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海水浸泡对血管内皮功能基因的影响
目的 血管内皮细胞不仅是机体循环系统和组织间的重要屏障,而且具有重要的代谢和内分泌功能.本研究主要观察海水对血管内皮功能基因表达的影响.方法 12只Wistar大鼠随机均分为腹部开放伤合并海水浸泡组(实验组)和单纯腹部开放伤组(对照组),分别于海水浸泡或术后2h采集腹部开放伤大鼠小肠系膜血管组织,以实时定量FCR芯片法检测两组血管内皮通透与张力、血管生成、内皮激活与损伤等相关的84个功能基因的表达差异.差异表达大于2倍视为表达上调或下调.结果 与单纯腹部开放伤相比,腹部开放伤合并海水浸泡大鼠小肠系膜血管内皮77.38%(65/84)的功能基因表达水平发生了明显改变,分别有61.90%(52/84)和15.48%(13/84)的基因表达水平上调和下调.其中,趋化因子Cxc12表达水平升高了29.82倍,L-选择素表达水平下降了46.59倍.全部血管通透性与张力相关基因(12/12)和凝血激活相关基因(6/6)表达改变大于2倍.结论 海水浸泡广泛引起腹部开放伤大鼠血管内皮重要功能基因表达改变,内皮功能受损.
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OSW－1与线粒体DNA缺失对肝癌细胞PI3K信号通路的影响
目的：探讨 OSW－1与线粒体 DNA 缺失对肝癌细胞 PI3K 信号通路的影响。方法：以 SK －Hep －1细胞为对照组，建立线粒体 DNA 缺失的ρ0－SK －Hep －1细胞模型（试验组2），使用荧光实时定量 PCR 芯片比较两组细胞PI3K 信号通路的表达差异。OSW－1干预 SK －Hep －1（试验组1）及ρ0－SK －Hep －1（试验组3）细胞24 h 后，使用荧光实时定量 PCR 芯片比较两组细胞 PI3K 信号通路的表达差异。结果：SK －Hep －1细胞线粒体 DNA 缺失后细胞信号传导通路中基因：CASP9、CD14、FOXO1、GJA1、GRB2、HSPB1、IGF1、MAPK3、PDPK1、PRKCA、RPS6KA1、TLR4、TSC2表达上调；APC、CTNNB1表达下调。OSW－1作用于 SK －Hep －1细胞后细胞信号传导通路中基因：FOS、GRB2、HSPB1、IRAK1、PDPK1、PRKCA、PRKCB、TLR4、TOLLIP、TSC2表达上调；APC、IGF1、IRS1、PDGFRA、PTPN11、SHC1表达下调。OSW －作用ρ0－SK －Hep －1细胞后细胞信号传导通路中基因：AKT1、CDC42、CDKN1B、FASLB、IRAK1、IRS1、PDGFRA、PDK2、PIK3R2、PRKCB、SHC1、TIRAP、TOLLIP 等表达上调。BAD、EIF2AK2、FOXO1、IGF1、PABPC1、PAK1、PDK1、PDPK1、PIK3CG、RAC1、RASA1、RHOA、SOS1、TLR4、WASL 等表达下调。结论：OSW－1和线粒体 DNA 缺失均能影响 SK －Hep －1细胞 PI3K 信号传导通路基因的表达。OSW－1靶向作用于 SK －Hep －1细胞的线粒体，抑制其功能。OSW －1靶向抑制肝癌细胞 IGF －1－PI3K －AKT 信号传导通路；Grb2－p85－AKT 信号传导通路；IRS1－PI3K －AKT －GLUT －4信号传导通路；PI3K －AKT －TSC1／TSC2－mTOR 信号传导通路；TLR4－PI3K －AKT 细胞信号传导通路，从而抑制肝癌细胞生长、增殖、能量代谢。
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qPCR array检测高糖对胆固醇合成基因表达的影响
目的:高血糖易引起胆固醇在体内积聚,增加糖尿病合并动脉粥样硬化性心血管疾病的患病风险.本文通过建立稳定的实时定量PCR芯片(Real-time quantitative polymerasechain reaction array,qPCR array)检测方案,研究高糖对小鼠肝癌细胞Hepa1-6胆固醇合成基因表达的影响,探讨胆固醇合成基因在糖尿病大血管并发症发展中的作用机制.方法:以不同浓度葡萄糖(5、15、30mmo/L)和不同时间(0、6、12、18、24h),刺激肝癌细胞Hepa1-6,利用qPCR array检测其胆固醇合成基因的表达差异.结果:与5mmol/L相比,高糖组(15、30 mmo/L)处理细胞18h后,胆固醇合成基因CYP51、EBP、NSDHL、SQLE、FDFT1和PMVK的表达上调(P＜0.05),呈现剂量依赖性.与0h相比,15 mmol/L高糖处理细胞12h,CYP51、EBP和SQLEmRNA表达量上调(P＜0.01).至24 h,CYP51、EBP降至0h水平,而SQLE的表达量继续增加;NSDHL在12h表达无差异,至18h表达量发生上调(P＜0.05).结论:该qPCR array检测方案能特异性检测胆固醇合成基因的表达量.高糖能够促进胆固醇合成基因的表达,使细胞内胆固醇积聚,这可能是糖尿病患者容易发生动脉粥样硬化的原因.这提示我们将胆固醇合成基因作为药物靶点可能延缓糖尿病动脉粥样硬化进展.
