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白杨素对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠右心室NOX4及NF-κB表达的影响
观察白杨素(chrysin,5,7-二羟基黄酮)对野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠右心室重构的影响及其机制.Sprague-Dawley大鼠适应性喂养1周,随机分为正常对照组、MCT组、MCT+chrysin (50 mg·kg-1·d-1)及MCT+chrysin(100 mg·kg-1·d-1)剂量组.MCT (60 mg·kg-1)皮下注射诱导PAH大鼠模型.连续给药4周后,右颈外静脉插管测定大鼠右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(mPAP).分离大鼠右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)并称重,剥离大鼠胫骨并测量其长度,计算RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值.HE染色观察右心室病理学变化,Masson染色观察右心室胶原沉积的变化.比色法测定右心室总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量.qPCR、Western blot和(或)免疫组化检测右心室collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)、核转录因子κB (nuclear factor-kappa B,NF-κB) mRNA和蛋白表达.结果发现,白杨素连续给药4周后能明显降低MCT诱导的PAH大鼠RVSP及mPAP,减轻RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值,改善右心室病理变化,降低右心室胶原的沉积及collagen Ⅰ、collagen Ⅲ的表达,提高右心室T-AOC水平,降低NOX4的表达及MDA含量,抑制NF-κ的表达.结果表明,白杨素能缓解MCT诱导的PAH大鼠右心室重构,其机制可能与其抑制NOX4介导的氧化应激损伤,进而抑制NF-κB所介导的胶原沉积有关.
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依帕司他对肺动脉高压大鼠右心室重构的作用及机制
目的 研究依帕司他(epalrestat,EPS)对野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠右心室重构的影响及机制.方法 SD大鼠适应性喂养1周,随机分为正常对照组、MCT组、MCT+ EPS(50 mg·kg-1)及MCT+ EPS(100 mg·kg-1)剂量组.PAH大鼠模型通过皮下注射MCT(60 mg·kg-1)被诱导并连续给予EPS治疗4周后,右颈外静脉插管测定大鼠右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(mPAP).分离大鼠右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)并称重,剥离大鼠胫骨并测量其长度,计算RV/(LV+S)及RV/胫骨长度的比值.HE染色观察右心室病理学变化,Masson染色观察右心室胶原沉积的变化.比色法测定右心室总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量.qPCR、West-ern blot和(或)免疫组化检测右心室胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、醛糖还原酶(aldose reductase,AR)、NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA和蛋白表达.结果 EPS连续给药4周后能明显降低PAH大鼠的RVSP及mPAP,减小RV/(LV+S)及RV重量/胫骨长度的比值,改善右心室病理变化,减少右心室胶原的沉积及胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ的表达,提高右心室T-AOC水平,同时明显降低右心室AR、NOX4的表达及MDA的水平.结论 EPS能够缓解MCT诱导的PAH大鼠右心室重构,其机制可能与其抑制AR的表达,进而抑制NOX4介导的氧化应激损伤有关.
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NADPH氧化酶4在高糖促进HUVECs内活性氧产生机制中的作用
目的:研究在高浓度葡萄糖刺激状态下,人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内活性氧的主要来源.方法:Ⅱ型胶原酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞,流式细胞术检测细胞内活性氧的生成,RT-PCR及Westem blot检测细胞内NADPH氧化酶4(NOX4)的表达.结果:高糖处理HUVECs后细胞内ROS升高、NOX4表达明显上调;NOX抑制剂DPI能够抑制NOX4表达的上调和细胞内ROS的升高.结论:高糖处理HUVECs时细胞内ROS升高主要来源于NOX4.
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5-甲氧基色胺-α-硫辛酸盐对6.0 Gy受照小鼠造血系统的辐射防护作用
目的：探讨新化合物5-甲氧基色胺-α-硫辛酸盐（MLA）对亚致死剂量受照小鼠造血系统损伤的辐射防护作用。方法将15只C57BL/6小鼠完全随机分为对照组、照射组和照射+MLA组。对照组接受假照射（0 Gy），其余两组进行6.0 Gy全身137Csγ射线照射。照射后2 h将照射+MLA组小鼠按10 mg/kg灌胃给药，持续给药3 d。待照射后30 d处死小鼠，取外周血和单侧骨髓细胞进行计数，检测骨髓细胞克隆形成能力、造血细胞活性氧以及烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸氧化酶4（NOX4）的表达。结果与对照组比较，照射组小鼠骨髓有核细胞计数、粒细胞-单核细胞集落生成数量（CFU-GM）均明显下降（t＝9．304、7．493，均P＜0．05）；骨髓细胞活性氧水平和NOX4表达显著升高（t＝14．74、53．12，均P＜0．05），且差异有统计学意义。与照射组相比，照射＋MLA组小鼠外周血WBC、 CFU-GM显著升高（t＝4．858、3．947，均P＜0．05）；骨髓细胞活性氧水平和NOX4表达显著下降（t＝11．21、33．93，均P＜0．05），且差异有统计学意义。结论 MLA对辐射引起的造血系统损伤有一定的防护作用。
关键词： 辐射防护 辐射损伤 活性氧 NADPH氧化酶4 5-甲氧基色胺-α-硫辛酸盐 -
抵抗素样分子β和NADPH氧化酶4在低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉的表达变化及意义
目的 研究大鼠低氧性肺动脉高压(HPH)肺小动脉平滑肌抵抗素样分子β(RELM-β)和NADPH氧化酶4(NOX4)表达变化及与血管重塑的关系.方法 40只雄性SD成年大鼠随机分为对照组(C组)、低氧3d、7d、14 d和21d组(H3、H7、H14、H21组),复制HPH大鼠模型;测各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右室肥厚指数(RVHI);取左肺组织包埋切片HE染色观察血管形态学指标;免疫组织化学检测血管壁RELM-β和NOX4蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应检测肺小动脉平滑肌中RELM-β和NOX4 mRNA表达情况.结果 与对照组相比,低氧组大鼠出现肺小动脉重塑和RVHI增加,21 d时明显;低氧7d后,mPAP上升,14 d达高峰并持续到21 d;mRNA显示RELM-β和NOX4在对照组肺小动脉壁弱阳性表达;RELM-β mRNA于低氧7d后明显增加,低氧14 d后达高峰,低氧21d下降但仍高于对照组;NOX4 mRNA于低氧3d明显增加,低氧7d下降但高于对照组,低氧21 d再次升高且高于低氧3d组,呈“驼峰样”改变.免疫组织化学显示RELM-β和NOX4变化趋势与mRNA水平变化基本一致;大鼠肺小动脉壁RELM-β与NOX4mRNA、蛋白表达与mPAP、血重塑指数、RVHI均呈正相关.结论 慢性低氧诱导HPH大鼠模型肺小动脉壁RELM β、NOX4表达升高,RELM-β可能促进NOX4在慢性低氧后期的表达增加,二者共同参与HPH的发病过程.
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贝那普利对肝纤维化大鼠肝组织NOX4及Ang Ⅱ表达的影响
目的 研究贝那普利对肝纤维化进程中肝组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)及血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)表达的影响,探讨贝那普利可能的抗纤维化机制. 方法 将22只SD大鼠随机分为3组:正常对照组(n=6)、模型组(n=8)、贝那普利治疗组(n=8).制备40％四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型,贝那普利治疗组同时应用贝那普利灌胃,共8周.对肝组织行常规HE及Masson染色,观察其病理变化;利用双抗体夹心ELISA (ABC-ELISA)法测定肝匀浆血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)浓度;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织NOX mRNA的表达量. 结果 模型组肝匀浆Ang Ⅱ浓度较正常对照组明显升高[(48.625±1.357) ng/ml vs(23.330±1.606) ng/ml,P＜0.05],模型组肝组织NOX4 mRNA表达较对照组明显升高(31.78 ±3.96 vs 2.03 ±0.31,P＜0.05).治疗组肝匀浆AngⅡ浓度较模型组有所下降[(45.518±3.072) ng/ml vs (48.625±1.357) ng/ml,P＜0.05],治疗组肝组织NOX4mRNA的表达较模型组明显下降(15.93±5.01 vs 31.78±3.96,P＜0.05).三组大鼠肝组织中AngⅡ与NOX4表达变化呈正相关(r=0.472,P＜0.05). 结论贝那普利可能通过抑制肝纤维化过程中AngⅡ的表达并进一步抑制NOX4介导的氧化应激反应发挥其抗纤维化作用.
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姜黄素对大鼠肝纤维化的保护作用及其对肝脏NADPH氧化酶4表达的影响
目的:探讨姜黄素对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的影响及姜黄素能否抑制肝脏NADPH 氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)的表达.方法:腹腔注射CCl4(每周2次,共6周)诱导SD大鼠肝纤维化模型.将SD大鼠随机分成4组:正常对照组(n=10)、单纯给药组(n=10)、模型对照组(n=15)和姜黄素预防组(n=1 5),姜黄素给药剂量为200 mg/kg体质量.检测血清中ALT、AST及活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的水平;肝损伤和肝纤维化评估采用肝组织HE染色与天狼星红染色;分别用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法检测肝组织NOX4的表达.结果:姜黄素能减轻CCl4诱导后大鼠的肝损伤与肝纤维化,抑制血清ROS的产生.与模型对照组相比,姜黄素预防组的肝纤维化大鼠肝脏中NOX4 mRNA与蛋白表达水平显著降低.结论:姜黄素能减轻CCl4诱导大鼠发生的肝损伤与肝纤维化,其效应可能与抑制肝脏NOX4过表达有关.
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姜黄素对大鼠角膜碱烧伤新生血管和 NADPH氧化酶4表达的影响
目的研究姜黄素对大鼠角膜碱烧伤新生血管的抑制作用和对角膜NADPH氧化酶4（NADPH oxi-dase 4）表达的影响。方法选用标准化清洁级雄性SD大鼠24只，随机分为4组，每组6只，右眼为实验眼。A组为空白对照组，不做任何处理，B组为碱烧伤模型组，C组为姜黄素治疗组，D组为二甲基亚砜（DMSO）对照组。B、C和D组分别以直径3 mm的圆形滤纸片浸入1 mol／ L NaOH溶液中20 s，均匀的贴于大鼠右眼角膜中央40 s，制造大鼠角膜碱烧伤模型，B组结膜下注射生理盐水0．1 ml，C组注射姜黄素溶液0．1 ml，D组注射姜黄素溶剂DMSO 0．1 ml，均隔天注射1次，注射7次。第3天、第7天、第10天、第14天裂隙灯下观察并照相记录角膜新生血管（ CNV）生长情况，计算CNV面积，数据做统计学分析。第14天处死所有大鼠，摘取右眼球进行石蜡包埋切片，H-E染色观察角膜形态学变化，免疫组化法（S-P）观察角膜NOX4表达，计算机彩色图像分析软件计算平均光密度值，数据做统计学分析。结果 C组新生血管第14天时明显减少退化，角膜透亮，CNV 面积和B 组比较有统计学差异；H-E染色C组角膜基质层新生血管减少退化；免疫组化A组NOX4仅在角膜上皮层和内皮层微量表达，B组较A组明显表达，C组和B组比较表达下降有统计学差异，D组和B组比较无统计学差异。结论姜黄素可以有效的抑制大鼠角膜碱烧伤新生血管，其效应与抗氧化抑制NOX4表达有关。
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姜黄素对大鼠肝星状细胞中TGF-β调节的NADPH氧化酶4的激活及Smad信号通路的影响
目的：研究姜黄素潜在的抗纤维化作用，以及转化生长因子β( TGF-β)诱导大鼠肝星状细胞( HSC-T6)激活的机制。方法不同浓度的姜黄素(0、5、10、20、40μmol/L)处理HSC-T6后，用MTT法测定其对HSC-T6增殖作用的影响；用RT-PCR法检测其mRNA水平的表达；用Westem blot法检测表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分α1I胶原(Col1α1)、NADPH氧化酶4(NOX 4)、 Smad 2、Smad 3及其磷酸化的水平。结果40μmol/L的姜黄素组刺激HSC-T648 h后，其抑制率达到大，显著低于仅TGF-β1刺激组、5、10及20μmol/L姜黄素组( P<0．05)。姜黄素可显著降低激活型HSC-T6的α-SMA、α1I胶原mRNA与蛋白表达，从而可以降低细胞外基质的沉积；有效降低了NOX 4的蛋白水平，减少了活性氧的水平；还明显降低Smad 2、Smad 3的磷酸化程度，呈浓度依赖性。结论姜黄素在体外能够明显地抑制HSC-T6激活，对肝纤维化的发生发展具有一定抑制作用，其机制可能与抑制TGF-β诱导的NOX4的激活及Smad信号通路有关。
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槲皮素对刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的保护作用
目的：探讨槲皮素对刀豆蛋白A( Concanavalin A, ConA)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法通过检测ConA注射后8 h血清转氨酶水平及肝组织病理学评估肝损伤；应用酶联免疫法( ELISA)检测TNF-α、IFN-γ、IL-4水平；定量PCR和Western blotting或免疫组织化学检测肝组织mRNA与蛋白的表达。结果与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清转氨酶水平(P<0.05),且组织病理学分析表明肝脏炎症坏死程度明显减轻；与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清促炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-4的水平(P<0.01)；槲皮素预防组肝组织NOX4、COX-2和iNOS基因与蛋白的表达均明显低于模型组(P<0.05)。结论槲皮素对ConA 诱导小鼠急性肝损伤具有保护作用,其发挥有益作用的机制可能与抑制肝脏的炎症反应有关。
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HDL抑制人脐静脉内皮细胞NADPH氧化酶4表达和活性氧生成
目的 分析HDL对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)内NADPH氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)及其亚组分p22phox、p67phox、Rac1与活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,研究HDL对LDL的拮抗作用.方法 用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养HUVEC;用RT-PCR、Western印迹观察NOX4、p22phox、p67phox、Rac1表达的变化;用流式细胞仪检测细胞内ROS的变化.结果 HDL处理HUVEC能下调NOX4和p67phox mRNA和蛋白水平,但不影响p22phox和Rac1的表达.高浓度LDL刺激HUVEC时,NOX4表达上调,细胞内ROS生成增加,但p22phox、p67phox和Rac1的表达没有明显变化.用HDL预处理再加高浓度LDL刺激时,NOX4表达下调,ROS生成量减少;结论 HDL可通过下调HUVEC NOX4表达降低ROS水平.
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miR-146a调控人脐静脉内皮细胞的衰老及机制
目的 探究miR-146a在人脐静脉内皮细胞衰老中的调节作用,并初步探究其机制.方法 以人脐静脉内皮ECV-304细胞为研究对象,连续传代建立ECV-304细胞复制性衰老模型,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中衰老细胞比例,实时定量PCR法检测不同代次(P2、P6、P9、P12、P15代)细胞中miR-146a表达.靶基因预测软件预测miR-146a靶基因.细胞转染建立miR-146a表达上调的P12代细胞(Pre-miR146a组)和miR-146a表达下调的P12代细胞(Anti-miR 146a组),并建立相应对照组,SA-β-gal法检测衰老细胞比例,Western blot检测NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白表达.结果 P6、P9、P12和P15代细胞的衰老细胞比例明显高于P2代细胞(P＜0.05),miR-146a表达则明显低于P2代细胞(P＜0.05).靶基因预测miR-146a的靶基因为NOX4;转染后,Pre-miR146a组衰老细胞比例明显低于对照组(P＜0.05),Anti-miR146a组衰老细胞比例明显高于对照组(P＜0.05);Pre-miR146a组NOX4蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05),Anti-miR146a组NOX4蛋白表达明显高于对照组(P＜0.05).结论 miR-146a在衰老的人脐静脉内皮细胞ECV-304中表达下降,上调miR-146a表达能够抑制ECV-304衰老,其机制与调节NOX表达有关.
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eNOS和NADPH氧化酶在慢性缺氧条件下小鼠肺组织中表达关系的研究
目的：探讨eNOS和NADPH氧化酶在慢性缺氧条件下小鼠肺组织中表达的关系。方法将野生型及eNOS基因敲除的C57BL/6雄性小鼠各30只随机分为常氧组、低氧7 d组、低氧21 d组、治疗7 d组和治疗21 d组，每种每组小鼠各6只。低氧和治疗组小鼠在10%氧浓度条件下进行饲养，治疗组小鼠饮水中加入10 mmol/L 4-羟基-2,2,6,6-四甲基哌啶（TEMPOL）进行干预。比较各组小鼠肺小动脉重塑（MT%）及右心室肥厚指标的变化；ELISA法检测各组肺组织ROS浓度的变化；RT-PCR法检测各组肺组织NOX2、4及eNOS基因表达的变化。结果野生型及基因敲除低氧组小鼠肺血管重塑及右心室肥厚指标较常氧组和治疗组均明显上升（P<0.05），而治疗组和常氧组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。野生型低氧及治疗组小鼠肺组织ROS浓度均低于常氧组（P<0.05），而低氧组和治疗组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。野生型低氧组小鼠eNOS、NOX2和NOX4的mRNA表达较常氧组均显著上升（P<0.05），TEMPOL干预可逆转上述指标的过度表达。基因敲除常氧组小鼠NOX2和NOX4 mRNA表达高于同组野生型小鼠（P<0.05）；慢性缺氧后NOX4 mRNA表达较常氧组差异无统计学意义（P>0.05），NOX2 mRNA表达较常氧组显著下降（P<0.05）；治疗组NOX2 mRNA表达较低氧组进一步下降，而NOX4 mRNA表达较低氧组明显上升（P<0.05）。结论 eNOS是低氧条件下NOX2、4表达的重要调控因素，eNOS和NOX在低氧性肺血管重塑过程中可能有着重要的联系。
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CGRP通过抑制p38 MAPK/NOX4通路保护氧化应激诱导的血管内皮细胞损伤
目的：观察降钙素基因相关肽( CGRP )对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用及其对 p38 MAPK/NOX4信号通路的抑制作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株( HUVECs ),外源性给予过氧化氢( H2 O2)或血管紧张素Ⅱ( Ang Ⅱ)作为氧化刺激因素,CGRP作为保护剂处理细胞。噻唑蓝比色法( MTT)观察HU-VECs活力；流式细胞仪( FCM )观察分析HUVECs增殖指数的改变； Western Blot和Real-time PCR分别检测p38 MAPK、NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白和mRNA的表达。结果500μmol/L H2O2或100 nmol/L AngⅡ能浓度依赖性地降低HUVECs活力和增殖指数( PI)；CGRP可以显著增加HUVECs活力和及其PI。同时,H2 O2、AngⅡ均能诱导p38 MAPK磷酸化,并能上调NOX4蛋白和mRNA表达, p38 MAPK阻断剂能部分增强CGRP抑制AngⅡ或H2 O2诱导的NOX4的表达。结论 CGRP对内外源性的氧化应激损伤HUVECs的保护机制可能与抑制 p38 MAPK/NOX4信号通路有关。
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NOX-4调控PI3K信号通路参与TGF-β1诱导肺癌细胞表达Ⅰ型胶原蛋白
目的:研究NADPH氧化酶4(NOX-4)调控PI3K信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺癌细胞表达Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)的作用及分子机制.方法:体外培养人肺癌A549细胞,予TGF-β1刺激后,观察NOX家族和collagen 家族的mRNA和蛋白表达的变化,以及PI3K class Ⅰ催化亚基的表达和PI3K信号通路活化的变化;NOX-4抑制剂二亚苯基碘鎓(DPI)预先处理肺癌细胞,观察TGF-β1刺激后 collagen Ⅰ的mRNA和蛋白表达的变化以及PI3K class Ⅰ催化亚基表达和PI3K信号通路活化.结果:TGF-β1可以诱导肺癌细胞中NOX-4和colla-gen Ⅰ的mRNA和蛋白表达升高,并诱导PI3K class Ⅰ催化亚基中PIK3CD表达升高和PI3K信号通路的活化. NOX-4抑制剂DPI可以抑制TGF-β1诱导的collagen Ⅰ表达升高;抑制NOX-4 并不影响TGF-β1 诱导的PI3K催化亚基PIK3CD表达,但可以降低TGF-β1诱导PI3K信号通路的活化程度.结论:NOX-4经调控PI3K信号通路的活化参与了TGF-β1诱导肺癌细胞表达collagen Ⅰ的分子机制. TGF-β1/NOX-4/PI3K信号通路轴在肺癌细胞collagen Ⅰ的表达中发挥了调控作用.
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白花丹醌对人肝星状细胞Nox4／ROS及α－SMA生成的影响
目的：研究白花丹醌（ plumbagin ）对转化生长因子β1（ TGF－β1）刺激的体外培养人肝星状细胞（HSC－LX2）NADPH氧化酶4（Nox4）的mRNA和蛋白表达、活性氧簇（ROS）水平及α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）蛋白表达的影响。方法：体外培养HSC－LX2，随机设立空白组、TGF－β1刺激的模型组、TGF－β1＋plumbagin （2μmol／L、1．5μmol／L及1μmol／L）组；细胞与各药物共同孵育72 h后，采用RT－PCR检测细胞Nox4 mRNA的表达；原位装载探针法测定细胞内ROS的水平；Western blot检测细胞内Nox4和α－SMA的蛋白含量。结果：与模型组比较，白花丹醌作用72 h后，2μmol／L和1．5μmol／L plumbagin能明显降低HSC－LX2细胞Nox4 mRNA和蛋白的表达（ P＜0．01），下调ROS水平，降低α－SMA的蛋白表达（P＜0．01）。结论：Plumbagin可能是通过下调Nox4的表达进而降低ROS生成从而发挥其抑制HSC－LX2细胞活化的作用。
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棕榈酸通过肝细胞氧化应激反应激活炎症小体
目的：观察棕榈酸（PA）对肝细胞氧化应激反应及炎症小体产生的影响。方法（1）将正常小鼠肝细胞AML12分别用不同浓度的棕榈酸（0、0.15、0.25、0.4 mmol/L）处理；（2）将AML12细胞分为空白对照组（control组）、棕榈酸组（PA组）及棕榈酸+N-乙酰半胱氨酸组（PA+NAC组）并予以相应药物处理。24 h后检测细胞中脂肪沉积情况、细胞总ROS、线粒体来源ROS、NOX4蛋白表达、NOX4的定位以及炎症小体和IL-1β的表达。结果与control组相比，PA组细胞质中脂滴增加，细胞总ROS（12463.09±2.72 vs 6691.23±2.45，P=0.00）及线粒体来源ROS含量（64.98±0.94 vs 45.04±0.92，P=0.00）上升，NOX4、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达增加，IL-1β表达增加（1603.52±1.32 vs 2629.33±2.57，P=0.00），且发现线粒体和NOX4在细胞质中存在共定位，而抗氧化剂NAC除了能使PA诱导的ROS产生减少（7782.15±2.87 vs 5445.6±1.17，P=0.00），还可使NLRP3、ASC及caspase-1蛋白表达下降。结论棕榈酸刺激肝细胞后，可以导致脂滴在肝细胞质中大量沉积，亦可以通过线粒体和NOX4途径导致肝细胞氧化应激反应，并因此促进细胞炎症小体的激活和IL-1β的分泌。
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NOX4在高肺血流肺动脉高压大鼠中表达的意义
目的 观察NADPH氧化酶4(NOX4)在高肺血流肺动脉高压大鼠肺组织中表达的变化,探讨NOX4在高肺血流性肺动脉高压发病机制中的意义.方法 40只雄性SD大鼠随机分为对照组、分流4周组、分流8周组、分流11周组,通过腹主动脉-下腔静脉分流法建立高肺血流肺动脉高压大鼠模型,检测模型大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右室肥厚指数(RVI),RT-PCR检测大鼠肺组织中NOX4 mRNA的表达情况.结果 随着分流时间的延长,各分流组大鼠逐步出现了右室肥厚、平均肺动脉压升高等肺高压的表现,肺组织中NOX4 mRNA表达亦逐步增强.结论 高肺血流肺动脉高压大鼠肺组织中存在着NOX4的显著表达,NOX4参与了高肺血流大鼠肺动脉高压的形成.
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夹竹桃麻素对高肺血流肺动脉高压大鼠的治疗作用
目的 观察夹竹桃麻素(apocynin)对肺高血流肺动脉高压大鼠肺动脉内皮细胞活性氧(ROS)及NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白水平的影响,研究Apocynin对肺高血流肺动脉高压形成的拮抗作用.方法 将30只雄性SD大鼠随机均分为对照组、分流给药组、分流组,通过腹主动脉-下腔静脉分流法建立左向右分流肺高血流肺高压大鼠模型,测定大鼠平均肺动脉压、肺小动脉中膜厚度百分比(WT％)、肺小动脉管壁面积百分比(WA％);体外培养模型大鼠肺动脉内皮细胞,流式细胞仪检测2,7一二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH- DA)荧光探针标记的肺动脉内皮细胞活性氧水平,Western Blot法检测大鼠肺动脉内皮中NOX4蛋白的表达情况.结果 与分流组对比,分流给药组大鼠肺动脉压升高和肺血管重构情况明显改善,肺动脉内皮细胞中NOX4蛋白的表达较分流组虽无明显减少,但细胞内ROS的水平显著下降.结论 持续使用夹竹桃麻素干预,可使左向右分流肺动脉高压大鼠肺动脉内皮细胞中ROS水平明显下降,从而拮抗大鼠肺动脉高压的形成.
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缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中NOX4表达的影响
目的:观察缺氧对培养的人视网膜色素上皮细胞中NADPH氧化酶4(NOX4)表达的影响,探讨NADPH氧化酶与脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)形成的关系.方法:人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,hRPE)体外常规培养和传代,取3～6代细胞用于实验.将培养的人RPE细胞分为常氧对照组和缺氧处理组,常氧对照组用DMEM完全培养液培养细胞,缺氧处理组培养液中含有终质量浓度为200μmoL/LCoCl2,分别观察缺氧后4、6、8、l2、24h后终止.采用细胞免疫荧光染色技术及Western-blot方法鉴定人RPE细胞中NOX4的表达以及缺氧不同时间对NOX4表达的影响.结果:常氧对照组及缺氧处理组人RPE细胞生长良好,形态呈梭形.缺氧处理组细胞的形态及排列方式与空白对照组相比无明显改变.免疫荧光染色显示,常氧对照组RPE细胞内有少量的NOX4表达,细胞质呈绿色荧光,细胞核呈蓝色荧光;缺氧处理后NOX4的表达量增加,一直持续到缺氧后期;Western-bolt显示缺氧条件下人RPE细胞中NOX4的表达明显增加,与缺氧时间呈正比,与常氧对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05):结论:NADPH氧化酶在人RPE细胞中有表达,缺氧条件下NOX4的表达显著提高,且与时间呈正比.提示NADPH氧化酶可能在脉络膜新生血管形成中发挥重要调节作用.
关键词： 人视网膜色素上皮细胞 NADPH氧化酶4 脉络膜新生血管
