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GLI1抑制剂FL18对胶质母细胞瘤的抑制作用及其机制
Hedgehog(HH)信号通路的异常激活在胶质母细胞瘤的发生发展中起着重要作用.胶质瘤相关的致癌基因同族体-1 (glioma-associated oncogene homoglog-1,GLIl)蛋白作为HH通路末端的转录因子,是该通路终的功能执行者,被认为是胶质母细胞瘤的重要治疗靶点.本研究旨在探究新型GLI1抑制剂FL18的抗胶质母细胞瘤活性及其作用机制.MTT实验和集落形成实验研究FL18对脑瘤细胞的生长抑制作用;运用流式细胞术分析FL18对细胞凋亡的影响;Transwell实验探究FL18对细胞侵袭能力的抑制作用;通过体内移植瘤实验研究FL18对胶质母细胞瘤的生长抑制作用;建立及优化双荧光素酶报告基因的检测体系,并检测FL18对GLI1转录活性的影响;采用Western blot方法对FL18的作用机制进行初步探讨.FL18对体外培养的胶质母细胞瘤的半数抑制浓度(IC50)在纳摩尔水平.体内实验结果显示,22.5和45 mg·kg-1 FL18对裸鼠原位移植瘤的抑制率分别为55.4％和89.8％.FL18能够抑制GLI1的转录活性,IC50为3.32×10-11 mol·L-1.Western blot实验显示,在FL18作用后的胶质母细胞瘤细胞和肿瘤组织中,其GLI1表达明显降低,而SMO表达无明显变化,调控GLI1上游的ERK和AKT等蛋白的磷酸化水平变化均不显著;FL18还可升高凋亡相关蛋白切割型的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (c-caspase 3)和聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(c-PARP)以及Bax的表达,降低Bcl-2的表达;降低侵袭相关蛋白金属基质蛋白酶(MMP2和MMP9)的水平.以上研究结果表明,FL18通过抑制GLI1而对胶质母细胞瘤的生长起到一定的抑制作用,其抗肿瘤活性可能与抑制GLI1的表达水平有关.
关键词： 胶质瘤相关的致癌基因同族体-1 胶质母细胞瘤 抗肿瘤 侵袭
