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代谢组学技术在毒理学研究中的应用进展
代谢组学是继基因组学、转录组学及蛋白质组学之后发展起来的一门组学学科，其研究对象是生命活动链条下游的代谢物的集合---代谢组。虽然已经经过了十几年的发展，但代谢组学在实验技术、数据分析及结果的注释各个环节都还有许多问题需要加以解决。任何外源性物质的作用都会导致生物体内代谢平衡的破坏，从而使得体内代谢物质发生变化。因此，利用代谢组学技术研究药物的毒理学性质自然就成为代谢组学的主要应用领域之一，也是应用早的领域。代谢组学在先导化合物的早期毒性筛选、药物的临床前毒性以临床药物的毒性评价等方面都已经得到了广泛的应用，所研究的对象涵盖了人体、实验动物、细胞和斑马鱼等替代模型。代谢组学结果的深入阐释也在发展之中。本文对代谢组学技术及其在毒理学研究中的应用进展进行了综述。
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福多司坦有关物质的亲水作用色谱-质谱结构鉴定
为了研究福多司坦原料药中的有关物质,本研究采用亲水作用色谱法,分离出6个主要有关物质(1个工艺杂质、5个强制降解产物),并结合四级杆串联飞行时间质谱,确定各有关物质的准确分子质量及二级碎片特征.根据质谱裂解分析,结合合成工艺与强制降解实验,对5个有关物质做了结构鉴定,为福多司坦生产工艺控制和质量保障提供参考依据.
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尼麦角林有关物质的色谱-质谱结构鉴定
为了研究尼麦角林及其制剂中的有关物质,采用电喷雾正离子化-飞行时间质谱法(ESI-TOF/MS)测定各有关物质的准确质量,三重四极质谱(ESI-MS/MS)测定子离子特征.根据对照品比对、质谱裂解分析,结合合成工艺与强制降解实验,检测并鉴定了尼麦角林及其制剂中的16个主要有关物质(8个合成副产物、8个降解产物),为尼麦角林生产工艺控制和质量保障提供参考依据.
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氢溴酸沃替西汀有关物质的色谱-质谱结构鉴定
为了研究氢溴酸沃替西汀原料药中的有关物质,本研究采用Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl (150mm×4.6 mm,3μm)色谱柱,以乙腈-甲酸铵缓冲液为流动相梯度洗脱分离出6个主要有关物质,结合电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱法(ESI-Q-TOF/MS)测定5个有关物质的母离子及碎片离子的准确质量和元素组成,大气压化学电离飞行时间质谱法(APCI-TOF/MS)测定1个有关物质的准确分子质量,三重四级杆串联质谱(MS/MS)测定其二级碎片离子特征.在所建立的条件下,氢溴酸沃替西汀及其有关物质分离良好,首次检测并鉴定出了6个主要有关物质,为氢溴酸沃替西汀的工艺优化和质量控制提供了参考依据.
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头孢妥仑匹酯有关物质的色谱-质谱结构鉴定
目的:采用色谱-质谱联用技术鉴定头孢妥仑匹酯的有关物质,为其工艺优化和质量控制提供参考依据.方法:采用YMC-Pack ODS-AM(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-乙酸铵缓冲液为流动相,梯度洗脱,对头孢妥仑匹酯有关物质进行分离;采用电喷雾正离子化-飞行时间质谱法(ESI-TOF/MS)测定各有关物质离子的准确质量和元素组成,三重四极质谱(ESI-MS/MS)测定子离子特征.结果:在所建立的条件下,头孢妥仑匹酯及其有关物质分离良好,检测并鉴定出10个主要有关物质.结论:色谱-质谱联用技术能有效地分离鉴定头孢妥仑匹酯中的有关物质,鉴定结果为其质量控制和工艺优化提供了参考.
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注射用头孢他啶有关物质的色谱-质谱结构鉴定
目的:采用色谱-质谱联用技术鉴定注射用头孢他啶的有关物质,为其质量研究和控制提供参考依据.方法:采用Thermo Syncronis C18(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1％乙酸铵缓冲液为流动相梯度洗脱,对注射用头孢他啶有关物质进行分离;采用电喷雾正离子化-飞行时间质谱法(ESI-TOF/MS)测定各有关物质的准确质量和元素组成,三重四极质谱(ESI-MS/MS)测定子离子特征,质谱解析鉴定有关物质的结构.结果:在所建立的条件下,头孢他啶及其有关物质分离良好,检测并鉴定出9个主要有关物质,其中4个为欧洲药典规定杂质,5个为新鉴定的未知杂质.结论:色谱-质谱联用技术能有效地分离鉴定头孢他啶中的有关物质,为其稳定性研究和质量控制提供技术支持.
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缩宫素中升压物质检查探讨
目的:对生物提取和化学合成2种来源的缩宫素制剂中升压物质检查的必要性进行探讨.方法:使用升压物质检查法对2种来源的缩宫素注射剂进行升压物质检查,采用HPLC,LC-MS对2种来源的缩宫素溶液及其制剂进行升压素测定.结果:生物提取及化学合成2种来源的缩宫素溶液及其制剂升压物质检查均符合规定.经HPLC及LC-MS测定,确证生物提取来源的缩宫素含有升压素,而化学合成来源的缩宫素不合升压素.结论:建议《中华人民共和国药典》(ChP)收录的化学合成来源的缩宫素及其制剂不再设置升压物质检查项.
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肾气丸“阴中求阳”配伍对体内乌头碱、次乌头碱含量的影响
目的:测定肾气丸各拆方组提取液给药后大鼠体内血清中乌头碱、次乌头碱的含量,分析肾气丸“阴中求阳”配伍对方中乌头碱、次乌头碱含量的影响.方法:按照肾气丸组方“补阴”+“补阳”+“三泻”的特点将肾气丸组方药物拆分成“补阳1”组、“补阳2”组、“阳+阴”组、“阳+泻”组、“全方”组,然后提取给大鼠灌胃给药后取血清,用高分辨液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)测定各组血清中乌头碱、次乌头碱的含量.结果:各组血清中均未检测到乌头碱含量,并且只在“阳+阴”组和“阳+泻”组中检测到次乌头碱.结论:次乌头碱服用肾气丸后的入血成分之一,并且次乌头碱可能是肾气丸“阴中求阳“的有效成分.
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色谱-质谱联用技术测定人体内类固醇激素的研究进展
类固醇激素是高效能的生物化学物质，在多种生理活动中发挥显著的调节作用，但在体内的含量极低，因此对其进行准确定量具有重要意义。在各种检测方法中，色谱-质谱联用技术因具有高效、快速、灵敏的优点而得以广泛应用。笔者综述近年来色谱-质谱联用技术在内源性类固醇激素测定中的应用，为进一步的临床研究提供参考依据。
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夫西地酸有关物质的色谱-质谱结构鉴定
采用色谱-质谱联用技术鉴定夫西地酸的有关物质.采用Agilent Extend-C18色谱柱(150 mm×4. 6 mm,3. 5 μm),以甲醇-乙腈-水-甲酸为流动相梯度洗脱,对夫西地酸有关物质进行分离;采用电喷雾正离子化-飞行时间质谱法(ESI-TOF/MS)测定各有关物质的相对分子质量和元素组成,三重四极杆串联质谱(ESI-MS/MS)测定子离子特征,解析鉴定有关物质的结构.在所建立的条件下,夫西地酸及其有关物质分离良好,检测并鉴定出19 个主要有关物质,其中1 1 个为欧洲药典规定的已知有关物质,8个为未知有关物质.色谱-质谱联用技术能有效地分离鉴定夫西地酸中的有关物质,为其存储条件和质量控制提供参考依据.
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盐酸吡格列酮有关物质的色谱-质谱结构鉴定
采用色谱-质谱联用技术鉴定盐酸吡格列酮的有关物质.使用Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1％乙酸铵缓冲液为流动相,梯度洗脱,对盐酸吡格列酮有关物质进行分离;以电喷雾正离子化-飞行时间质谱法测定各有关物质[M+H]+母离子的准确质量和元素组成,三重四极质谱测定特征碎片离子,对有关物质进行分析鉴定.根据质谱分析结果,结合合成工艺与强制降解机制分析,检测并鉴定出11个主要有关物质(1个合成中间体、6个合成副产物、4个降解产物),可为其生产工艺优化和质量控制提供理论参考.
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色谱-质谱联用技术研究盐酸西那卡塞的有关物质
采用LC-MS法分离和鉴定盐酸西那卡塞有关物质.采用Hypersil C,8(100 mm×4.6 mm,2.4 μm)色谱柱,以0.1％乙酸铵溶液-乙腈(93∶7)为流动相A相,乙腈为流动相B相进行线性梯度洗脱,对盐酸西那卡塞有关物质及强制降解产物进行分离.经过电喷雾正离子化-高分辨TOF/MS检测,同时结合MS/MS光谱和对照品对照,对各有关物质进行分析鉴定.在所建立的液-质联用分析条件下,盐酸西那卡塞及其有关物质得到有效的分离,共检测到10个有关物质,分别为盐酸西那卡塞合成起始原料(1个)、合成中间体(1个)、合成副产物(4个)和降解产物(5个).建立的LC-MS法能有效鉴定盐酸西那卡塞有关物质,并为其质量控制和工艺优化研究提供参考依据.
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应用色谱-质谱联用法快速鉴别人参和西洋参须根
目的 研究快速鉴别人参须根和西洋参须根的方法.方法 采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(Ultra performance liquid chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry,UPLC-TQ-MS/MS)法又称色谱-质谱联用方法进行快速分离和鉴定,采用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50mm,1.7 μm)色谱柱,柱温40℃,以乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相梯度洗脱,流速0.5 ml/min；质谱采用电喷雾(ESI)离子源,全扫描和子离子扫描,负离子模式下采集数据.结果 在西洋参须根中检测到西洋参特征成分24(R)-拟人参皂苷F11,未检测到人参的特征成分人参皂苷Rf,而在人参须根中检测到人参的特征成分人参皂苷Rf,未检测到西洋参特征成分24(R)-拟人参皂苷F11.结论 所建立的色谱-质谱联用法能快速区分人参和西洋参须根.
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替加氟有关物质的色谱-质谱结构鉴定
目的 采用色谱-质谱联用技术鉴定替加氟有关物质,为其工艺和质量控制提供参考依据.方法 采用十八烷基硅烷键合硅胶的填充剂,流动相为乙腈-甲醇-10 mmol·L-1醋酸铵缓冲溶液,对替加氟有关物质进行分离;采用电喷雾正离子化-飞行时间质谱法测定各有关物质的准确质量,三重四极杆质谱测定子离子特征,并经解析鉴定各杂质结构.结果与结论 替加氟与其有关物质分离良好,检测出4个主要有关物质均为替加氟合成的起始原料,是母核基本未发生变化,仅5位被不同基团取代的衍生物.
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色谱-质谱联用技术在中药代谢研究中的应用
色谱-质谱联用技术作为一种具分离和鉴别为一体的分析方法,应用于中药单体及其复方成分代谢的研究中,开创了中药药代动力学研究的新思路.
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白子菜不同药用部位挥发油的含量测定及其气相色谱-质谱联用分析
目的 测定白子菜不同药用部位中挥发油的含量并对其化学成分进行分析.方法 以水蒸气蒸馏法提取挥发油,并用气相色谱-质谱(GC-MC)联用仪进行分析. 结果白子菜不同部位挥发油的含量在 0.245%～2.379% 之间,经 GC-MS 分析鉴别出 44 种化学成分.其中在根、茎、叶挥发油中分别鉴定出 31 ,25 和 27 种化学成分,有 14 种成分为 3 个药用部位所共有.结论 白子菜不同药用部位挥发油的含量及其化学成分存在一定的差异,其中以α-石竹烯、δ-荜澄茄烯、大叶香烯 D 含量较高.
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加勒比松叶挥发油成分分析
利用气相色谱-质谱-计算机联用技术对加勒比松叶挥发油成分进行分析,结果分出36个色谱峰,鉴定了29个化合物,占总量的97.172%.其中主要成分是:荜澄茄烯(21.953%)和β-水芹烯(21.342%).
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替米沙坦3种制剂人体相对生物利用度研究
目的:研究替米沙坦 3种制剂的人体生物利用度.方法: 18名健康男性志愿者随机等分成 6组,采用 3周期随机交叉试验设计,分别单剂量服用 80mg替米沙坦片(受试制剂, T1)、替米沙坦胶囊(受试制剂, T2)和美卡素(参比制剂, R),采用色谱-质谱联用法测定血浆样品中的替米沙坦浓度.结果: T1、 T2与 R的 tmax分别为( 1.5± 0.5)、( 1.5± 0.4)、( 1.5± 0.3) h, Cmax分别为( 794.5± 368.2)、( 813.9± 352.3)、( 773.6± 357.6)μ g/L, AUC0～ 96分别为( 3 113.2± 1 386.2)、( 3 001.0± 1 325.4)、( 3 050.6± 1 209.4)(μ g· h) /L, t1/2分别为( 20.3± 5.6)、( 21.0± 7.4)、( 20.7± 6.4) h.与 R相比, T1、 T2相对生物利用度分别为( 101.1± 12.3)%、( 97.4± 12.3)%.结论:替米沙坦 3种制剂生物等效.
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液相色谱-质谱联用法检测百花定喘丸中掺有的激素成分
目的 采用两套经过方法 学验证的高效液相色谱(HPLC)系统,对百花定喘丸中的激素成分进行分离筛查,并利用液相色谱-质谱联用(LC-MS)对已分离出的激素成分进行确认.方法 仪器为岛津LC-MS2010A液相色谱质谱联用仪,质谱分析器为单极四级杆检测器.色谱柱为迪马C18柱,流动相为乙腈-水(梯度洗脱),检测波长200～600 nm,流速为1.0mL/min.结果 在百花定喘丸中检测出醋酸泼尼松和泼尼松两种激素成分.结论 所用方法简便快速,检测结果准确可靠.
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癌症患者血清代谢组学的HPLC和LC-MS研究
目的 本实验采用HPLC法和LC-MS技术检测了健康人和肿瘤患者人血清样品中的代谢产物,鉴定了与肿瘤生长相关的代谢物,以阐明癌症患者血清代谢组学规律.方法 HPLC条件:色谱柱为Phenomenex Luna(150mm×4.6mm,5μm),流动相为水-75％甲醇(0.1％醋酸铵水溶液)；检测波长为215nm,进样量为l0μL;质谱条件为电喷雾离子检测器(ESI)负离子模式下检测；毛细管电压为2.74kV;锥孔电压为25.52V;离子源温度为100℃；得到保留时间和峰面积,数据经SIMCA-P+软件进行正交-偏小二乘投影判别分析(OPLS-DA),表达出与肿瘤相关的差异代谢物；利用LC-MS对相关代谢物进行鉴定.结果 检测精密度RSD在0.04％～0.61％之间,健康人血清和肿瘤人血清中代谢规律得到明显区分；5种相关代谢组分得到提取和鉴定,分别为苏氨酸,色氨酸,甘油二酯,磷酰胆碱和硬脂酸.结论 肿瘤患者和健康人血清代谢规律有明显差异,鉴定出的化合物与肿瘤生长代谢密切相关,可为肿瘤疾病生物标记物的研究提供相关基础依据.
