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大叶蛇葡萄蛋白质组双向电泳分析＊
目的：利用双向电泳法研究大叶蛇葡萄活性成分蛋白表达。方法：采用Tris饱和酚提取和醋酸铵甲醇沉淀大叶蛇葡萄嫩叶中的蛋白质；运用双向电泳法分离蛋白质，并对扫描后的二维凝胶电泳图谱进行分析，得到蛋白质表征图谱。结果：根据各个样品间蛋白点灰度值的比值差异，选择了差异较大的7个蛋白点进行质谱鉴定，鉴定了其中两种蛋白，分别为Hypothetical Protein和Unnamed Protein Product。结论：双向电泳技术的应用为从分子水平研究大叶蛇葡萄活性成分蛋白表达奠定了良好的基础。
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地黄块根总蛋白质提取及双向电泳条件优化
目的:建立一种有效的地黄块根总蛋白质提取、分离方法.方法:分析不同提取方法提取地黄块根总蛋白质的得率,同时对地黄块根总蛋白质双向电泳条件进行了优化比较.结果:三氯乙酸(TCA)-苯酚提取法的总蛋白质得率高,所获蛋白质在SDS-PAGE一维图谱获得的蛋白质条带丰富,在2-DE图谱获得的蛋白质点数较多、清晰,且蛋白质点分离较完全,图谱背景清晰.自制管胶中两性电解质pH 3-10与pH 5-8比例为1∶5,上样量为170μg所获得的2-DE图谱效果佳.结论:TCA/苯酚提取法适合于地黄块根总蛋白质的提取,本研究优化确定的双向电泳条件分离蛋白效果及重复性好.
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鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定
目的 建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法.方法 通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化.超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白.通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定.结果 本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯.与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异.研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.结论 为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础.
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NFκB家族蛋白对人卵巢癌细胞系生长及耐药性的影响
目的:研究NFκB家族蛋白在卵巢癌细胞的表达及与卵巢癌细胞化疗耐药性关系.方法:培养13株卵巢癌细胞系,对其进行胞质、胞核蛋白质提取,Western 印迹法观察NFκB家族蛋白及其抑制物的表达,并用MTT检测药敏、观察NFκB家族蛋白与卵巢癌细胞化疗耐药性关系.结果:①P65、P50及IKB在胞质内表达阳性率分别为76.9%、81.8%、84.6%,P65、P50同时在胞核内表达,P50尤为明显,阳性率分别为15.3%、45.5%.②OV-MZ-5和OV-MZ-2774两个卵巢癌细胞系P65表达阳性,MTT检测IC50表现明显高值,显示耐药.结论:P65、P50在卵巢癌细胞的发生、发展中发挥作用,P50更为明显;P65与卵巢癌细胞的耐药关系密切,可望成为判断预后的新的标志物.
关键词： NFκB家族蛋白 卵巢癌细胞系 蛋白质提取 Western印迹法 MTT检测 -
NFkB家族蛋白对乳腺癌细胞发生及耐药的影响
目的:研究NFkB家族蛋白在乳腺癌细胞的表达及与乳腺癌细胞化疗耐药性关系.方法:培养14个乳腺癌细胞系,对其进行胞浆、胞核蛋白质提取,Western印迹法观察NFKB家族蛋白及其抑制物的表达,并用MTT药敏实验观察NFkB家族蛋白与乳腺癌细胞化疗耐药性关系.结果:p50、p65和IkB在细胞浆内表达阳性率分别为100%、71%和50%,p50、p65同时在胞核内表达,p50尤为明显,阳性率分别为63%和35%;5个乳腺癌细胞系细胞核MTT检测IC50值大于20μg/ml,p50表达全部阳性,p65 2例阳性;p50胞核表达阳性者的IC50值明显高于胞核表达阴性,而p65无明显关系.结论:p50在乳腺癌细胞的发生中起一定作用,且与乳腺癌细胞的耐药关系密切,可望成为预后判断的新标志物.
关键词： NFKB家族蛋白 乳腺癌细胞株 蛋白质提取 Western印迹法 MTT药敏实验 -
小型猪发育期牙胚蛋白提取方法探讨
目的：比较不同蛋白质提取方法在牙胚蛋白提取中的效果，寻找适合牙齿发育高通量蛋白质组学分析的蛋白质提取方法。方法：取猪胚胎第40、50、60天第三乳磨牙牙胚，利用碱性碳酸盐溶液提取牙胚初步钙化部分的蛋白，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳比较液氮研磨法和电动研磨器研磨法提取牙胚总蛋白效果，BCA（bicinchoninic acid）蛋白浓度测定法比较 RIPA 裂解液与尿素溶液提取牙胚总蛋白含量。结果：与液氮研磨法相比，电动研磨法提取蛋白后的聚丙烯酰胺电泳图谱蛋白条带明显更深，蛋白含量高。尿素溶液对牙胚总蛋白的提取量高于 RIPA 裂解液组，蛋白电泳分离效果均可。结论：采用电动研磨器研磨牙胚，组织损失量小，提取蛋白效果好于液氮研磨；采用尿素溶液提取牙胚总蛋白效果优于 RIPA 裂解液。初步找到适合下游高通量蛋白质组学分析的牙胚蛋白提取方法。
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一种提取莪术总蛋白质的有效方法
研究莪术蛋白质提取纯化及双向电泳技术,在样品制备、电泳及染色等方面进行技术改进,解决莪术块茎中富含色素、多酚类化合物及其氧化产物等对双向电泳严重干扰的问题,探索出一种可获得重复性好,清晰度高的蛋白质双向电泳图谱技术.通过几种经典的植物蛋白提取方法的比较,优化莪术蛋白质的提取方法.电泳图谱分辨出莪术蛋白质斑点数为500±20个,蛋白质Mr约在14.0～100.0范围内,主要分布在14.4～97.4之间;等电点pH约在4～7范围内,主要分布在5.0～6.5.筛选出一种适合莪术蛋白质的提取方法并优化了该提取方法.
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兔股骨头蛋白质双向电泳样品制备方法的比较
蛋白质组学是目前生物医学研究的热点领域之一,已经广泛应用于疾病的发病机制、诊断、治疗等方面的研究[1-4].双向电泳是蛋白质组学研究中常用的技术方法.兔股骨头坚硬而且基质成分复杂[5],我们通过对几种制备方法进行比较,以确定更适合于骨组织样本蛋白质提取的方法.
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鱼腥草叶片总蛋白的提取及双向电泳体系的建立
[目的]比较鱼腥草叶片蛋白质提取方法,建立适用于鱼腥草蛋白质组双向电泳分析方法.[方法]以鱼腥草叶片为材料,分别采用凯基试剂盒、三氯乙酸/丙酮沉淀法、尿素/硫脲提取法及酚法4种方法提取鱼腥草叶片总蛋白,使用Bradford 法测定蛋白质浓度,计算蛋白提取率,并对所提取的蛋白样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及双向电泳(2-DE)分析,所得2-DE凝胶图片采用PDQuest软件进行分析.[结果]4种方法的提取率分别为2.90、2.55、3.90、3.80 mg/g,分别检测到186、153、356、315个蛋白点,酚法提取蛋白质的2-DE图谱效果较好,结果的重复性较好.[结论]不同方法提取鱼腥草叶片总蛋白的2-DE结果存在差异,以酚法提取的2-DE效果较好,适用于鱼腥草叶片蛋白质组分析.
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当归种子蛋白质提取方法及SDS-PAGE技术体系研究
目的:建立适用于当归种子蛋白质提取及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的技术体系,为当归种子蛋白质研究和品种纯度检测提供技术支撑.方法:以蛋白质含量和电泳条带数量等为指标,采用浓缩胶法、盐溶蛋白法、电极缓冲液法、二巯基苏糖醇(DTT)法、尿素法、巯基乙醇法、三羟甲基氨基甲烷(Tris)法、丙酮沉淀法等8种方法提取当归种子蛋白质,筛选优提取方法;再以优提取方法为基础,考察不同料液比、样品稀释倍数(上样量)和分离胶浓度对当归种子蛋白质提取及SDS-PAGE效果的影响.结果:8种提取方法中以巯基乙醇法提取蛋白质的含量较高(29.931 mg/g),且电泳条带数目多、泳道背景清晰;当以巯基乙醇法为优提取方法时,料液比为1:10、上样量为5倍、分离胶浓度为15%条件下电泳效果好,共得到18条条带.结论:建立的蛋白质提取方法和SDS-PAGE技术体系适用于当归种子纯度的检测.
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蛋白质组学在肾移植中的研究进展
蛋白质组学技术是一门从整体上研究细胞、组织或有机体蛋白质组的新兴学科,包括蛋白质提取、生物质谱和生物信息学三部分.蛋白质组学为疾病发病机制的研究提供了新的思路和方法.本文简要介绍蛋白质组学技术在肾移植术后无创性诊断排斥反应、免疫抑制剂肾毒性及肾移植术后感染等方面的研究进展.
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三氯乙酸／丙酮蛋白质提取法在白内障晶状体蛋白提取中的应用
目的：比较不同蛋白质提取方法在白内障晶状体蛋白提取中的效果，寻找适合白内障晶状体蛋白质组学研究的蛋白质提取方法。
方法：采用裂解液溶解白内障晶状体组织样本，超声裂解离心后分别采用三氯乙酸/丙酮法和 ReadyPrep 2 D Cleanup Kit对晶状体蛋白样本进行提取、二维电泳，并对电泳后凝胶进行染色、图像采集和图像分析。
结果：在2-DE图谱上蛋白斑点的相对分子量在14～97．4kDa之间，等电点在5～9之间，其中高丰度蛋白相对分子量处于20～31 kDa范围内，低丰度蛋白斑点相对分子量处于31～43 kDa范围内。经TCA/丙酮沉淀法处理的含有透明质酸钠白内障晶状体蛋白样本，二维电泳凝胶图谱背景较清晰，蛋白斑点较清楚，共检测到35～40个左右的蛋白斑点。
结论：在人白内障晶状体蛋白质组学研究中，TCA/丙酮法具有较好的纯化效果，为人晶状体组织蛋白质组学的质谱分析研究提供了可靠的二维电泳凝胶图谱。 -
蛋白质提取及分离纯化研究进展
主要研究蛋白质提取和分离纯化研究进展,介绍了蛋白质的预处理技术,在此基础上对蛋白质提取以及分离纯化技术研究进展进行了讨论.
