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肝癌临床标本原位移植模型的建立及其影像学评估
目的 建立基于临床肝癌手术标本的原位移植(patient-derived orthotopic xenograft PDOX)模型,研究近红外荧光(Near-infrared fluorescence,NIRF)活体成像和PET/CT在模型评估中的应用.方法 将临床新鲜肝癌手术标本接种于重度免疫缺陷NPG小鼠皮下建立肝癌PDX模型,通过组织形态观察、STR分型检测和免疫组化分析对PDX模型进行评估.进一步将PDX模型肿瘤组织进行裸鼠肝原位移植建立PDOX模型,注射近红外荧光染料IR-783,通过小动物活体成像检测肿瘤的发生;尾静脉注射18F-FDG,通过小动物PET/CT观察确认肝原位肿瘤的生长.结果 STR分型结果表明PDX肿瘤的人源性特征,组织形态观察和免疫组化检测表明PDX肿瘤保持了原发肿瘤病理学特征;近红外荧光活体成像检测到肝脏肿瘤的发生;PET/CT可清晰观察到小鼠肝脏部位18F-FDG分子探针富集.结论 成功建立了肝癌PDOX模型,通过小动物活体成像和PET/CT影像技术可对该模型进行评估,为肝癌的治疗和发病机制研究提供了良好的动物模型.
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七甲川花菁染料作为肿瘤靶向和光动力治疗载体的研究进展
七甲川花菁近红外荧光染料(NIRF)可直接被肿瘤细胞特异性吸收,具有肿瘤靶向性.与化疗药物偶联后,该类染料可通过血脑屏障将药物转运至肿瘤部位,不仅可以减少化疗药物使用剂量,降低药物的毒副作用,也可通过近红外荧光成像实现对肿瘤治疗的实时监控.七甲川花菁染料所展示的线粒体毒性和光敏特性,可直接杀死肿瘤细胞,抑制肿瘤新生血管的形成.通过纳米包裹,能够显著增强该类染料的肿瘤靶向能力,实现实时跟踪药物释放情况.七甲川花菁染料特异性识别肿瘤细胞的能力与有机阴离子转运肽的作用密切相关,缺氧和线粒体膜电位也参与了染料吸收的调控.这些发现有利于将近红外荧光染料应用于肿瘤的靶向治疗.
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近红外七甲川菁染料复合物 PZ -1009在卵巢癌成像的初步探索
目的：初步探索近红外荧光染料复合物PZ-1009在肿瘤成像中的应用价值。方法成功建立裸鼠肿瘤模型后，尾静脉注射复合物（10 nmoL/20 g），采用活体显像仪在不同时间点进行图像采集，在荧光强度高时间点处死裸鼠，取肿瘤组织及重要器官成像。结果注射1h后肿瘤部位即出现强烈的荧光信号，采用图像软件测得6 h时信号强度大，直至48 h肿瘤部位仍可见少量荧光信号，且肿瘤任何时间点的荧光信号强度都高于正常部位（ P＜0．05）；注射染料后6 h处死裸鼠，取肿瘤及主要器官进行显像，观察到除肠道外各器官都有较低荧光信号，但肿瘤仍为强。结论近红外七甲川菁染料MHI-148与其他物质耦合后的新物质PZ-1009仍具有明显的肿瘤靶向性，为后期的多模态探针制备奠定了良好的基础。
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兔外周血内皮祖细胞的多功能分子影像探针标记及其在肿瘤模型中的活体示踪
目的:构建多功能分子影像探针--共轭化合物-1,体外标记兔外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs),并进行体内细胞示踪.方法:利用磁共振T1对比剂Gd、近红外荧光染料Cy5-5以及罗丹明合成共轭化合物-1,体外标记EPCs,采用四氮噻唑蓝(MTT)比色实验评价不同浓度bCD-PLL标记EPCs后对细胞增殖力的影响;流式细胞术分析对细胞周期的影响及不同孵育时间细胞荧光标记率.将标记共轭化合物-1的EPCs移植于乳腺癌荷瘤鼠模型,通过磁共振成像和近红外光学成像对移植细胞进行活体示踪.结果:共轭化合物-1的标记对EPCs增殖活性及细胞周期无明显影响;2 μmol·L-1共轭化合物-1可有效标记细胞.磁共振成像和近红外光学成像表明标记的EPCs在移植后5 d肿瘤信号出现明显改变.结论:共轭化合物-1能有效标记兔外周血EPCs,细胞活力不受影响.两种活体成像均表明经标记的EPCs移植于乳腺癌荷瘤鼠模型后能够归巢至肿瘤组织,显示出共轭化合物-1的成像优越性.
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纳米金及其标记细胞色素P450的近红外荧光性质的研究
目的 研究纳米金及其标记细胞色素P450在811 nm近红外荧光光谱的特性,并对其荧光增强机理进行深入的探讨.方法 用不同量的柠檬酸三钠在煮沸搅拌条件下还原氯金酸制得不同粒径的纳米金,利用纳米金易与蛋白结合的性质标记细胞色素P450.用紫外-可见吸收光谱仪、投射电子显微镜以及荧光光谱仪,研究纳米金及其标记细胞色素P450的光谱性质.结果 透射电子显微镜显示随着还原剂柠檬酸钠加入量的增加,形成的纳米金的颗粒逐渐减小.紫外-可见吸收光谱显示大颗粒纳米金只在250 nm处有吸收,当纳米金粒径的减小至21 nm时,在525nm处出现新的吸收峰.荧光光谱仪显示以538 nm为激发波长,纳米金在811 nm处有荧光发射峰,且标记蛋白后荧光强度增加.结论 通过对纳米金近红外荧光性质的研究,可利用纳米金的近红外荧光性质作为探针检测细胞色素P450.
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近红外荧光标记-免疫磁珠偶联法定量检测TB-LAM抗原
目的 基于标记免疫分析的原理,建立近红外荧光染料-免疫磁珠偶联法定量检测结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)的方法.方法 以近红外荧光染料标记靶向于LAM的单克隆抗体,靶向于LAM的多克隆抗体包被在纳米磁珠表面.采用双抗体夹心法,磁性分离结合物和游离物,采用便携式高灵敏度低噪声激发式荧光检测仪检测磁性结合物的荧光强度,从而检测待检样品中LAM含量.结果 该方法的检测线性范围为1 ng/ml～625 ng/ml,低检测限量为0.5 ng/ml;10 ng/ml水平加样回收率为93％,50 ng/ml水平加样回收率为109％;批间CV为6.5％,批内CV为4.1％.临床样本检测LAM特异度为92.9％,灵敏度为90.0％.结论 本方法检测LAM是结核感染实验室诊断的有效指标.
关键词： 近红外荧光 免疫磁珠 结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖 -
近红外荧光成像在头颈部鳞癌手术治疗中的应用
近红外荧光(near-infrared fluorescence,NIRF)以其非创伤性、实时、分辨率高等特点,被广泛应用于生物和医学领域,尤其在引导肿瘤手术方面具有广阔的发展前景.本文就NIRF成像和其在头颈部鳞癌手术治疗过程中的发展现状进行一综述.
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近红外荧光标记-免疫磁珠偶联法定量检测结核分枝杆菌ESAT-6蛋白
目的：建立定量检测结核分枝杆菌早期分泌抗原靶‐6（ESAT‐6）的近红外荧光标记‐免疫磁珠偶联法。方法以近红外荧光染料（Dylight 800）标记靶向ESAT‐6的单克隆抗体，靶向ESAT‐6的多克隆抗体包被在纳米磁珠表面。采用双抗体夹心法，磁性分离结合物和游离物，采用便携式高灵敏度低噪声激发式荧光检测仪检测磁性结合物的荧光强度，从而检测待检样品中ESAT‐6水平。结果该方法的检测线性范围为2．4～750．0 ng／mL ，低检测限为0．48 ng／mL ；10 ng／mL水平加样回收率为96％，50 ng／mL水平加样回收率为95％；批间变异系数（CV）为5．8％，批内 CV为4．3％。该方法检测胸腔积液标本ESAT‐6的特异度为80％，灵敏度为95％。结论该方法检测ES A T‐6的线性范围广、灵敏度高、稳定性好。
关键词： 近红外荧光 免疫磁珠 结核分枝杆菌早期分泌抗原靶-6 定量检测 -
可见光和近红外荧光分光融合成像外科手术导航系统的研制
本文提出研制一种在开放手术过程中无创、实时、定位的外科手术光学导航系统.系统设计依据近红外荧光分子成像原理,采用活体荧光激发技术以及多通道分光摄像技术和图像融合软件技术.研制过程中将可见光和近红外光环形LED激发光源、多通道带通滤光片、分光摄像2 CCD光电传感器和计算机系统技术集成,成功研制出一种新型外科手术光学导航系统.该系统在活体注射近红外荧光显影剂时,能够显示同一部位、同一时刻手术野组织表面的解剖学图像和近红外荧光功能图像.解决了医生在术中肉眼难以识别淋巴管、淋巴结、肿瘤边缘的技术问题,实现实时、无创的外科手术导航,有效引导外科医生切除肿瘤组织,显著提高手术成功率.该项技术已获得国家专利,专利号为ZI.2011 1 0292374.1.
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肽段连接的近红外荧光量子点对人颊鳞癌BcaCD885细胞侵袭和转移能力的影响
目的 研究肽段连接的近红外荧光量子点(QDs)对人颊鳞癌BcaCD885细胞的生长、侵袭、黏附和趋化运动能力的影响.方法:1)用表面连接穿膜肽段大发射波长为800nm的近红外荧光量子点(QD800)标记BcaCD885细胞(BcaCD885/QD800),用流式细胞仪检测QD800对BeaCD885细胞的标记率,用激光扫描共聚焦显微镜观察QD800在BcaCD885细胞内的分布情况;2)用不同浓度的QD800与BcaCD885细胞共培养,观察QD800对BcaCD885细胞生长的影响;3)用Transwell侵袭小室法和冲刷实验,比较BcaCD885/QD800和BcaCD885细胞侵袭、黏附和趋化运动能力的变化.结果:1)QD800对BcaCD885细胞标记后6h时的标记率为94.07%,QD800主要分布在细胞质内;2)不同浓度的QD800均未影响BcaCD885细胞的生长情况;3)BcaCD885/QDS00和BcaCD885细胞的侵袭、黏附和趋化运动能力无显著性差异(P>0.05).结论:用肽段连接的近红外荧光量子点标记BcaCD885细胞后不影响其生长、浸润和转移能力,为利用量子点进一步在活体条件下非侵入的体内肿瘤细胞成像和示踪研究提供了科学依据.
