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口服携带人血小板第四因子的减毒沙门氏菌对放射损伤的保护作用
目的以减毒沙门氏菌SL3261为载体研究通过口服途径血小板第四因子(plateletfactor 4 PF4)对小鼠放射损伤的保护作用.方法将携带PF4基因的真核表达载体pIRES2-EGFP转化减毒沙门氏菌SL3261,通过口服途经1×108个/3 d个菌株的剂量饲服小鼠,在第3次饲服后12h小鼠接受7700cGy剂量60Co全身照射.以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein GFP)、外周血象及流式的检测、骨髓集落培养、小鼠生存期的观察研究PF4对造血系统的保护作用.结果照射后SL3261/PF4治疗小鼠的肝脏、脾脏、肾脏、小肠、外周血及骨髓分别检测到绿色荧光蛋白的表达.照射后第7和14天SL3261/PF4组小鼠骨髓细胞总数(marrow mononuclear cells MNC)、粒巨集落细胞形成细胞(granulocyte-macrophage-colony-forming-unit CFU-GM)和高增殖潜能集落形成细胞(high-proliferating-potential-colony forming cells HPP-CFC)数量与对照组有明显差异(P＜0.05),生存期明显延长.结论本研究首次证实以减毒沙门氏菌SL3261为载体,口服PF4基因治疗可以保护小鼠免受放射损伤,并促进放射损伤后小鼠的造血恢复.
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血小板第四因子(PF4)对人中性粒细胞粘附性与呼吸爆发的调节作用
目的研究血小板第四因子(PF4)对人中性粒细胞(Np)功能的影响.方法用结晶紫染色、免疫荧光标记、PKC试剂盒测定、NBT法及高香草酸(HVA)荧光分光光度法比较对照组与PF4作用的实验组在趋化因子刺激前后,PF4对中性粒细胞总粘附性、整合蛋白CD11b的表达、PKC水平及呼吸爆发作用产生活性氧物质(reactiveoxygen species,ROS)Oi-、H2O2等的影响.结果 PF4对静息中性粒细胞总粘附性有轻度的增强作用,使总粘附性上调了12.24%(P＜0.01),而对整合蛋白CD11b的表达、呼吸爆发产生的ROS(O2-、H2O2)则无影响.进一步研究发现PF4使经趋化三肽(FMLP)活化的中性粒细胞的总粘附性下调17.47%(P＜0.01);使经趋化三肽(FMLP)活化的中性粒细胞的整合蛋白CD11b的表达下调18.84%(P＜0.01);使经佛波酯(PMA)活化的中性粒细胞的呼吸爆发作用产生的O2-、H2O2分别下调了50.29%(P＜0.01)、226.53%(P＜0.05).研究同时发现PF4对静息及活化的中性粒细胞的PKC水平均无影响.结论首次证明PF4与其它经典的趋化因子不同,是中性粒细胞活化的一个负调节因子,对中性粒细胞功能主要起降调节的作用.这种降调节作用不是通过PKC信号转导途径完成的.
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血小板第四因子对CD34+白血病细胞系KG1a粘附功能的影响
目的研究血小板第四因子(PF4)对CD34+白血病细胞系KGla细胞与人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞之间粘附性及对多种粘附分子表达的影响.方法采用粘附实验、粘附阻断实验、MTT染色、半定量RT-PCR、免疫标记流式细胞仪测定等方法.结果 (1)PF4可以增加KG1a细胞与ECV-304细胞之间的粘附作用.PF4与KG1a及ECV-304细胞同时孵育或与KG1a或ECV-304细胞单独孵育,均使KG1a细胞粘附能力增加.(2)抗粘附分子CD49d、CD106、CD54单克隆抗体可显著减少PF4对KGla粘附的增加作用,而抗粘附分子CD62L、CD62E、CD62P单抗则对PF4的这种增加粘附的作用没有影响.(3)在PF4作用的3 h内,半定量RT-PCR检测粘附分子CD49d、CD106、CD54 mRNA表达水平有不同程度的上调.(4)PF4作用2 h后,流式细胞仪分析显示KG1a细胞上的CD49d、ECV-304细胞上的CD54蛋白表达水平显著增加.结论 PF4通过上调粘附分子的表达促进KG1a细胞的粘附功能.
关键词： 血小板第四因子 KG1a细胞系 ECV-304细胞系 粘附 -
血小板第四因子对脐血CD34+细胞趋化作用的研究
目的:研究PF4及其小肽PF417-70对新鲜脐血CD34+细胞的趋化作用及对粘附分子表达的影响.方法:采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34+细胞,利用Transwell穿孔板测定PF4对CD34+细胞的趋化作用;流式细胞仪检测免疫荧光标记的粘附分子及CXCR4的表达.结果:①PF4对脐血CD34+细胞有趋化作用,PF4组的趋化百分比为157.43%±50.06%(P＜0.05),PF4 17-70组为187.02%±10.69%(P＜0.05).②PF4作用于CD34+细胞时,CD49d和CXCR-4表达增加,对其它粘附分子CD31,CD44,CD11a,CD62p,CD62E的表达没有影响.结论:PF4对脐血CD34+细胞有趋化作用,促进整合素CD49d及CXCR4的表达,PF4有助于脐血干细胞的归巢.
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腺病毒介导的PF4cDNA对HUVEC的抑制作用
目的:用一种简便方法构建了含血小板第四因子(PF4)cDNA的腺病毒载体,体外检测其抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)活性.方法:将含有信号肽的PF4cDNA克隆至腺病毒穿梭质粒pAdshuttle-CMV中,形成转移质粒pAdshuttle/PF4,将之用PmeI酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,抽提并鉴定含目的基因的重组体质粒,PacI酶切后用磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒AdPF4.经鉴定后扩增、纯化、测病毒滴度及感染率.直接转导HUVEC检测表达蛋白活性.结果:经鉴定此病毒DNA有PF4cDNA插入,病毒滴度可达1×1010pfu/ml,转导AdPF4病毒后的人脐静脉内皮细胞较对照含空载体病毒增殖减低53%.结论:实验证实腺病毒介导的PF4cDNA体外具有抑制内皮细胞增殖活性.
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血小板黏附作用相关因子研究进展
血小板在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥、修复破损的血管等生理和病理过程中发挥重要作用.血小板黏附是其发挥生理功能的初始步骤.本文就近年来国内外有关血小板黏附作用有关因子研究展开综述.相关的因子主要有血小板膜糖蛋白Ⅰa-Ⅱa、膜糖蛋白Ⅱb-Ⅲa、p-选择素、溶酶体膜蛋白以及胞浆颗粒成分中的三磷酸腺苷(adenosine triphosphatase,ATP),14C-5-羟色胺(5-Hydroxtryptamine,5-HT),血小板第4因子(platelet factor4,PF4)、β-血小板球蛋白(β-thromboglobulin,β-TG)、血栓烷B2 (thromboxane B2,TXB2)、CD40配体(CD40 ligand,CD40L)和溶酶体膜蛋白1(lvsosomal granule membrane protein 1,Lampl)和溶酶体膜蛋白 2(lysosomal granule membrane protein 2,Lamp2)等血小板活化后这些黏附因子也会相应激活表达,可作为指标用于临床血液相关疾病的筛查,同时也可作为凝血功能材料筛选的指标.
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TSPmRNA表达、血浆PF4水平与甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移的关系
目的 探讨血小板反应素(TSP)mRNA表达、血浆血小板第四因子(PF4)水平与甲状腺乳头状癌(PTC)颈部淋巴结转移的关系.方法 应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测40例VIE癌组织和10例癌旁正常组织TSP1和TSP2mRNA的表达,并用酶标记免疫分析法(ELISA)测定40例PIE患者、20例健康体检者(对照组)的血浆PF4水平.结果 (1)PIE癌组织TSP1mRNA、TSP2mRNA阳性表达率分别为45%、47.5%,它们均明显低于正常组织(80%)(P＜0.01),而且TSP1mRNA、TSP2mR.NA阳性表达PTC组的颈部淋巴结转移率均明显低于TSP1mR.NA、TSP2mRNA阴性表达PTC组(33.3%vs 90.9%、42.1%vs 85.7%,P＜0.01).(2)正常对照组、无淋巴结转移的PTC组和伴淋巴结转移的PTC组间的PF4血浆浓度呈线性递减趋势,其中无淋巴结转移组的PF4血浆浓度(2.96±0.21ng/ml)高于转移组(0.98±0.17 ng/ml)(P＜0.05).(3)TSP1mRNA、TSP2mRNA阳性表达VTC组的血浆PF4水平分别明显高于TSP1mRNA、TSP2mRNA阴性表达组(2.36±0.91 ng/ml vs 1.11±0.60 ng/ml,2.15±1.00 ng/ml vs 1.23±0.72 ns/ml)(P＜0.01).结论 缺乏TSP1mRNA、TSP2mRNA表达及血浆低水平的PF4诸因素可能为促进PTC发生颈部淋巴结转移起到了推波助澜的作用,TSP1、TSP2与PF4在抑制PTC颈部淋巴结转移中起着互相协同的作用.
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血栓前状态指标与不明原因复发性流产的相关性研究
目的 检测凝血、纤溶系统、血小板活化指标,探讨血栓前状态指标在不明原因复发性流产(URSA)临床诊断中的意义.方法 选取URSA患者108例及健康体检人员100例,采用凝固法检测PT、APTT、纤维蛋白原(Fg);采用免疫比浊法检测D-二聚体(D-D);采用ELISA法检测组织纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)、血小板第四因子(PF4)、P选择素,并对检测结果进行统计分析.结果 与对照组比较,URSA组Fg、D-D、tPA、PAI-1、PF4和P选择素水平均增高(均P＜0.05);流产次数≥3次组Fg、D-D、tPA、PAI-1、PF4和P选择素水平高于流产次数2次组(均P＜0.05);早期流产组PF4和P选择素水平高于晚期流产组(均P＜0.05).结论 检测不明原因复发性流产患者Fg、D-D、tPA、PAI-1、PF4、P选择素等指标,采取预防治疗措施,对改善妊娠结局具有重要的意义.
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辛伐他汀对肺纤维化鼠肺组织血管新生及 VEGF 和PF4基因表达的影响
目的：观察辛伐他汀对肺纤维化大鼠肺组织血管新生及部分调控基因表达的影响。方法：选取 SD大鼠96只，随机分为4组：空白组（A 组）、模型组（B 组）、泼尼松组（C 组）、辛伐他汀组（D 组），建模后，于7、14、28 d 随机处死8只，取肺组织为检测标本，消化法测定羟脯氨酸（HYP），免疫组化法测血管新生微血管密度（MVD）及血管内皮生长因子（VEGF）、血小板第四因子（PF4）蛋白的表达，RT-PCR 法测 VEGF 及 PF4 mRNA 表达。结果：（1）C、D 组 HYP 较 B 组减轻（均 P ＜0．01）；（2）B、C、D 组 MVD 及 VEGF 表达高于 A 组，PF4表达低于 A 组（均 P ＜0．01）；D 组 MVD 及 VEGF 表达低于 B 组，PF4表达高于 B 组（均 P ＜0．05）。结论：辛伐他汀有改善纤维化作用，其机制可能与其调节肺组织内 VEGF 及 PF4表达、抑制病理性血管新生有关。
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血小板第4因子对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期的调控机制
目的:检测小鼠骨髓细胞p53、Cyclin D1及CDK4蛋白表达量的变化,以探讨血小板第4因子(PF4)对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞保护作用的机制.方法:雄性BALB/c小鼠随机分为3组,第1组(正常对照组)、第2组(单纯照射组)、第3组(PF4保护组),第3组在照射前26 h及20 h腹腔注射PF4 40 μg/kg,第2、3组全身一次性5 Gy 60Co-γ射线照射,照射后4 h取小鼠骨髓细胞,Western blot检测小鼠骨髓细胞内p53、Cyclin D1、CDK4蛋白量表达的变化.结果:第2组、第3组小鼠骨髓细胞p53蛋白量与第1组相比明显升高,而Cyclin D1、CDK4则明显降低(P＜0.05);第2组与第3组p53蛋白表达量的表达有明显差异(P＜0.05),而Cyclin D1与CDK4无统计学意义(P＞0.05).结论:p53蛋白在PF4对急性辐射损伤小鼠骨髓细胞周期调控作用中起一定作用.
