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ELISA法检测丙肝抗体原理及影响因素分析
丙型肝炎病毒是小的有包膜的单正股RNA 病毒,主要经输血和其他非肠道途径传播(如共用针头,血透析)等.HCV 的亚临床感染,临床上无自觉症状,而ALT不正常,是丙型肝炎的主要传染源.HCV 感染的主要特点就是慢性化的几率很高,感染过程很长.我国丙型肝炎感染率仅次于乙型肝炎.患急性丙型肝炎后约有55%～85%的患者可变成慢性丙型肝炎,其中5%～20%的患者20～25 年后可发展为肝硬化,肝硬化患者10年内30%发展为终末期肝病.丙型肝炎自然转阴率低,治疗效果差,病程迁延,且与肝硬化、肝癌等的发生及发展显著相关.丙型肝炎目前尚无有效疫苗,也没有有效的冶愈方法,因此控制丙型肝炎只能从传染源和传播途径入手,早期准确诊断.本院采用ELISA 法测HCV,酶联免疫吸附试验(ELISA)是免疫学检验的主要技术手段,ELISA 技术是利用酶的高效催化和放大作用与特异性抗原-抗体反应相结合而建立的一种标记免疫技术,具有高度的特异性和敏感性.因其操作简单、特异性强、成本低等特点,被广泛使用于手工操作.
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利用THP-1细胞进行致敏物鉴定的方法验证
目的 探讨建立以THP-1源性巨噬细胞为受试细胞,以细胞上清液中细胞因子表达改变为检测指标的体外检测化学物致敏性的试验方法.方法 将人单核细胞株THP-1细胞用佛波酯(PMA,0.1μg/ml)诱导,使之转化为具有贴壁能力的THP-1巨噬细胞.选择5种已知的化学致敏物硫酸镍(NiSO4)、2,4-二硝基氯代苯(DNCB)、苯二胺(PPDA)、重铬酸钾(K2Cr2O7)、异氰酸酯(TDI)和2种非化学致敏物十二烷基磺酸钠(SDS)、异丙醇(IPA)为受试物,检测不同浓度受试物处理细胞的不同时间点时细胞因子表达的变化.分别用ELISA法检测细胞培养上清IL-6、TNF-α的水平,用流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测IL-1β、IL-8细胞因子的表达水平.结果 NiSO4、DNCB和K2Cr2O7作用6h,PPDA、TDI作用12h时,THP-1细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-8四种细胞因子的表达量高.5种化学致敏物NiSO4、DNCB、K2Cr2O7、PPDA和TDI在适时间点适浓度刺激细胞分泌IL-6的水平分别为对照组的40、25、20、50和50倍,TNF-α水平为对照组的20、12、20、8和5倍,IL-1β水平为对照组的30、60、25、30和45倍,IL-8水平为对照组的15、12、15、12和7倍;非致敏物SDS与IPA处理组IL-6水平均有升高,其中SDS组升高明显,约为空白对照组的20倍.TNF-α、IL-1 β和IL-8表达水平无明显变化.结论 利用THP-1巨噬细胞检测细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-8表达水平的试验方法可以有效区分化学致敏物与非致敏物,因此这3个指标可作为鉴别化学致敏物和非致敏物的有效参考指标.
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5031例精神病患者乙型肝炎血清学标志物检测结果分析
对我院精神病患者乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物检测结果进行分析,估计其传染性程度,为精神病患者乙肝预防、诊断和治疗提供实验室依据.用ELISA方法检测我院三年来门诊及住院精神病患者乙肝五项指标,并对所有数据进行统计与分析.结果显示,5031例血清标本中检出HBV血清学标志物3023例,总感染率60.1%.血清学标志物模式可分为感染期模式组和恢复期模式组,两组共20种模式.结论:乙肝五项指标检测结果显示,精神疾病患者较同类人群血清总感染率偏高,HBV血清学标志物模式也较为复杂,除HBsAg阳性、抗-HBs阴性、 HBeAg阳性、抗-HBe阴性、抗-HBc阳性组具有传染性外,其他模式也存在一定的传染性.建议对住院精神疾病患者注射乙肝疫苗,以减少乙肝的传染率.
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病毒性脑炎脑脊液病毒特异性抗体ELISA检测结果分析
目的 探讨儿童病毒性脑炎脑脊液病毒病原学特点及临床特征. 方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对121例临床诊断为病毒性脑炎患儿的脑脊液进行肠道病毒(EV)、单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ型和Ⅱ型、EB病毒(EBV)、腺病毒(ADV)及流感病毒(FLuV)特异性IgM抗体检测. 结果 脑脊液病毒特异性IgM抗体检测阳性75例,阳性率61.98％.肠道病毒阳性35例,居第1位,其次是单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型,共17例.肠道病毒感染多见于婴幼儿(6个月～3岁),单纯疱疹病毒感染多见于学龄儿童;肠道病毒感染多见于夏秋季,单纯疱疹病毒感染多见于冬春季,EB病毒、腺病毒及流感病毒各季节散发. 结论 肠道病毒是本地区儿童病毒性脑炎感染的主要病原;脑脊液病毒特异性IgM抗体检测可作为早期病原诊断的指标之一.
关键词： 病毒性脑炎 酶联免疫吸附法(ELISA) 病毒病原学 -
丙肝抗体假阳性检测中ELISA法应用
目的 探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测丙肝抗体(HCV-Ab)过程中存在假阳性的原因及解决方法.方法 回 顾性统计分析了 36 例用 ELISA 方法检测的 HCV-Ab 弱阳性血清标本,再采用聚合酶链反应(PCR)方法定量检测 HCV-RNA 进行确证试验,确定 ELISA 方法的假阳性率,并分析影响 ELISA 方法出现假阳性的因素及其解决方法.结 果 ELISA 方法检测的 HCV-Ab 弱阳性血清标本用 PCR 法检测 HCV-RNA 复检后 28 例仍为阳性,8 例阴性,表明以 PCR 检测 HCV-RNA 方法为准,ELISA 法有 77.8%的真阳性率,有 22.2%的假阳性率.影响因素除了方法学、试剂盒本 身之外,还有标本处理、操作不当等多种因素.结论 多种因素可能会导致 ELISA 法检测丙肝抗体出现假阳性,除了 严格操作、做好质控外,对可疑假阳性的标本一定要认真复测,好采用 PCR 检测 HCV-RNA 进行确证.
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溃疡性结肠炎患者血浆白介素-13检测和临床价值
目的探讨溃疡性结肠炎(UC)患者血浆白介素-13(IL-13)临床价值.方法采用ELISA法检测UC患者和正常健康人血浆IL-13浓度.结果 31例UC患者(16.65±3.38) pg/ml和30例健康人(25.83±3.59) pg/ml血浆IL-13浓度比较,差异有显著性(P<0.05).活动期(21例)和静止期(10例)UC患者血浆IL-13浓度分别为(12.03±3.72) pg/ml和(18.67±4.22) pg/ml,两者比较差异有显著性(P<0.05).轻、中、重度活动期UC血浆IL-13浓度相互比较,差异有显著性(P<0.05). UC患者血浆IL-13和血清C-反应蛋白浓度呈负相关(r=-0.598,P<0.01).结论 IL-13参与UC的炎症过程,检测血浆IL-13可作为判断UC患者病变严重程度和复发的指标之一.
关键词： 白介素-13 溃疡性结肠炎 酶联免疫吸附法(ELISA) -
儿童病毒性脑炎、脑膜炎92例临床及病毒病原学分析
目的:探讨儿童病毒性脑炎、脑膜炎脑脊液病毒病原学特点及临床表现差异.方法:应用酶联免疫吸附(ELISA)方法对92例临床诊断为病毒性脑炎、脑膜炎患儿的脑脊液进行肠道病毒(EV)、单纯疱疹病毒(HSV)I型和II型、EB病毒(EBV)、腺病毒(ADV)及流感病毒(FLuV)特异性IgM抗体检测.结果:脑脊液特异性IgM抗体检测阳性者56例,阳性率为60.8%(56/92).其中,第一位病原是肠道病毒27例,其次是单纯疱疹病毒I型和II型共14例,单纯疱疹病毒感染致残率及病死率较高.结论:(1)肠道病毒是本地区儿童中枢神经系统病毒感染的主要病原,单纯疱疹病毒感染致残率及病死率较其它病毒高.早期应用阿昔洛韦治疗可明显改善愈后.(2)脑脊液中病毒特异性的IgM抗体检测可作为早期病原诊断的指标之一.
关键词： 病毒性脑炎 脑膜炎 临床表现 酶联免疫吸附法(ELISA) 病毒病原学 -
两种方法检测抗-HIV在临床检测中的应用比较
目的:为临床实验室检测HIV抗体选择合适的方法提供参考依据.方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金法分别初筛检测550份来源于自愿咨询者、术前检查、产前检查、其他医院送检血清、公安机关羁押人群、娱乐场所性服务者等高危人群的血清.结果:阳性者送清远市疾病预防控制中心确诊并对两种初筛检测结果进行对比分析,总结其临床应用价值.结论:酶联免疫吸附法试剂假阳性率为0.36％,胶体金法试剂假阳性率为2.0％.假阳性率相比,差异有统计学意义(P＜0.05).酶联免疫吸附法试剂的特异性大大高于胶体金法试剂.适合有条件的实验室或采供血机构批量检测.胶体金法检测时间较短,实验步骤较少,不需特殊仪器设备,可单份检测适合于边远地区,基层医院、标本量少及临床紧急需要时使用.
关键词： 酶联免疫吸附法(ELISA) 胶体金法 比较 -
水体中苯并芘检测试剂盒研制及效果评价
目的 研制间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)检测苯并芘试剂盒.方法 采用棋盘滴定法确定抗原抗体的佳用量;采用间接ELISA分析法确定苯并芘检测的适条件,包括pH值、盐离子浓度及甲醇浓度.结果 抗原佳包被浓度为10 μg/mL,单克隆抗体稀释倍数为1:5 000;在优pH值为7.4、盐离子浓度为0.01 mol/L及甲醇浓度为10％的条件下,检测方法在5～ 50 ng/mL范围内线性相关,线性方程为y=-28.105 Ln(x)+123.66,R2 =0.9937,IC5.为13.74 ng/mL,苯并芘的低检出限为3.3 ng/mL;在水样中的加标回收率为94.8％～112.3％;变异系数为4.38％ ～9.72％.结论 该方法适用于水体中苯并芘的检测,可用于大批量样品的快速筛查.
关键词： 苯并芘 酶联免疫吸附法(ELISA) 抗原 抗体 -
糖原磷酸化酶同工酶BB测定方法的建立及其在急性冠脉综合征诊治中的价值
[目的]分离纯化糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB), 建立血清GPBB定量测定方法,探讨其在急性冠脉综合征早期诊断及治疗中的价值.[方法] 应用纯化GPBB抗原及其抗体建立GPBB定量测定方法.对34例健康人、28例不稳定心绞痛(UAP)患者和29例急性心肌梗死(AMI)患者分别进行血清GPBB、CK、CK-MB及cTnI测定.[结果] GPBB被纯化100倍,比活性384 μmol/mg*min-1,回收率28%.建立了GPBB定量测定方法,确定抗原检测线性范围为0.3～20 ng.在AMI发作6 h内,患者血清中(n=26)GPBB浓度超过正常上限值7.4 μg/L.GPBB诊断灵敏度是89.7%,明显高于CK、CK-MB(24.1%,20.8%,P<0.01),与cTnI相当.AMI患者血清GPBB峰值水平(66.38±27.41μg/L)明显高于健康人(2.57±1.61) μg/L,P<0.01.28例UAP患者中21例血清GPBB升高≥7.4 μg/L,其均值是(23.2±14.2) μg/L,明显高于健康人和稳定心绞痛患者血清GPBB水平(P< 0.01),与cTnI诊断阳性率相似,而UAP患者血清中CK、CK-MB均无明显升高.其中GPBB升高组 (≥7.4 μg/L)4周内发生心性事件远高于GPBB<7.4 μg/L组(47.6%,14.3%,P<0.01).AMI患者血清GPBB到达峰值时间早于CK和CKMB达到峰值时间.[结论]GPBB是AMI发作后6 h内敏感特异的生化指标,对判断UAP预后有一定的临床价值.
关键词： 糖原磷酸化酶 酶联免疫吸附法(ELISA) 急性冠脉综合征 早期诊断 -
斑点金免疫渗滤法在检测囊虫抗体中的应用
目的将斑点金免疫渗滤法用于检测囊虫抗体,以制备囊虫病诊断试剂盒.方法经透析的猪囊尾蚴囊液作为检验抗原,对71份囊虫病患者、90份正常人和20份其他病患者血清进行了斑点金免疫渗滤法检测并与酶联免疫吸附法比较.结果斑点金免疫渗滤法的敏感性为90.1%(64/71),特异性为95 6%(86/90),其他病患者血清反应中仅1例脑肿瘤患者血清阳性,其余为阴性.斑点金免疫渗滤法和酶联免疫吸附法的符合率为94.4%(152/161).结论斑点金免疫渗滤法有较好的应用于临床检测囊虫病的潜力.
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鼻用鲑降钙素粉雾剂与喷鼻剂的生物等效性试验
目的 研究鼻用鲑降钙素粉雾剂和喷鼻剂在健康受试者中的药动学及人体生物等效性.方法 以鲑鱼降钙素喷鼻剂为参比制剂,在22例男性健康受试者进行鼻用鲑降钙素粉雾剂生物等效性试验.采用双周期自身交叉设计,清洗期为6d,单次鼻腔给药,剂量为200IU.应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清鲑降钙素的浓度.结果 22例受试者单剂量使用200 IU受试剂及参比制剂后的平均Cmax分别为:(119.80±36.05)和(119.20±40.32) pg/ml;Tmax为:(8.40±2.80)和(8.90±2.60) min;T1/2为:(31.88±13.58)和(32.49 ± 11.71)min;AUC0→t为:(2 204.0±585.30)和(2 392.0 ±836.0) pg/(ml·min).自制鼻用鲑降钙素粉雾剂的平均相对生物利用度为:(97.72 ％ ± 29.51％).结论 鼻用鲑降钙素粉雾剂和鲑降钙素喷鼻剂具有生物等效性.
关键词： 鲑降钙素 粉雾剂 喷鼻剂 酶联免疫吸附法(ELISA) 生物等效 -
对杭州地区成人与老干部乙肝标志物检测结果的调查分析
目的:调查杭州地区成人与离退休老干部乙肝病毒标志物(HBVM)检测结果的比较分析.方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定2084名成人与1147名老干部的乙肝病毒标志物,并且,比较两组之间是否存在着显著性差异.结果:两组人群之间经x2检验HbsAg、抗-Hbe存在非常显著性差异(P＜(0.01),抗-HBs、HbeAg、抗-HBc不存在显著性差异(P＞0.05).结论:成人组的HBV感染率明显高于老干部组.
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淮南地区孕妇弓形虫感染血清学分析
目的探索淮南地区孕妇弓形虫感染情况.方法运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测228例孕妇(妊娠八周至七个月)静脉血中弓形虫(Toxoplasma godii,TO)抗体,即Tox-IgG抗体和Tox-IgM抗体.结果发现有猫犬接触史(指现在或曾经养过猫犬的)孕妇弓形虫感染率明显高于无猫犬接触史孕妇(P＜0.01),两者有显著性差异;但城市与乡镇、适龄(≤35岁)与高龄＞35岁)孕妇弓形虫感染率无显著性差异(P＞0.05);而首次妊娠孕妇与非首次妊娠孕妇弓形虫感染率有显著性差异(P＜0.05).结论有无猫犬接触史是孕妇感染弓形虫的主要因素,二者相关性显著.
关键词： 弓形虫 酶联免疫吸附法(ELISA) 孕妇 -
非小细胞肺癌患者血清bFGF和MMP-9检测的临床意义
目的 研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在非小细胞肺癌患者和健康者的血清样本中的含量及其与肿瘤分化程度、临床分期、远处转移等病理特征的相关性.方法 通过酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测非小细胞肺癌患者和正常对照者的血清样本中的MMP-9、bF-GF的浓度,并进行统计学分析.结果 MMP-9和bFGF在非小细胞肺癌患者血清中的含量明显高于健康人群(P＜0.01),并与肿瘤分期、肿瘤大小、远处转移呈正相关(P＜0.05),与分化程度呈负相关(P＜0.05)；而与年龄、性别、肿瘤的病理类型无关(P＞0.05),经Pearson相关性检验发现两者之间显著相关(r=0.807,P＜0.01).结论 MMP-9和bFGF共同参与非小细胞肺癌的发生发展、侵袭转移过程,联合检测可作为临床监测病情发展的指标.
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基于PI3K/PTEN/VEGF的菟丝子总黄酮抗肝癌作用机制研究
目的:基于PI3K/PTEN/VEGF通路探讨菟丝子总黄酮(TF)体外抗肿瘤作用机制,考察合适的给药浓度,为菟丝子药材的临床合理应用提供参考.方法:以人肝癌细胞HepG2为实验对象,CCK-8法检测TF给药后的细胞活性,计算其IC 50值;Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡坏死比例;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、人类第十号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA的相对表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子受体2、3(VEGFR-2、VEGFR-3)表达变化趋势.结果:相对阴性对照组,给药组细胞抑制率和凋亡率均具有良好的量-效正相关;qPCR结果显示TF给药可以显著的上调PTENmRNA,下调PI3K、VEGF mRNA;ELISA结果显示HIF-1α、VEGFR-2、VEGFR-3蛋白的表达在给药后均有下降(P＜0.01).结论:菟丝子总黄酮有较好的体外抗肝癌药效,其作用可能与上调PTEN的表达对PI3K-Akt通路进行负调控诱导细胞发生凋亡、下调HIF-1α以及VEGF相关基因和受体蛋白的表达等作用机制共同发挥抗肿瘤作用.
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乙型肝炎表面抗原检测及分析
目的:了解乙型肝炎在本地区的流行情况.方法:用ELISA法检测体检人群血清乙肝表面抗原(HBsAg).结果:按年龄划分的2-7岁,8-19岁,20-39岁,40-70岁,四组人群,HBsAg检出率分别为0.95%、5.19%、13.24%、15.65%,对2-7岁组又按年时分为2000年,2001年,2002年三组,HBsAg检出率分别为1.84%、0.98%、0.30%,按性别分组,男性HBsAg检出率为5.25%,女性为4.44%.结论:由于近年来人们对乙型肝炎抗原的预防意识增强,乙肝病毒感染呈下降趋势.
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乙型肝炎病毒三种检测结果的临床分析
目的:通过对乙型肝炎病毒采用ELISA、IRMA、FQ-PCR.三种检测方法结果的比较,揭示三者的相关性.方法:血清标本分别采用ELISA、IRMA、FQ-PCR进行检测.结果:两对半大三阳中.FQ-PCP.阳性率为93.33%、IRMA阳性率为98.18%;两对半小三阳中,FQ-PCR阳性率为34.28%、IRMA阳性率为86.67%;两对半小二阳中,FQ-PCR 阳性率为18.18%、IRMA阳性率为66.67%.结论:三种检测方法密切相关,后两者更能完善和补充ELISA的不足.
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脑白质损伤早产儿血清神经元特异性烯醇化酶变化
目的：了解血清神经元特异性烯醇化酶变化对脑白质损伤早产儿早期诊断的价值。方法：脑白质损伤早产儿35例为观察组，正常早产儿36例为对照组，两组产儿生后1、7、14天用酶联免疫吸附法（ELISA）检测其血清神经特异性烯醇化酶（NSE）水平。结果：观察组生后第1、7天血清NSE明显高于对照组（P<0.01）。结论：监测脑白质损伤早产儿血清NSE水平，对脑白质损伤诊断和治疗具有一定的临床价值。
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经ELISA法检测呈单独乙肝病毒核心抗体的可靠性
目的研究酶联免疫吸附法（ELISA）检测乙型肝炎免疫学标志物（HBV‐M ）呈单独抗‐HBc 阳性的可靠性。方法收集西安交通大学医学院第二附属医院近期 HBV‐M 检测呈单独抗‐HBc 样本178例，其中抗‐HBe阳性样本29例；以 CMIA 法为参考方法，复检抗 HBs ，抗 HBe ，抗 HBc 。结果29例抗‐HBe 阳性的单独抗‐HBc 样本中，抗‐HBc 真阳性率100％，抗‐HBe 真阳性率90％（26／29）；149例抗‐HBe 阴性的单独抗‐HBc 样本中，依次检出抗‐HBs 阳性率15．44％（23／149），抗‐HBe 阳性率为28．19％（42／149），抗‐HBc 阳性率为55．03％（82／149），抗‐HBc 的假阳性率为1．34％（2／149）。结论 ELISA 检测 HBV‐M 结果呈单独抗‐HBc 时存在假阳性，同时由于抗‐HBs 和抗‐HBe 存在假阴性，造成部分产生免疫保护能力的 HBV 既往感染者和 HBV 疫苗接种者被误诊，ELISA法同步检测抗‐HBe 阳性结果对单独抗‐HBc 样本具有良好的确证价值。
