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缺氧诱导因子1相关肽对化学妊醣引起的PC12细胞损伤的保护作用
目的:研究氯化钴模拟化学缺氧条件下,缺氧诱导因子1相关肽(BW8)对PC12细胞损伤的影响.方法:氯化钴模拟缺氧后,给予不同浓度BW8,观察细胞生存率的变化,并测定细胞内谷胱苷肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果:BW8可以抑制氯化钴诱导的PC12细胞存活率下降,且作用呈浓度依赖性;用尼莫地平预处理的PC12细胞存活率也显著提高,BW8的作用程度与尼莫地平接近;用终浓度为125μmol·L -1 的氯化钴处理细胞,可以显著降低细胞内GSH含量及SOD活力,而BW8可以浓度依赖性升高SOD活力,明显提高GSH含量.结论:多肽BW8对于化学缺氧引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用.
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氯化钴诱导化学缺氧对N9小胶质细胞的损伤作用及机制
目的 研究氯化钴(CoCl2)对N9小胶质细胞的损伤作用及机制.方法 不同剂量CoCl2处理N9小胶质细胞后,XTT法检测细胞活力;倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;硫代巴比妥酸(TBA)显色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期变化.结果 CoCl2(50～1 000 μmol·L-1)处理24 h后,细胞活力明显降低(P＜0.01),且呈剂量依赖性.细胞形态发生明显改变,部分细胞出现皱缩、破碎,细胞密度减小,随CoCl2剂量增大,细胞形态损伤程度进一步恶化.MDA含量检测结果显示,氯化钴处理后,细胞上清液中MDA含量明显增多(P＜0.05).Hoechst 33258染色结果显示,氯化钴处理组的细胞凋亡比例较对照组明显增多(P＜0.01),且比例随CoCl2剂量增大而增多.细胞周期检测结果显示,CoCl2可使细胞周期阻滞于G1/G0期.结论 CoCl2可呈剂量依赖性损伤 N9小胶质细胞,机制与诱导细胞凋亡、引发氧化应激反应及细胞周期阻滞有关.
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α-倒捻子素耐缺氧作用的初步研究
目的 研究α-倒捻子素对缺氧小鼠的作用.方法 小鼠给予α-倒捻子素一定时间后,采用亚硝酸盐建立缺氧模型,考察小鼠的生存时间.结果 α-倒捻子素高剂量条件下可以显著延长小鼠的生存时间.结论 α-倒捻子素具有一定的耐化学缺氧作用,可以用于缺氧、缺血性损伤的保护,具体作用机制有待进一步研究.
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神经细胞化学缺氧预处理模型的建立
目的 建立体外培养神经细胞的化学缺氧预处理实验模型.方法 分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧组、化学缺氧预处理组.用MTT法筛选合适的化学缺氧预处理和化学缺氧浓度.然后,分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧组(250 μmol/L CoCl2,24 h)、化学缺氧预处理组(75 μmol/L CoCl2,1.5 h,常氧3 h后,250 μmol/L CoCl2,24 h).实验终点测乳酸脱氢酶释放率,并用MTT法检测细胞活力,以此来评价化学预缺氧对神经细胞化学缺氧的保护作用.结果 化学缺氧预处理组细胞较化学缺氧组细胞存活率高、乳酸脱氢酶释放率减少,说明用CoCl2化学预缺氧可保护神经细胞对化学缺氧产生耐受.结论 建立了简单易行、重复性好,可进一步应用于阐明缺氧预处理保护机制的神经细胞化学缺氧预处理实验模型.
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缺氧对hBMSCs和胎盘来源MSCs增殖的影响
目的 比较hBMSCs和人胎盘基蜕膜MSCs(human placental dccidua basalis-MSCs,hPDB-MSCs)在化学缺氧条件下的增殖情况,为寻找组织工程新的种子细胞提供理论依据. 方法 采用密度梯度离心法分离培养hBMSCs与hPDB-MSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物;COCl2建立化学缺氧模型,MTT法检测两种细胞在不同CoCl2浓度(0、50、75、100、125、150、175、200μmol/L)和不同时间(6、12、24、48、72和96 h)的增殖情况. 结果 流式细胞仪检测显示hPDB-MSCs与hBMSCs均表达CD9、CD29、CD44、CD105、CD106、人类白细胞抗原ABC(human leucocyte antigen ABC,HLA-ABC),不表达CD34、CD40L和HLA-DR;但与hBMSCs相比,hPDB-MSCs阶段特异表达的胚胎抗原1(stage-specific embryonic antigen 1,SSEA-1)、SSEA-3、SSEA-4、肿瘤排斥抗原(tumor rejection autigen, TRA)-1-60、TRA-1-81表达更高.化学缺氧12 h内,hBMSCs与hPDB-MSCs增殖均被抑制,12 h后均能促进增殖;与对照组比较,hBMSCs经150 μmol/L CoCl2作用24 h出现显著增殖(P<0.05),hPDB-MSCs在75μmol/LCOCl2作用12 h后出现显著增殖(P<0.05). 结论 与hBMSCs相比,hPDB-MSCs表达更高的胚胎干细胞特有表面抗原,同时对化学缺氧所致的增殖影响更为敏感,可能成为一种新的组织工程种子细胞来源.
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姜黄素下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应
目的 研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制.方法 100 μmol/L CoCl2处理U87细胞不同时间(1、3、6、12、24h),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测炎症因子白细胞介素-1p(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA表达变化.100 μmol/L CoCl2处理U87细胞12h制备化学缺氧模型,同时给予1、5和10 μmol/L姜黄素处理,对照组(不添加CoC12)和模型组给予等体积DMSO;qRT-PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达变化;Western Blotting法检测NF-κB/P65蛋白磷酸化水平及核转位.结果 CoC12上调U87细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平并呈时间相关性,炎症反应在约12h达到高峰.与模型组比较,姜黄素显著下调炎症因子IL-1p、IL-6和TNF-α的mRNA水平,5和10 μmol/L浓度组差异显著(P＜0.05);显著下调p65的磷酸化水平(P＜0.05);导致细胞核内NF-κB/p65蛋白显著减少、细胞质中NF-κB/p65蛋白显著增加(P＜0.05).结论 姜黄素通过下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应.
