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含组织激肽释放酶1表达载体诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化
目的 探讨组织激肽释放酶1(KLK1)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的影响.方法 选取2015年3-7月购买的大鼠BMSCs,将大鼠BMSC细胞分为3组即正常组、组织激肽释放酶1组、5-Aza组.采用RT-PCR分别对诱导培养后的大鼠BMSCs进行心肌细胞特异性蛋白Actin、c-TnI和Desmin的检测,并用Western blot免疫印迹分析c-TnT蛋白表达量.结果 RT-PCR检测显示,5-Aza诱导的BMSCs(1.964±0.805)在心肌特异性蛋白Actin RNA、c-TnI RNA和Desmin RNA的表达均高于空白组(1.000±0.000)(P<0.05),KLK1诱导组(2.633±0.582)以上蛋白的RNA表达量又显著高于5-Aza诱导组(P<0.05).Western blot结果显示,5-Aza诱导组c-TnT蛋白的表达(0.799±0.101)高于空白组(0.112±0.001)(P<0.001),KLK1诱导组(1.294±0.134)显著高于5-Aza组.差异有统计学意义(P<0.001).结论 5-Aza能有效使BMSCs向心肌样细胞诱导分化,KLK1也能诱导BMSCs向心肌样细胞分化.KLK1较5-Aza诱导的BMSCs在心肌细胞特异性蛋白RNA表达,心肌特异性蛋白T表达其心肌特异性更为突出.
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组织激肽释放酶1转染骨髓间充质干细胞的病毒感染复数选择
背景：血管舒缓素即组织激肽释放酶1，是组织激肽释放酶-激肽系统重要组成部分之一。有研究表明血管舒缓素通过促进血管新生，抑制心肌炎症产生等发挥其对心血管系统的保护作用，但并未从干细胞诱导分化方面进行探讨。目的：实验利用已构建的腺病毒载体，将其携带的血管舒缓素基因转染到大鼠骨髓间充质干细胞上，观察其是否成功转染及转染率如何。方法：以腺病毒作为载体，将目的基因血管舒缓素转染到大鼠骨髓间充质干细胞上，并采用荧光显微镜、四甲基偶氮唑盐法和流式细胞技术观察病毒对细胞的转染效果，以确定佳的病毒感染复数。结果与结论：荧光显微镜下观察到腺病毒携带的血管舒缓素目的基因成功转染到大鼠骨髓间充质干细胞上；流式细胞仪结果显示转染率跟病毒感染复数值的大小有关系，当病毒感染复数为150时，转染率为80.8%；四甲基偶氮唑盐法结果提示，病毒感染复数为200时，细胞生长受到明显的抑制。结果证实，腺病毒介导的血管舒缓素能成功转染到大鼠骨髓间充质干细胞上，且佳的病毒感染复数为150。
