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EdU及流式细胞术检测FRK对脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究FRK是否调控胶质瘤细胞的增殖与凋亡.方法应用EdU及流式细胞术检测FRK是否影响胶质瘤U251细胞增殖、凋亡.结果 EdU结果显示:过表达FRK后脑胶质瘤U251细胞增殖减少约60%,流式细胞仪检测发现过表达FRK后脑胶质瘤细胞U251细胞凋亡增多约120%.结论FRK可能调控脑胶质瘤细胞的增殖和凋亡.
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FRK通过抑制ERK信号通路对脑胶质瘤细胞增殖作用的研究
目的 研究FRK是否通过抑制ERK信号通路进而影响脑胶质瘤细胞的增殖.方法 应用PolyJetTM将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞中,Western blot(WB)检测转染效率及P-ERK、ERK蛋白水平的变化,EDU实验观察脑胶质瘤细胞增殖能力的变化;用ERK抑制剂PD98059处理U251细胞,WB检测细胞中FRK、P-ERK、ERK的蛋白水平,EDU实验检测脑胶质瘤细胞增殖能力的变化.结果 WB检测显示FRK质粒转染成功,过表达FRK使U251细胞增殖能力降低.过表达FRK降低了P-ERK的蛋白水平,但对ERK总蛋白水平无影响.与对照组相比,ERK抑制剂PD98059组P-ERK的蛋白水平明显降低,但对FRK的蛋白水平无明显影响.ERK抑制剂PD98059处理后,脑胶质瘤U251细胞增殖能力明显降低.结论 FRK可以通过抑制ERK的活性,从而降低脑胶质瘤细胞的增殖.
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FRK 通过调节 EGFR-Y1173磷酸化促进脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究
目的：研究FRK是否通过调节表皮生长因子受体（EGFR）-Y1173磷酸化促进胶质瘤细胞的凋亡。方法应用PolyJetTM将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞中，western blot（WB）检测质粒转染效果及EGFR蛋白水平和EGFR-Y1173磷酸化水平的变化，流式细胞术检测脑胶质瘤细胞凋亡的变化；转染EGFR （WT）、EGFR（Y1173F）质粒，或共转FRK和EGFR（WT）、EGFR（Y1173F）质粒，流式细胞术检测脑胶质瘤U251细胞凋亡的变化。结果成功将FRK质粒转染入脑胶质瘤U251细胞，过表达FRK促进脑胶质瘤U251细胞的凋亡。过表达FRK增加EGFR-Y1173磷酸化水平，而对EGFR蛋白水平无影响。过表达EGFR（ WT）、EGFR（Y1173F）质粒，细胞凋亡均减少，分别减少了25％和75％。 WB结果显示，共转FRK和EGFR（WT）、EGFR（Y1173F）质粒成功；流式细胞术结果显示，与对照组相比，过表达FRK促进了细胞凋亡，EGFR抑制了细胞凋亡，且转染 EGFR （ Y1173F ）质粒组的作用比转染 EGFR （ WT ）的效果更明显。此外，转染 EGFR （ Y1173F）质粒可逆转过表达FRK对胶质瘤细胞的促凋亡作用。结论 FRK可以通过促进EGFR-Y1173磷酸化从而调节胶质瘤细胞的凋亡。
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FRK 通过 N-cadherin／E-cadherin 途径抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移
目的：探讨抑癌基因FRK（ Fyn-related kinase ）影响胶质瘤细胞侵袭和迁移的机制。方法将真核表达质粒pcDNA3．0-FRK和对照质粒pcDNA3．0转入人胶质瘤U25l细胞中，western blot技术检测FRK/N-cadherin/E-cadherin蛋白表达，细胞划痕试验检测细胞迁移能力， Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果与对照组比较，转染pcDNA3．0-FRK质粒24 h后U25l细胞侵袭能力下降47％、迁移能力下降64％，差异均有统计学意义（P ＜0．01）；转染 pcDNA3．0-FRK 可以明显增加 N-cadherin/E-cadherin 的表达。结论FRK可以通过增加N-cadherin/E-cadherin的表达，进而抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移能力。
关键词： FRK N-cadherin E-cadherin胶质瘤 侵袭 迁移 -
Frk及Rb信号转导通路与细胞周期及肿瘤增殖的关系
细胞周期调控异常是细胞癌变及肿瘤发生的重要原因.视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)信号转导通路是细胞周期G1/S期调控点中一条关键的信号转导途径,与多种肿瘤的发生和发展有关.近年来,多项研究表明Src家族在众多信号转导通路中起着关键作用,影响着细胞的增殖、分化、迁移和存活,与肿瘤的发生发展、转移及预后密切相关,是目前肿瘤研究的热点及重点.在Src家族中有一特殊蛋白Frk(Fyn-related kinase),与其他Src家族成员不同的是,Frk与细胞周期调控密切相关,发挥着独特的肿瘤抑制功能.本文着重描述Frk与Rb信号转导通路在肿瘤发生、发展中的作用及相关蛋白的分子结构基础,并对二者相互关系等方面的研究进展进行回顾和总结.
