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miR-598靶向MSI2对非小细胞肺癌细胞迁移及侵袭的抑制作用
目的 探讨miR-598在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中的表达,研究其对NSCLC细胞迁移和侵袭的影响.方法 通过qRT-PCR技术检测miR-598在NSCLC组织及细胞系中的表达水平,通过划痕实验和Transwell实验检测A549细胞瞬时转染miR-598 mimics或miR-598 inhibitors后的迁移及侵袭能力.利用生物信息学技术预测miR-598与RNA结合蛋白MSI2可能的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因验证其靶向调控关系.将MSI2单独或与miR-598共转染A549细胞后,检测转染后细胞的迁移和侵袭能力.结果 NSCLC组织中miR-598的表达明显低于癌旁组织(P<0.001),且NSCLC细胞系(A549、H1650和H1299)中miR-598的表达明显低于正常肺上皮细胞系BEAS-2B(P<0.001).A549细胞转染miR-598 mimics后迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.01),而转染miR-598 inhibitors后迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05).MSI2是miR-598的直接靶基因,可以促进A549细胞的迁移和侵袭(P<0.05),但引入miR-598后MSI2促进细胞迁移和侵袭的作用被逆转(P<0.05).结论 miR-598可通过下调靶基因MSI2的表达而抑制NSCLC的迁移和侵袭.
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干细胞标志Musashi2基因RNAi腺病毒载体的构建及鉴定
目的:构建人干细胞标志分子Musashi2 (Msi2) RNAi腺病毒载体,并检测其在膀胱癌细胞株BIU87中的干扰效果及对细胞增殖的影响.方法:将2对干扰片段msi2-1和msi2-2及阴性对照scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭载体,经酶切鉴定及测序后,将测序正确的克隆经Pme Ⅰ酶切后与pAdeasy-1骨架质粒在BJ5183菌内重组,重组质粒经Pac Ⅰ酶切后转染入293A细胞,进行腺病毒的包装和扩增.Real-time PCR和Western blotting法分别检测腺病毒感染BIU87细胞后Msi2的mRNA和蛋白表达水平,MTT实验检测干扰Msi2对BIU87细胞增殖的影响.结果:成功将干扰片段和scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭载体,构建出pAdeasy-1-pSES-HUS-msi2和pAdeasy-1-pSES-H US-scramble重组腺病毒载体并包装扩增出腺病毒.与scramble组比较,msi2-1和msi2-2组的Msi2 mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P＜0.05).干扰Msi2后,BIU87细胞增殖能力下降(P＜0.05).结论:成功构建Msi2 RNAi腺病毒载体,其可有效抑制膀胱癌细胞株BIU87内Msi2的表达并抑制细胞增殖.
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Musashi2对白血病K562细胞体外侵袭能力的影响
目的 探讨Musashi2(Msi2)对白血病K562细胞体外侵袭能力的影响.方法 将靶向Msi2基因的si-RNA1、siRNA2及阴性对照序列转染K562细胞,同时设空白对照组(未转染的K562细胞).实时荧光定量PCR法及Western blot法分别检测K562细胞中Msi2基因mRNA转录及蛋白的表达水平;经细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力;细胞黏附试验检测K562细胞体外黏附能力;Transwell试验检测K562细胞体外迁移及侵袭能力.结果 与阴性对照组及空白对照组比较,Msi2-1及Msi2-2组K562细胞中的Msi2基因mRNA转录及蛋白的表达水平显著下降(P＜0.05),体外黏附、迁移、侵袭能力明显减弱(P＜0.05).结论 抑制Msi2的表达可显著抑制白血病K562细胞的体外侵袭能力,本实验为进一步研究Msi2在白血病发生发展中的调控机制奠定了基础.
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Musashi2在肺癌中的表达及其临床意义
目的探讨干细胞标志物Musashi2在肺癌中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR法检测Musashi2 mR-NA在112例肺癌纤支镜活检组织和18例良性肺病变纤支镜活检组织中表达的差异；随后利用免疫组化法验证Mu-sashi2蛋白在50例肺癌组织、32例良性病变肺组织和18例癌旁正常肺组织间表达的差异,并分析 Musashi2 mRNA和蛋白表达与肺癌临床病理参数的关系。结果RT-PCR法检测结果显示,Musashi2 mRNA在肺癌组织中的表达显著高于良性肺病变肺组织(P<0.05)。免疫组化法检测发现,Mu-sashi2蛋白在肺癌组织中的表达显著高于良性病变肺组织和癌旁正常肺组织(P<0.05),与mRNA表达相一致。肺癌组织中Musashi2 mRNA和蛋白的表达与患者年龄、性别、淋巴结转移、TNM分期和肿瘤分化程度均无关。 Musashi2 mR-NA在肺癌中的表达与组织病理类型相关,小细胞肺癌Mu-sashi2 mRNA的表达显著高于肺鳞癌( P <0.05)。结论 Musashi2 mRNA和蛋白在肺癌中高表达,可能参与了肺癌的发生发展。
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Musashi2及相关信号通路在恶性肿瘤发生发展中的作用及机制
在哺乳动物中,RNA结合蛋白Musashi(Msi)1和Msi2共同组成了Msi家族.其中,Msi2主要分布于神经、造血、胃肠、胰腺和上皮组织干细胞内,其在维持干细胞增殖和分化的平衡、调控干细胞的生长发育中起关键作用.该蛋白的表达改变会通过多种信号通路诱导恶性肿瘤的发生发展.Msi2的深入研究将为相关肿瘤提供预测标志及治疗靶点.
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纤维支气管镜活检组织 Musashi2基因的检测对肺癌的诊断价值
目的：探讨纤维支气管镜（纤支镜）活检组织标本中干细胞标志物Musashi2 mRNA的检测在肺癌中的诊断价值。方法采用RT-PCR技术检测112例肺癌患者和18例良性肺疾病患者纤支镜活检标本中Mu-sashi2 mRNA的表达水平，并分析其在肺癌诊断中的潜在价值。结果 Musashi2 mRNA在肺癌组织中的表达量显著高于非癌肺组织（ P＜0.05）。 ROC曲线下面积为0.759，临界值取0.596时，其敏感度和特异度分别为73.2％和77.8％。即使纤支镜活检组织病理检查未找到癌细胞，Musashi2 mRNA的诊断敏感度仍有69.2％。结论纤支镜活检组织标本Musashi2 mRNA可能是肺癌诊断的有效指标。
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肝细胞癌中Musashi2的表达及意义
目的 探讨Musashi2 (Msi2)在肝细胞癌(肝癌)组织中的表达情况,及其与肝癌患者临床病理因素之间的关系.方法 选取接受根治性手术切除的肝癌患者术后病理标本98例,正常无肝硬化肝组织20例,通过免疫组织化学(IHC)的方法检测Msi2在正常肝组织、肝癌组织及其匹配癌旁组织中的表达情况;分析Msi2的表达与肝癌患者临床病理因素的关系.结果 Msi2蛋白主要表达于细胞核,在细胞浆中无明显表达;正常肝组织中Msi2表达均阴性,肝癌组织中Msi2阳性表达率为59.2％ (58/98),显著高于癌旁肝组织的11.2％ (11/98) (P＜0.001);Msi2的高表达与肿瘤大小、脉管侵犯、BCLC分期、早期复发均有关(P ＜0.05);Msi2高表达的肝癌患者,其肿瘤侵袭性增强,复发风险增高.结论 Msi2在肝癌中高表达,可能发挥潜在癌基因功能,促进肿瘤的侵袭转移.
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人干细胞标志Musashi2在急性髓系白血病细胞分化中的表达变化
目的 探讨人干细胞标志Musashi2 (Msi2)在佛波酯(phorbol myristoyl acetate,PMA)诱导急性单核白血病细胞株THP-1分化过程中的表达变化.方法 PMA作用THP-1细胞0、6、12、24 b后,倒置显微镜下观察THP-1细胞形态学改变,计算分化细胞百分数；流式细胞仪检测THP-1细胞表面分化抗原CD11b的表达；定量PCR和Western blot检测Msi2的基因及蛋白表达水平；定量PCR检测Msi2下游信号分子Numb的mRNA水平；定量PCR和Western blot检测Numb下游分子Notch1的mRNA和蛋白表达水平.结果 PMA处理24h后可诱导THP-1细胞出现巨噬细胞样分化表型,实验组分化细胞的百分比显著高于未处理组(P＜0.05).同时24 h组CD11b表达量(59.30±8.70)较未处理组(0.32 ±0.08)显著增加(P＜0.05).实验组白血病细胞经PMA处理24 h后,Msi2的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.33 ±0.08)和(0.50±0.01),显著低于未处理组(P ＜0.05)；PMA处理12 h后Numb的mRNA相对表达量为(2.92±0.33),较未处理组明显升高(P＜0.05)；而PMA处理24 h后Notch1的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.31±0.03)和(0.23±0.01),较未处理组显著下降(P＜0.05).结论 干细胞标志Msi2表达随THP-1细胞分化而下降,Msi2-Numb-Notch1通路可能参与白血病细胞的分化调控.
