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鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定
目的 建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法.方法 通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化.超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白.通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定.结果 本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯.与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异.研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.结论 为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础.
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人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质双向凝胶电泳分析
目的:研究人鼻咽癌细胞系HONE1的蛋白质表达特征.方法:抽提鼻咽癌细胞系HONE1总蛋白,双向凝胶电泳(2-DE)分离、银染显色,用凝胶成像仪和PDQUEST软件获取HONE1总蛋白的2-DE图像;根据获得的2-DE凝胶图像,从胶上切取分辨良好、染色较浓的蛋白质点,用胰蛋白酶原位水解,所获酶解肽段经基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定Mr;以测得的肽段Mr为肽质量指纹(PMF),通过PepIdent软件搜索SWISS-PROT和TrEMBL数据库而识别该点对应的蛋白质.结果:建立了双向凝胶电泳分离总蛋白、质谱鉴定银染蛋白质点的方法,并鉴定出人鼻咽癌细胞系HONE1中表达较强的10个点相应的蛋白质.结论:本研究为建立人鼻咽癌细胞HONE1的2-DE参考图和蛋白质数据库提供了有用的基础性研究资料,为进一步识别鼻咽癌特异性的蛋白质奠定了实验基础.
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日本血吸虫SIEA28kDa分子抗原的二维凝胶电泳分析
目的分析鉴定日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原(SIEA)28kDa抗原组分.方法用高效液相离子交换法对电泳纯SIEA28kDa抗原组分进一步分离纯化,对获得的色谱纯SIEA28kDa抗原组分进行二维凝胶电泳分析.结果SIEA经双向凝胶电泳分离、银染后获得的SIEA-2D图谱蛋白斑点以pI 3～7和Mw14～66 kDa范围多.进一步经图象采集、PDQuest 2D软件分析SIEA双向电泳图谱,计算在相同的设定值条件下获取的蛋白质斑点数,测得SIEA-2D电泳图谱平均为(948±89)个蛋白质斑点数.电泳纯SIEA28kDa抗原组分用高效液相离子交换法纯化后,280、220 nm波长色谱图均为一个两侧对称、光滑的高峰曲线,色谱洗脱液对其活性光密度图也为一个两侧对称、光滑的高峰曲线.二维凝胶电泳银染色可见一个显色饱和度高的蛋白质圆斑,免疫印迹分析为一个显色饱和度高的单一圆斑.结论色谱纯SIEA28kDa抗原组分为单一分子,其等电点为5.7.
关键词： 日本血吸虫 SIEA28kD抗原 二维凝胶电泳 蛋白质鉴定 -
基于亲和探针的药物靶点鉴定技术研究进展
药物靶点的鉴定和相关研究在药学研究领域具有重要的理论指导意义和实用价值.利用亲和探针偶联靶分子的方法是目前发现药物靶点的主要手段之一.该方法可从分子水平发现药物的作用靶点,从而对药物的分子作用机制提供细胞水平的直接证据.从DNA和小分子药物探针的构筑和应用入手,对近些年鉴定DNA损伤识别蛋白的研究进展进行了较为详尽的讨论,并简要介绍目前探索小分子药物作用靶点的主流技术.作为亲和偶联鉴定药物作用靶点方法的重要组成部分,亲和探针设计的合理性关系到方法本身的可操作性以及鉴定结果的可靠性.从多个角度对DNA探针和小分子药物探针的设计经验进行了较为系统的总结,例如经典的亲和纯化分离方法,以及更为高效的光激发共价偶联技术等.这些方法和思路为探索DNA损伤相关蛋白质的功能以及小分子药物的细胞作用机制提供了丰富的研究工具,有助于从分子水平理解药物的作用机制.
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白质组学研究技术的现状及进展
蛋白质组学研究的核心技术是蛋白质成分的分离和鉴定.通过鉴定蛋白质组结构、功能及其各蛋白质间的相互作用关系,终实现蛋白质组表达模式和功能模式的研究,其表达模式的鉴定技术主要有以质谱为核心的技术、蛋白质微测序和氨基酸组成分析等.现综述如下.
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蛋白质组学研究方法学进展
蛋白质组学是针对蛋白质组研究的一门新兴学科,近年来发展迅速,其相应方法学也取得很大进展.文章介绍了近年来差异表达蛋白质研究的方法学进展,包括双向凝胶电泳技术、凝胶内差别电泳、同位素亲和标签技术、蛋白质芯片和蛋白质组的多维液相分离-质谱分析等方法.
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蛋白质组中蛋白质鉴定技术的研究近况
蛋白质组学的核心内容之一就是蛋白质的鉴定,基于双向凝胶电泳的图象分析技术可以对组织细胞蛋白质表达的量、表观分子量和等电点等特性进行初步的鉴定,但是对于蛋白质的结构和功能必须借助其它技术手段.目前逐渐形成了以生物质谱为核心的鉴定技术,蛋白质微测序和氨基酸组成分析在表达模式分析中也有应用.关于蛋白质组功能模式研究目前可用的方法有酵母双杂交、噬菌体展示、生物传感芯片质谱、蛋白质工程中的定点突变技术等.这些技术对推动蛋白质组学的发展起了一定作用,但是单一技术通常不能确切的鉴定某一蛋白质,常需联合应用几种技术才能准确的鉴定蛋白质.
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骨科的蛋白质组学研究技术与进展
随着人类后基因组时代的到来,人们认识到仅通过DNA序列来解释生物功能有明显不足.而蛋白质是基因表达的终产物,为疾病发生、发展、转归的执行者和参与者,直接对其进行研究可以更加直观地了解疾病进程.
