs，Western－Blot 技术检测不同时间点锌指蛋白 A20表达量的变化；通过 RNA 干涉技术构建 A20基因沉默的细胞模型，CCK －8法检测细胞增殖能力；矿化液诱导培养后，用碱性磷酸酶检测试剂盒测定 ALP 的活性，茜素红染色观察矿化结节的形成，并用 RT－PCT 检测成牙／成骨分化相关基因ALP、DSPP、OCN、RUNX2表达水平。结果：hDPSCs 在 LPS 刺激2 h 后，A20的表达即显著增加，在接近72 h 时其表达量恢复至基础水平；在模拟炎症状态下，与对照组相比，A20基因沉默后的 hDPSCs，其增殖能力明显降低（P ＜0．05），ALP 的活性、矿化结节的形成、成牙／成骨分化相关基因的表达水平均受到抑制（P ＜0．05）。结论：在炎症状态下，A20在早期呈现一过性的高表达，A20基因沉默能够抑制 hDPSCs 的增殖及分化能力。
关键词： 锌指蛋白A20 人牙髓干细胞(hDPSCs) 脂多糖(LPS) 增殖 分化 -
新生大鼠内毒素性急性肺损伤肺组织MDA、SOD和IL-10、IL-18的改变
目的探讨氧化/抗氧化及细胞因子在新生大鼠急性肺损伤中的变化.方法用脂多糖(LPS)制备新生大鼠急性损伤模型,用化学方法和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测肺组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-18(IL-18)的改变.结果MDA在应用LPS后1小时明显高于正常对照组,(31.99±1.73)nmol/mg肺蛋白VS(10.68±O.67)nmol/mg肺蛋白,持续至24小时;SOD含量在应用LPS后1小时即明显低于正常对照组,(69.86±2.94)NU/mg肺蛋白VS(85.99±1.89)NU/mg肺蛋白,4小时低(58.61±3.01)NU/mg肺蛋白,8小时有所恢复,16小时基本正常;IL-10在注射LPS后4小时明显升高[(9.46±0.53)pg/mg肺蛋白],持续至16小时仍高于正常对照组(8.57±0.38)pg/mg肺蛋白,24小时下降至正常;IL-18在应用LPS后1小时即明显增多(10.73±0.29)pg/mg肺蛋白,持续至24小时.结论在LPS造成的新生大鼠急性肺损伤中,存在明显的氧化/抗氧化平衡失调,并有抑炎性和促炎症介质的失调,炎症介质释放的失调和氧化/抗氧化的失衡可能相互协同,加重肺损伤.
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小鼠早产模型的研究进展
早产是世界范围内导致5岁以下儿童死亡的首要原因,同时早产会增加儿童神经功能发育障碍和成年后患慢性疾病的风险,因此探讨早产发生机制对儿童健康具有重要意义.早产(PTB)是一个多因素导致的综合征,具体发生机制尚不清楚.由于伦理学的限制,基于人类的早产实验研究困难,因此采用动物模型来验证临床观察假说十分重要.自上世纪九十年代起,小鼠成为研究早产的主要动物,本文综述了几种常用的建立小鼠早产模型的方法,包括激素模型、感染模型、炎症模型等,并对其效率和优缺点进行了比较分析,为早产的基础和临床研究提供一定的参考依据.
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脂多糖诱导的非特异性炎症对大鼠睾丸功能的影响
目的:探讨脂多糖(LPS)诱导的非特异性炎症对大鼠睾丸功能的影响.方法:利用磁分离均相酶联免疫技术、免疫组织化学、原位杂交方法分别检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平以及生精上皮内增殖细胞核抗原(PCNA)、雄激素结合蛋白(ABP)mRNA的表达.结果:与对照组相比实验组血清T升高、ABPmRNA表达增多(P＜0.05)以及生精上皮PCNA表达明显减低(P＜0.05),而血清LH变化无显著差异(P＞0.05).结论:睾丸炎症时间质细胞、支持细胞功能改变,致使睾丸局部生精微环境发生变化,可能导致生精障碍.
关键词： 睾丸炎 脂多糖(LPS) PCNA 雄激素结合蛋白(ABP)
