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3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
目的观察3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,寻找CK2的抑制剂.方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度3,6-二羟黄酮对CK2活性的影响,并通过酶的动力学分析其抑制作用机制.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的[32P]放射活度来检测.结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致.3,6-二羟黄酮对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为13.93 μmol·L-1;进一步分析,它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为10.67μmol·L-1;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为17.34 μmol·L-1.结论3,6-二羟黄酮是一种重组人蛋白激酶CK2的抑制剂.重组人CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
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3,6-二羟黄酮对HL-60细胞生长增殖的影响
目的 观察3,6-二羟黄酮对HL-60细胞的影响.方法 分别用台盼蓝拒染观察药物对细胞的毒性作用,流式细胞术、Hoechst 33258/PI荧光双染和琼脂糖凝胶电泳观察药物对细胞周期的影响以及凋亡情况.结果 3,6-二羟黄酮对HL-60细胞具有明显地细胞毒作用,呈一定的时效性;流式细胞术、荧光双染和琼脂糖凝胶电泳实验,发现了典型的凋亡细胞,且随药物浓度的增加,凋亡细胞数明显增加;然而统计学分析发现3,6-二羟黄酮并没有引起HL-60细胞周期的变化.结论 3,6-二羟黄酮能明显地抑制HL-60细胞的增殖,并能引起细胞的凋亡.
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3,6-二羟黄酮对乳腺癌细胞株MCF-7细胞生长增殖的影响
目的 观察3,6-二羟黄酮对乳腺癌细胞株MCF-7细胞的影响.方法 分别用台盼蓝拒染观察药物对细胞的毒性作用,流式细胞术观察药物对细胞周期的影响.结果 3,6-二羟黄酮对MCF-7细胞具有明显地细胞毒作用,呈一定的时效性;流式细胞术药物作用MCF-7 48h后能引起其细胞周期发生变化.结论 3,6-二羟黄酮能明显地抑制MCF-7细胞的增殖,并能引起其细胞周期的变化.
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3,6-二羟黄酮对乳腺癌细胞MDA-MB-453移植瘤生长和miRNAs表达谱的影响
目的 观察3,6-二羟黄酮对HER-2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453移植瘤生长和miRNA表达谱的影响.方法 以18只雌性BALB/c裸鼠建立乳腺癌MDA-MB-453细胞移植瘤模型,按照完全随机设计原则平均分入对照组和高、低剂量作用组,移植后72 h开始给予各处理因素,低、高剂量组分别以10、20 mg/( kg·d)的3,6-二羟黄酮灌胃,对照组以等量的生理盐水灌胃.每4天测量1次肿瘤体积和裸鼠体质量,处理28 d后取材,提取肿瘤组织总RNA并分离miRNA,样品采用PolyA Polymerase加尾后利用T4RNA连接酶将带有生物素标记的信号分子与之连接,进而与微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析获得miRNAs表达谱.结果 高、低剂量组移植瘤生长速度低于对照组,肿瘤体积分别在处理12 d和16 d后显著低于对照组(P＜0.05)；处理24d后高、低剂量组移植瘤质量均显著低于对照组(P＜0.01).miRNAs表达谱分析显示,高剂量组瘤组织miRNAs表达与对照组相比显著上调的有12个,显著下降的有15个.结论 3,6-二羟黄酮可显著抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-453移植瘤的生长并影响其miRNAs表达谱.
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3,6-二羟黄酮降低白血病细胞HL-60抗氧化酶活性并影响MAPKs信号通路
目的 观察3,6-二羟黄酮对白血病细胞HL-60抗氧化酶活性及MAPKs信号通路的影响,探讨其抗肿瘤作用分子机制.方法 采用CASY-TT亚流式细胞分析技术测定3,6-二羟黄酮对白血病HL-60细胞存活率的影响;化学比色法测定3,6-二羟黄酮作用HL-60细胞后,细胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px的活性变化;Western blot检测胞内ERK、p38MAPK及JNK蛋白磷酸化水平变化.结果 3,6-二羟黄酮显著降低HL-60细胞存活率,其作用呈剂量和时间依赖性;20 μmol/L 3,6-二羟黄酮作用于HL-60细胞,胞内抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高(P<0.05);Western blot检测结果表明,20 μmol/L 3,6-二羟黄酮作用HL-60细胞2、8、24 h,P-ERK蛋白水平明显降低(P<0.01)、P-p38MAPK和P-JNK的蛋白水平则显著升高(P<0.01).结论 3,6-二羟黄酮可显著降低HL-60细胞内抗氧化酶活性,增加胞内氧化应激压力,并由此影响MAPKs信号通路,这可能是其诱导HL-60细胞凋亡和增殖抑制的重要分子机制.
