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免疫荧光法快速检验伯氏柯克斯体的研究
伯氏柯克斯体(Coxiella burnetii)习惯上称为Q热立克次体,它所引起的Q热是一种人兽共患病.Q热临床表现多以发热、头痛、肌肉酸痛为主, 与其他热性疾病难以鉴别,极易造成误诊.因此,快速检验并鉴定Q热立克次体,是防治Q热的重要环节.通常,实验室对送检的可疑标本做吉姆萨染色,但该法是非特异性的染色方法,难以即时作出判断.为此,本实验室建立了免疫荧光直接检测病原体的方法,并尝试用微波促抗原抗体反应进行快速染色的方法,可以在15 min之内得出初步诊断报告.本方法为研制鉴定Q热立克次体的标准化免疫诊断试剂盒奠定了基础.
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快速免疫比浊法检测尿微量白蛋白肌酐比值及其临床意义
目的:探讨快速免疫比浊法检测尿微量白蛋白肌酐比值对糖尿病肾病(DN)早期诊断的价值.方法:选用免疫比浊法测定尿微量白蛋白(mAlb/Cr)比值,其中30例DM患者同时用放射免疫法测定mAlb,碱性苦味酸法测定尿Cr作方法对照.结果:102例DM患者mAlb/Cr值高于对照组(P＜0.01),30例DM患者用放射免疫法和快速免疫比浊法测定的mAlb,mAlb/Cr结果一致,r=0.9710.结论:快速免疫比浊法检测尿微量白蛋白肌酐比值可作为DN早期诊断的指标,与放免法比较有较好的相关性,并且操作简单、快速.
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PCR与快速免疫法用于沙眼衣原体检测的比较
目的探讨多聚酶链式反应(PCR)在检测泌尿生殖道沙眼衣原体(CT)的应用价值.方法 103例病人分为症状组(73例)和无症状组(30例)应用PCR和快速免疫法对其进行CT检测.结果症状组2种检测结果差异无显著性(P＞0.05),而无症状组PCR法阳性率显著高于快速免疫法(P＜0.05).结论 PCR可用于无症状患者的沙眼衣原体检测.
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348例女性阴道分泌物异常的病原体分析
为了了解我市女性阴道分泌物异常的病原体感染情况,我们对近期来我院妇科、皮肤性病科门诊就诊的女性进行病原体检测,结果报告如下.1 材料和方法1.1 一般资料:随机选择就诊女性病人348例,其中已婚301例,未婚47例.其中年龄20～30岁279例,31～40岁45例,40岁以上24例.1.2 材料:淋球菌选择培养基:WHO推荐用淋球菌培养基,Thayer-Martin(T-M)培养基(英国OXOIN公司生产).支原体培养基:由广东江门市众诚公司提供."立明"衣原体快速免疫法(Clearview Chlamyd,简称C-C快速法),试剂由UNIPATH公司提供.1.3 取材和方法:1.3.1 淋球菌检查:取宫颈分泌物行直接涂片,革兰氏染色,镜检和分离培养.
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应用VIDAS-酶联免疫荧光法(CHL)检测泌尿生殖道沙眼衣原体
目的:用VIDAS-酶联免疫荧光法(CHL)法检测男性尿道及女性宫颈管标本的沙眼衣原体.方法:用细胞培养、VIDAS-CHL法、"立明"衣原体快速免疫法(C-C法)平行检测539例有症状和277例无症状患者的拭子标本.结果:与扩大金标准比较,VIDAS-CHL法检测有症状患者拭子标本的敏感性为90.70%,特异性为96.65%;C-C法的敏感性为74.17%,特异性为98.45%;两者差异有显著性(χ2=7.07,P＜0.05);VIDAS-CHL法检测无症状患者拭子标本的敏感性为92.00%,特异性为98.81%;C-C法的敏感性为76.00%,特异性为98.41%;两者差异无显著性(χ2=0.581,P＞0.05);结论:VIDAS-CHL法具有高度敏感性和特异性,可用来检测男性尿道和女性宫颈管中沙眼衣原体.
关键词： 沙眼衣原体 VIDAS-CHL法 快速免疫法 细胞培养 -
1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法
目的 建立1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法.方法 用RT-PCR方法获得bax保守N端1～123位氨基酸基因片段,并将其插入pET42a原核表达载体,诱导表达的Bax融合蛋白组合应用GST、His亲和层析技术获得免疫原(pET42a/Bax融合蛋白),HPLC鉴定纯度达95%.利用改良快速免疫法获得人Bax兔多克隆抗体,并经蛋白A柱亲和层析技术,抗原亲和纯化技术获得高效价高特异性的抗体.间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化试验检测抗体特异性,并与商业化抗体进行对比.结果 通过快速免疫法得到人Bax兔多克隆抗体,经过Protein A柱纯化,再经抗原亲和纯化后,间接ELISA证明,抗体效价均达1∶51 200;Western blot显示,只有经过抗原亲和纯化后的抗体特异性高,无其他杂带;免疫组化证明,在原发性肝癌组织中,人Bax兔多克隆抗体能特异地和内源性Bax结合,其高效高特异性已达国外Santa Cruse公司 Bax商业化抗体水平.结论 快速免疫法与抗原亲和纯化相结合,获得人Bax高效单特异性兔多克隆抗体,建立了1种改良的高效单特异性兔多克隆抗体的制备方法.
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一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白多克隆抗体制备
目的 获得一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白(IRF-4-binding protein,IBP)的高效价特异性多克隆抗体.方法 通过生物信息学分析选择IBP特异片段(1228～1893 bp),目的 片段cDNA插入pET32a和pGEX-KG原核表达载体,分别转化B1221感受态细菌,IPTG诱导表达后组合应用阴离子交换层析、His、GST亲和层析技术获得免疫原(pET32a/IBP融合蛋白)及检测原(pGEX-KG/IBP融合蛋白).HPLC鉴定纯度.利用改良快速免疫法获得兔抗IBP多克隆抗血清,井经蛋白A柱纯化,非特异性扰体吸收.间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化实验检测抗体特异性.结果 表达并纯化的pET32a/IBP融合蛋白纯度达92%,pGEX-KG/IBP融合蛋门纯度达87%.IBP多克隆抗体滴度达1:51 200,能特异地和内源性IBP结合.结论 成功表达并纯化了 IBP融合蛋白,制备了高滴度、高特异性的抗IBP多克隆抗体.
