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鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对神经痛大鼠脊髓CGRP和P物质表达的影响
目的 通过研究鞘内注射新型N型钙通道阻滞剂ω-芋螺毒素SO3对坐骨神经慢性挤压伤(CCI)模型大鼠脊髓降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)含量的影响,探讨N型钙通道在伤害性信息传递中的作用.方法 雄性SD大鼠72只,随机均分为9组,其中3组为假手术和单纯制作CCI模型后3、14天组,3组为单次鞘内注射生理盐水和不同剂量SO3组,另3组为持续鞘内注射生理盐水和不同剂量SO3共7天组.用免疫组织化学染色法检测各组动物脊髓标本中免疫反应阳性物质CGRP-LI、SP-LI的阳性面积比例、目标光密度和积分光密度.结果 大鼠CCI后脊髓背角CGRP-LI、SP-LI阳性面积比例、目标光密度和积分光密度均显著升高,单次或持续鞘内注射生理盐水对其无明显影响,单次或持续鞘内注射SO3均可剂量依赖性地抑制其上升.结论 神经损伤后脊髓CGRP、SP释放增多,鞘内注射SO3可以减轻此反应,提示N型钙通道阻滞剂可在脊髓水平部分阻断伤害性信息传递.
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鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对CCI大鼠脊髓及坐骨神经iNOS蛋白表达的影响
目的 通过检测鞘内注射ω-芋螺毒素SO3对坐骨神经慢性挤压伤(CCI)模型大鼠脊髓及坐骨神经诱生型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响,探讨慢性神经痛发展过程中Ca2+对iNOS的作用.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为4组(n=10):N组为正常对照组,C组为CCI后14天组,CN组为CCI 7天后连续鞘内注射生理盐水7天组,CS组为CCI 7天后连续鞘内注射ω-芋螺毒素SO3(30ng/h)7天组.用Western blot方法检验各组动物脊髓及坐骨神经结扎部位中段和远端iNOS蛋白表达量的变化.以GAPDH表达量作为内参照.结果 正常大鼠脊髓及坐骨神经标本未见iNOS表达,CCI大鼠结扎侧坐骨神经及同侧脊髓均有较强的iNOS表达,持续鞘内注射ω-芋螺毒素SO3后此种表达减弱.结论 CCI大鼠脊髓和受损坐骨神经iNOS表达增加,鞘内注射ω-芋螺毒素SO3可降低CCI大鼠上述部位iNOS表达.在慢性神经痛的发展过程中,Ca2+通道阻滞剂对iNOS的表达有一定作用.
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新的M家族芋螺毒素的克隆及进化分析
目的 从中国南海芋螺中寻找新的M家族芋螺毒素.方法 应用3'RACE及巢式PCR进行基因克隆,将得到的目的 基因连接入pGM-T载体、转化并测序,用进化分析软件对得到的新序列进行进化分析.结果 从6种芋螺毒腺管中获得8个新的M家族芋螺毒素前体肽序列,其成熟肽含有15～21个氨基酸残基.结论 这些新的M族毒素与已报道的M家族毒素序列同源性较低,是Mini-M家族的新成员.
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中国南海新型α-芋螺毒素Im1.6的克隆及合成
目的 从中国南海堂皇芋螺(Conus imperialis)中克隆出新的芋螺毒素序列并用化学方法合成该毒素.方法 根据A超家族保守的信号肽序列设计引物,采用cDNA的3′端快速扩增方法(3′RACE),从芋螺毒腺管中克隆出新的毒素基因.固相法合成线性多肽,折叠形成目标产物,用两步氧化折叠法测定多肽的二硫键连接方式.结果 发现一种新的α-芋螺毒素cDNA序列Im1.6,其编码的成熟肽序列为GCCDIPDCYNKNREQC-NH2,二硫键连接方式为"C1-C3,C2-C4".结论 Im1.6是一种新的α4/7型芋螺毒素,其氨基酸序列与报道的α-芋螺毒素显著不同.
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芋螺毒素GI抗血清制备及中和活性研究
目的 测定芋螺毒素GI与牛血清白蛋白(BSA)偶联物免疫小鼠后产生的抗血清是否具有中和GI毒素作用.方法 戊二醛法制备GI-BSA偶联物,免疫小鼠,制备GI小鼠抗血清,应用抗血清的抗体中和实验,验证其对GI的解毒作用.结果 SDS-PAGE蛋白电泳结果显示,GI与BSA成功偶联,GI-BSA在>标志物相对分子质量(120×103)处有两条新蛋白带;GI-BSA(99 μg/只)每隔2周免疫1次,共免疫4次,第4次免疫后第10天抗血清中和滴度效价>1:64 000;混合100及200 μl 小鼠抗血清与≥1 LD50剂量GI,腹腔注射,100 μl 血清可使1×LD50毒素(16.3 μg/kg)组小鼠75%存活,200 μl血清可使25.8 μg/kg毒素组小鼠75%存活.结论 基于GI-BSA半抗原免疫的小鼠抗血清对GI毒素具有明显的解毒作用.
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芋螺睡眠肽结构和功能研究进展
芋螺睡眠肽是一类与众不同的芋螺毒素,一级结构有高度同源性,它含有丰富的γ-羧基谷氨酸,和其他类芋螺毒素不同的是一般不含二硫键(除了芋螺睡眠肽-R),在结合金属离子后,构像中α-螺旋结构的成分会有不同程度地增加.芋螺睡眠肽是一类非竞争性的N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的选择性抑制剂,并且具有受体亚型特异性,颅内注射芋螺睡眠肽后,实验鼠会呈现一种睡眠样症状.序列及结构分析显示,正是芋螺睡眠肽序列中高度保守的氨基酸残基决定了它们的结构及功能,文中对其结构和功能的关系作了综合分析.
