高通量DNA测序技术在抗体新药研发中的应用

自2005年首次报道了一种基于微乳液PCR技术的高通量DNA测序技术(high-throughput DNA sequencing technology)以来,高通量DNA测序平台已经发展为基因组和各种基因文库序列检测的强大工具.大容量的抗体基因库是日前获得抗体新药的基础,高通量DNA测序技术为从海量的抗体基因库中快速发现功能抗体分子提供了可能.本文就近几年高通量DNA测序技术在抗体基因库的多样性分析,抗体CDR3区的高通量测序、频率分析、功能基因发现及各种展示技术与高通量DNA测序技术的对接应用等方面进行了综述,以期为抗体新药的研发提供一条新的技术路线.

原发性胆汁性肝硬化患者自身抗体检测的临床意义

目的了解抗线粒体M2亚型抗体(AMA-M2)阳性原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者自身抗体的种类和临床意义.方法 92例AMA-M2阳性PBC患者,应用间接免疫荧光法,采用肝脏马赛克,包括猴肝和心肌、大鼠肝、胃、肾脏和人类上皮培养细胞(Hep-2)为组织基质检测血清中的自身抗体;并用免疫印迹法检测AMA亚型(M2、M4和M9)、可提取的核抗原(ENA)抗体[核糖核蛋白/史密斯抗体(nRNP/Sm)、史密斯抗体(Sm)、干燥综合征抗原A抗体(SS-A)、干燥综合征抗原B抗体(SS-B)、硬皮病70抗体(Scl-70)、Jo-1抗体(Jo-1)、着丝点B蛋白抗体(CENP B)、双链DNA抗体(dsDNA)、组蛋白抗体(histones)和抗核糖核酸P蛋白抗体(rib-P-protein)]和肝病相关自身抗体.结果92例PBC患者中有73例(79.35%)血清中存在抗核抗体(ANA);其荧光模式分别为核膜型42例(45.65%),着丝点型18例(19.57%),核浆颗粒16例(17.39%)和核点型12例(13.02%);ENA检测结果:CENP B阳性18例,SS-A阳性6例,SS-A+SS-B阳性3例,组蛋白抗体和nRNP/Sm阳性各1例;AMA分型检测中单一AMA-M2阳性62例(67.39%),AMA-M2+M4阳性26例(28.26%),AMA-M2+M4+M9阳性3例;还发现AMA-M2伴M4阳性的患者全部为疾病进展到肝硬化的阶段.结论大多数PBC患者血清中存在ANA,其荧光模式主要为核膜、着丝点、核浆颗粒和核点型;AMA-M2和M4亚型抗体为诊断PBC的重要血清免疫学标志,并且AMA-M4与疾病进程密切相关.

细胞核内尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG2)在抗体多样性和HIV-1感染中的作用

尿嘧啶DNA糖苷酶(Uracil DNA Glycosylase,UNG 0r UDG)能切断DNA中错误插入的尿嘧啶(U)碱基与糖基之间的N-糖苷键,移去尿嘧啶,留下无碱基位点[1],该位点能被其它酶(如DNA聚合酶和DNA连接酶)识别和修复[2].因此,UNG能够减少由胞嘧啶(C)与鸟嘌呤(G)配对向腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T)配对的颠换率,防止和修复DNA中的错配,是生物体减少突变的自我保护机制之一.除了作为DNA修复过程中的一个重要的修复酶外,近年来的研究发现,UNG与机体的免疫功能相关,它参与免疫分子抗体多样性的产生和细胞内天然抗病毒防御作用[3]J.另外,UNG也参与到许多病毒(例如HIV-1)的复制过程中,有效减少病毒的突变率[4]J.HIV-1感染过程实际上就是病毒与机体免疫系统互相对抗的过程,UNG在这场对抗中的作用正在逐渐引起科学家的兴趣.

简述抗体多样性的产生机制及意义?

抗体多样性的研究进展

关于抗体多样性的遗传起因，科学家曾经提出了2种解释理论：一是生殖系理论，认为所有抗体都由专一基因负责，该理论的问题在于，面对如此众多的抗体，生物体内的基因数目无法满足需求；二是体细胞突变理论，认为抗体基因可以发生突变和重组，该理论能够解释较少的基因即可产生大量微小差异的抗体。目前这2个理论都缺乏相关的实验支持。
　　日本学者利根川进利用限制酶酶切和重组DNA 解决了这个难题，他们首先纯化抗体的mRNA ，然后将其与DNA 杂交，并计算产生抗体的基因数目，结果表明基因数目远远少于抗体数目，因此，否定了生殖系理论［1］。1976年，利根川进将胚胎细胞（不产生抗体）和骨髓瘤细胞（产生抗体）中抗体轻链基因的分布情况进行了比较，发现在胚胎期不同抗体基因的距离较远，而在骨髓瘤细胞中这些基因距离靠近，这个设计精密且令人信服的实验说明生殖细胞在发育成B 淋巴细胞的过程中，抗体基因出现了重分布现象［2］。他们在此基础上对抗体基因的重分布现象及机制进行了全面研究。在随后5年中用一系列证据确定了体细胞突变理论的正确性［3-5］，即抗体多样性是由于B淋巴细胞中抗体基因片段的染色体重组和突变所造成［6］。1987年，利根川进由于“抗体多样性产生遗传机制的发现”而独享了该年度的诺贝尔生理学及医学奖。