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超高效液相色谱法测定人血白蛋白分子大小分布方法的建立
目的 建立人血白蛋白(human serum albumin,HSA)产品分子大小分布(多聚体含量)的超高效液相色谱(ultra-performance liquid chromatography,UPLC)分析测定方法.方法 采用Waters ACQUITYUPLC系统、Waters TUV紫外检测器、ACQUITY UPLC PROTEIN BEH SEC色谱柱,以磷酸盐缓冲液作为流动相、0.6 mL·min-1流速、TUV紫外280 nm测定人血白蛋白分子大小分布.稀释制备不同质量浓度(0.5～20 mg·mL-1)的HSA样品分析不同进样浓度下其各组分百分含量变化、线性关系等,分子大小分布结果按照面积归一化法计算.在佳进样浓度范围内,选择适宜浓度稀释人血白蛋白国家参考品并用UPLC测定进行方法学确认.用UPLC和HPLC方法扩展测定20批人血白蛋白样品,进行方法一致性比对和再确认.结果 UPLC测定人血白蛋白多聚体保留时间为1.469 min,二聚体保留时间为1.972 min,单体峰保留时间为2.267 min.二聚体与单体分离度为2.20,单体峰拖尾因子1.18.11个进样质量浓度条件下(0.5～20 mg·mL-1)人血白蛋白样品各组分包括多聚体、二聚体、单体峰的峰高及峰面积与进样浓度之间均呈良好线性关系,线性相关系数平方均大于0.997 0;不同浓度下多聚体峰面积百分比相对标准偏差RSD分别为0(n =3,10 mg·mL-1)和0.10％ (n =3,12 mg·mL-1)和0.10％ (n =3,16mg· mL-1);人血白蛋白样品在10～16 mg·mL-1(上样总量100～160 μg)内各组分峰面积百分比及与进样浓度的线性关系均保持相对稳定;HPLC测定人血白蛋白国家参考品多聚体峰面积百分含量为5.58％,UPLC平行测定该国家参考品多聚体含量均值为5.62％ (n=10),两者一致且结果均符合国家参考品的质量控制范围;UPLC测定人血白蛋白国家参考品多聚体峰面积百分比RSD为0.40％(n=10);HPLC与UPLC方法平行测定的20批来自国内外7家企业的人血白蛋白样品(12mg·mL-1下)多聚体峰面积百分含量结果证实2种方法无显著性差异(P＞0.05),2种方法的相关系数为0.996 0 (n =20).结论 UPLC测定人血白蛋白产品的多聚体含量准确性和重复性良好,相比于传统HPLC方法新建UPLC方法大幅节省分析时间,更为准确、快速、简便,可实现高通量的人血白蛋白分子大小分布测定.
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高浓度静注人免疫球蛋白制品稳定性的研究
目的 考察高浓度静注人免疫球蛋白制品的稳定性.方法 以组分Ⅱ+Ⅲ为原料,经过溶解、辛酸沉淀,Capto-Q层析,Macrocap-Q层析,收集流穿液,经超滤,浓缩,制备高浓度静注人免疫球蛋白(蛋白浓度为10％),进行制品处方的筛选和稳定性试验,检测制品的外观、热稳定性及分子大小分布,并与传统低温乙醇法制备的静注人免疫球蛋白(蛋白浓度为5％)比较.结果 高浓度静注人免疫球蛋白外观、热稳定性、分子大小分布均符合国家药典要求,分子大小分布明显优于静注人免疫球蛋白.结论 高浓度静注人免疫球蛋白制品具有更好的稳定性.
关键词： 高浓度静注人免疫球蛋白 稳定性 分子大小分布
