首页 > 文献资料
-
不同分化程度大肠癌组织中MAGE-3的表达
目的研究黑色素瘤抗原3(MAGE 3)在不同分化程度大肠癌组织中的表达.方法应用免疫组化法对101例大肠癌组织石蜡标本进行MAGE-3抗原表达测定.分析MAGE-3基因产物的表达与大肠癌组织分化及临床分期的关系.结果 MAGE-3仅表达于肿瘤组织,阳性率为31.7%,正常组织无一例表达,且低分化大肠癌组织的阳性率及阳性强度均高于高分化大肠癌组织(P<0.05).MAGE-3在大肠癌组织中的表达与Duckes分期无关(P>0.05).结论 MAGE-3基因有可能作为大肠癌组织分化相关分子标志物,其抗原可能作为大肠癌患者免疫治疗的靶抗原.
-
MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体的构建与鉴定
背景:疫苗诱导的抗肿瘤CD8+T细胞反应被认为在增加机体对肿瘤抵抗力方面起重要作用.研究发现,抗原递呈细胞摄取热休克蛋白70与肿瘤相关抗原的融合蛋白,并在MHC Ⅰ类分子上处理提呈有此热休克蛋白为伴侣的肽后,会启动CD8+细胞毒性T淋巴细胞反应.目的:构建黑色素瘤抗原3(MAGE-3)、人热休克蛋白70(HSP70)融合基因的真核表达载体.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-06/12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成.材料:pcDNA3.1(-)Vector为BD公司产品,pINCY/MAGE-3,pOTB7/HSP70为Open Biosystems公司产品,DH5α由纳米生物技术重点实验室保存.方法:设计含Xho Ⅰ酶切位点MAGE-3引物及含Kpn Ⅰ酶切位点人热休克蛋白70引物,以pINCY/MAGE-3和pOTB7/HSP70为模板扩增黑色素瘤抗原3和人热休克蛋白70基因片段,以基因片段为模板,采用MAGE-3上游引物(含Xho Ⅰ酶切位点)及人热休克蛋白70下游引物(含Kpn Ⅰ酶切位点),PCR扩增MAGE-3-HSP70融合基因片段,Kpn Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切并连接至pcDNA3.1(-),转化感受态大肠杆菌DH5α,获得阳性克隆进行双酶切和测序鉴定.主要观察指标:真核表达载体pcDNA3.1(-)IMAGE-3+HSP70的鉴定.结果:测序结果显示黑色素瘤抗原3与Gene Bank上公布的序列完全一致,人热休克蛋白70有3处同义突变.结论:成功构建MAGE-3-HSP70融合基因真核表达载体.
-
MAGE-3基因真核表达载体构建及在小鼠黑色素瘤细胞中的表达
目的扩增人黑色素瘤抗原-3(Melanoma antigen 3,MAGE-3)基因,构建真核表达载体,并在小鼠黑色素细胞瘤B16中进行表达.方法采用PCR扩增MAGE-3基因,连接到真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞.G418筛选阳性克隆,荧光显微镜和RT-PCR分别检测阳性克隆中增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达和MAGE-3 mRNA的表达.结果从pUC19/MAGE-3重组质粒中扩增获得一条约950bp的片段,成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见融合蛋白表达产生明亮的绿色荧光,RT-PCR检测到MAGE-3 mRNA的表达.结论成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,获得了稳定表达该载体的小鼠黑色素瘤B16细胞系,为研究MAGE-3在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了基础.
