首页 > 文献资料
-
脂质体包裹CpG ODN和肿瘤抗原治疗肝癌的免疫效应
目的 探索脂质体、CpG寡核苷酸(ODN)以及Hepa 1-6肝癌细胞裂解物联合应用治疗肝癌的免疫效果.方法 建立C57BL/6小鼠肝癌模型,以PBS、ODN+Hep(肝癌细胞Hep) 、Lip(Lipofectamine脂质体)+HDN+Hep荷瘤鼠背部皮下注射,各组小鼠肝脏HE染色,FCM检测小鼠脾脏CD3-FITC、CD4-FITC、CD8-FITC、NK1.1-FITC的组成,ELISA法测免疫小鼠血清中IFN-γ、IL-4水平.结果 脂质体包裹CpG ODN+Hepa 1-6肝癌细胞裂解物中CD3-FITC、CD4-FITC 、CD8-FITC、NK1.1-FITC的体外杀伤活性以及荷瘤小鼠血清中IFN-γ、IL-4水平均显著高于CpG ODN+Hep组以及PBS组.结论 脂质体包裹CpG ODN+Hep能显著提高机体的免疫功能,尤其是特异性细胞免疫功能.
-
SFRP5对小鼠肝癌细胞系Hepa1-6糖代谢的影响
目的 探讨SFRP5过表达和表达抑制对小鼠肝癌细胞Hepa1-6糖代谢相关基因的影响.方法 分别用空载病毒(Ad-GFP)、SFRP5过表达(Ad-SFRP5)及抑制病毒(Ad-shSFRP5)感染小鼠肝癌细胞Hepa1-6,通过real-time PCR和Western blot测定细胞中病毒感染效率;用葡萄糖氧化酶(GOD)法测定细胞的葡萄糖摄取率(GUR);采用real-time PCR和Western blot检测肝糖异生指标(PEPCK和G6Pase),经典胰岛素信号通路分子(InsR和AKT)的磷酸化水平.结果 在小鼠肝癌细胞Hepa1-6中,与Ad-GFP组相比,Ad-SFRP5病毒可明显上调SFRP5基因的表达,而Ad-shSFRP5则相反.与Ad-GFP组相比,SFRP5基因上调可提高葡萄糖摄取率,降低PEPCK和G6Pase mRNA(P<0.01)和蛋白水平(P<0.05),增强胰岛素信号通路分子InsR(P<0.01)和AKT(P<0.05)的磷酸化水平,而抑制SFRP5则作用相反.结论 SFRP5基因在Hepa1-6细胞中过表达,可改善糖代谢紊乱,降低肝细胞糖异生,增强胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗.
-
Hepa1-6细胞的培养及小鼠皮下移植瘤模型的建立
A组(P<0.01),而C组和B组之间无明显差异.结论 使用Hepa1-6细胞以4×104/鼠的细胞用量在SPF.级雌性C57BL/6j小鼠前肢部皮下成功建立了肝癌移植瘤,完成了小鼠肝癌动物模型的建立.
-
qPCR array检测高糖对胆固醇合成基因表达的影响
目的:高血糖易引起胆固醇在体内积聚,增加糖尿病合并动脉粥样硬化性心血管疾病的患病风险.本文通过建立稳定的实时定量PCR芯片(Real-time quantitative polymerasechain reaction array,qPCR array)检测方案,研究高糖对小鼠肝癌细胞Hepa1-6胆固醇合成基因表达的影响,探讨胆固醇合成基因在糖尿病大血管并发症发展中的作用机制.方法:以不同浓度葡萄糖(5、15、30mmo/L)和不同时间(0、6、12、18、24h),刺激肝癌细胞Hepa1-6,利用qPCR array检测其胆固醇合成基因的表达差异.结果:与5mmol/L相比,高糖组(15、30 mmo/L)处理细胞18h后,胆固醇合成基因CYP51、EBP、NSDHL、SQLE、FDFT1和PMVK的表达上调(P＜0.05),呈现剂量依赖性.与0h相比,15 mmol/L高糖处理细胞12h,CYP51、EBP和SQLEmRNA表达量上调(P＜0.01).至24 h,CYP51、EBP降至0h水平,而SQLE的表达量继续增加;NSDHL在12h表达无差异,至18h表达量发生上调(P＜0.05).结论:该qPCR array检测方案能特异性检测胆固醇合成基因的表达量.高糖能够促进胆固醇合成基因的表达,使细胞内胆固醇积聚,这可能是糖尿病患者容易发生动脉粥样硬化的原因.这提示我们将胆固醇合成基因作为药物靶点可能延缓糖尿病动脉粥样硬化进展.
-
鼠IL-35真核表达载体的构建及在Hepa1-6细胞中的表达
目的 构建小鼠IL-35的真核表达载体并使其在小鼠肝癌细胞株Hepa1-6中表达.方法 采用PCR方法从含有小鼠IL-35基因的pET-30a-mIL-35中扩增目的 基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-HisB中,经菌落PCR、双酶切鉴定及测序正确后,用脂质体转染方法转染到Hepa1-6细胞中,48h后收集细胞,SDS-PAGE和Western Blotting检测目的 蛋白的表达.结果 经双酶切和测序鉴定证实重组表达载体构建成功,转染入Hepa1-6细胞经SDS-PAGE电泳和Western Blotting证明均得到与预期相对分子量大小相符的蛋白条带.结论 成功构建小鼠IL-35真核表达载体并在Hepa1-6细胞中表达,为进一步研究mIL-35的生物学功能提供了条件.
-
Hepa1-6肝癌细胞经丝裂霉素处理后对survivin表达的影响
目的 探讨经丝裂霉素(MMC)处理后Hepa1-6肝癌细胞survivin表达的变化.方法 体外培养Hepa1-6经1.0、3.0和9.0μg/ml浓度的MMC处理后1和3 d,MTT法测定Hepa1-6生长抑制率,RT-PCR法检测survivin mRNA和Western blot法检测survivin蛋白的表达.结果 9.0μg/ml浓度的MMC对Hepa1-6的抑制率明显高于1.0和3.0μg/ml浓度组,1.0和3.0μg/ml的MMC作用3 d后对Hepa1-6生长无抑制.各浓度MMC处理第1天的Hepa1-6表达survivin mRNA以及survivin均降低,1.0和3μg/ml的MMC处理第3天,Hepa1-6表达survivin mRNA以及survivin升高,9μg/ml组survivin mRNA以及survivin表达于第3天仍低.结论 低浓度MMC能诱导Hepa1-6细胞内survivin表达增加.可能是Hepa1-6对化疗药物产生耐药性的因素之一.
