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运动训练对出血性脑损伤细胞凋亡基因caspase-3及其蛋白表达的影响
目的:观察运动训练对脑出血大鼠神经细胞凋亡基因caspase-3及其蛋白表达的影响.方法:实验动物用健康雄性SD大鼠120只.随机分为3组,实验组(出血后运动,40只)、对照组(出血后不运动,40只)、假手术组(无出血不运动,40只).各组又分为术后7d,14d,21d,28d共4个时相点,每个时相点5只用于免疫组化检测,5只用于RT-PCR和Western印迹法检测.实验组于术后24h开始跑笼训练,其余大鼠在标准笼内自由活动.结果:①免疫组化结果:caspase-3阳性细胞表达为细胞胞浆着棕黄色,阳性细胞主要分布于血肿周围和大脑皮质的神经元.实验组随运动训练时间延长似乎有表达上调趋势,28d时表达虽有下降迹象,但仍处于较高水平.对照组表达水平较实验组更明显,但两组差异无显著性意义(P>0.05),实验组和对照组与假手术组相比差异有非常显著性意义(P<0.01).②Western blotting和RT-PCR结果与免疫组化一致.结论:caspase-3参与了脑出血后细胞凋亡的发生,但运动训练对caspase-3基因及其蛋白表达的抑制作用不明显.
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雌激素受体启动子异常甲基化作为白血病早期诊断分子标志物的实验研究
目的 探讨雌激素受体基因启动子区异常甲基化作为白血病早期诊断分子标志物的可能性.方法 应用MSP和RT-PCR检测40例急性白血病患者(未治疗)外周血雌激素(ER)受体启动子甲基化及其表达状态,Western-blot检测白血病细胞株以5'-Aza-Dc去甲基化前后蛋白表达的差异.结果 6种白血病细胞株以5'-Aza-Dc去甲基化后ERα蛋白表达明显增强,97.5%的急性白血病患者ERα-A启动子呈甲基化状态并导致其表达异常.结论 白血病细胞的雌激素受体基因启动子(ERα-A)存在异常甲基化现象并导致其基因表达沉默,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示ERα-A基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标志物.
关键词： 白血病 雌激素受体 DNA甲基化 Western印迹法 -
cyclin E蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及与预后的关系
目的 探讨cyclin E蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及其与预后的关系.方法 采用Western印迹法检测42例上皮性卵巢癌患者标本中cyclin E蛋白的水平,结合临床资料分析其表达水平与预后的关系.结果 cyclin E蛋白在上皮性卵巢癌中阳性表达率达85.7%,其表达水平与患者分期、组织学类型和细胞分化程度无关.高表达组的平均无瘤生存期为(17.2±2.2)个月,低表达组的平均无瘤生存期为(28.2±1.9)个月,高表达组的无瘤生存期明显短于低表达组(P＜0.01),但两组的总生存期无明显差异(P＞0.05).结论 高表达组的无瘤生存期明显短于低表达组,提示cyclin E蛋白高表达患者在更短的时间复发,预后差,该组患者应加强治疗和严密随访.
关键词： 卵巢癌 Cyclin E蛋白 Western印迹法 -
子宫内膜腺癌中孕激素受体亚型的表达
目的研究子宫内膜癌中孕激素受体A、B、C三种亚型的表达,探讨其在子宫内膜癌发生、发展中的作用.方法选取子宫内膜腺癌标本23例,其中高分化腺癌9例,中分化腺癌12例,低分化腺癌2例.另外选取绝经后子宫内膜标本5例.分别提取内膜或癌组织蛋白质,采用Western印迹法进行孕激素受体A、B、C三种亚型(hPRA、hPRB、hPRC)表达的半定量分析.结果子宫内膜中、低分化腺癌与绝经后内膜对照相比,hPRB表达显著性降低(P=0.045);高分化腺癌和绝经后内膜hPRB差异无显著性(P＞0.05).中、低分化腺癌的hPRA、hPRB及hPRC低于高分化腺癌,但差异无显著性(P＞0.05).结论子宫内膜中、低分化腺癌与绝经后内膜对照相比,hPRB显著下调,而高分化腺癌与绝经后内膜差异无显著性,提示hPRB可能与肿瘤的发生及分化程度有关.
关键词： 子宫内膜癌 受体 孕酮 Western印迹法 -
Odyssey红外荧光扫描成像系统的特点及应用
Odyssey红外荧光扫描成像系统(Infrared Imaging System)是一套具有高灵敏度的实验系统,在医院、科研院所中得到越来越多的应用,日益受到人们的关注和青睐.
关键词： 红外荧光扫描成像系统 Western印迹法 -
脑出血模型大鼠脑组织脑红蛋白的表达
目的:观察脑红蛋白在实验性脑出血模型大鼠脑组织内表达水平的动态变化.方法:实验于2004-10/2005-10在解放军沈阳军区总医院动物实验科和神经中心实验室完成.66只大鼠随机分为3组:正常对照组6只,脑出血组30只和假手术组30只.脑出血组和假手术组再根据动物模型建立后1,6,24,48和72 h 5个时间点随机分为5个亚组,每个亚组6只大鼠.采用立体定向自体血注入大鼠尾状核建立脑出血模型(假手术组注入生理盐水),用Western blot和免疫组织化学法检测脑出血后不同时间脑组织内脑红蛋白的表达.结果:脑出血组有3只大鼠术后死亡,有4只大鼠术后模型制备失败,均予以剔除并随机补充,66只大鼠终纳入分析.Western blot结果显示脑出血组术后1 h血肿周围脑组织内脑红蛋白相对表达水平开始增高(0.45±0.03),48 h达到高峰(0.83±0.05),72 h开始下降(0.55±0.11),均明显高于假手术组(0.31±0.06,0.31±0.01,0.33±0.04)和正常对照组(0.32±0.07).免疫组化染色显示在血肿周围脑红蛋白表达比其他脑区明显增多.结论:脑出血后脑内脑红蛋白表达上调,提示脑红蛋白可能对脑出血继发神经损伤起重要的保护作用.
关键词： 脑出血 免疫组织化学 Western印迹法 蛋白质类 -
stathmin基因的表达与长春瑞滨治疗非小细胞肺癌疗效关系
背景与目的: 化疗是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的主要治疗手段,但是NSCLC常对化疗耐药,导致治疗失败.因此,针对不同分子生物学特点的NSCLC进行化疗疗效预测,成为提高疗效的重要方法.本研究通过研究晚期NSCLC患者肿瘤组织中Stathmin基因的表达与患者对长春碱类药物的化疗敏感性的关系,为患者选择适当的药物治疗提供依据.方法:2005年5月-2007年12月,共78例晚期NSCLC患者入组,随机分ANP方案[长春瑞滨(NVB)联合顺铂(DDP)或卡铂(CBP)]化疗组或GP方案[吉西他滨(GEM)联合DDP或CBP]化疗组,观察两组对化疗的反应;同时以RT-PCR法检测患者病理组织中Stathmin mRNA的表达,以Western印迹法检测Stathmin的蛋白含量.结果: NP组41N,GP组37例,两组患者的性别、年龄、病理类型及肿瘤分期等临床特点无显著性差异(P>0.05),对化疗总的有效率分别为46.3%(19/41)和48.6%(18/37),两者之间亦未见显著差异(P>0.05);在NP组内,有效19例,无效22例,有效患者的肿瘤组织中stathmin mRNA测量值为1.9±1.1,而无效患者为7.5±2.8,两者之间差异有显著性(P=0.003).有效患者的Stathmin蛋白测量值为1.5±0.7.无效组为4.3±1.6,两者之间差异有显著性(P=0.002).GP组18例有效,19例无效,有效与无效患者肿瘤组织中stathmin mRNA及Stathmin蛋白无明显差异(P>0.05). 结论: NSCLC患者肿瘤组织中stathmin基因的表达与患者对长春碱药物的敏感性有关,stathmin基因高表达,对长春碱药物的敏感性低,宜换用其他药物治疗.
关键词： Stathmin 非小细胞肺癌 化疗 Western印迹法 mRNA -
NFκB家族蛋白对人卵巢癌细胞系生长及耐药性的影响
目的:研究NFκB家族蛋白在卵巢癌细胞的表达及与卵巢癌细胞化疗耐药性关系.方法:培养13株卵巢癌细胞系,对其进行胞质、胞核蛋白质提取,Western 印迹法观察NFκB家族蛋白及其抑制物的表达,并用MTT检测药敏、观察NFκB家族蛋白与卵巢癌细胞化疗耐药性关系.结果:①P65、P50及IKB在胞质内表达阳性率分别为76.9%、81.8%、84.6%,P65、P50同时在胞核内表达,P50尤为明显,阳性率分别为15.3%、45.5%.②OV-MZ-5和OV-MZ-2774两个卵巢癌细胞系P65表达阳性,MTT检测IC50表现明显高值,显示耐药.结论:P65、P50在卵巢癌细胞的发生、发展中发挥作用,P50更为明显;P65与卵巢癌细胞的耐药关系密切,可望成为判断预后的新的标志物.
关键词： NFκB家族蛋白 卵巢癌细胞系 蛋白质提取 Western印迹法 MTT检测 -
维生素C发酵中L-山梨糖脱氢酶的研究
从氧化葡糖杆菌SCB329菌体中分离纯化得到L-山梨糖脱氢酶后，用Western印迹法验证了L-山梨糖脱氢酶只存在于产酸“小菌”。SDS-PAGE电泳测得分子量约为60 000。动力学性质研究表明它为一个典型的MichaelisMenten氏酶，对L-山梨糖作用的Km值为52.7×10-3mol/L，适作用pH和温度分别为7.0和42℃。Mg2+、Ca2+是酶的激活剂，EDTA、Cu2+是酶的抑制剂，氨基酸组成分析表明酸性氨基酸占24.3％，碱性氨基酸仅占7.6％。
关键词： 维生素C L-山梨糖 L-山梨糖脱氢酶 抗体 Western印迹法 -
氯化甲基汞中毒大鼠周围神经损伤的病理演变
目的:探讨氯化甲基汞中毒大鼠周围神经损伤的病理改变及病理机制.方法:在WKAH大鼠服用氯化甲基汞4 mg/d所致的亚急性汞中毒模型上,采用组织病理、免疫组化、蛋白印迹等方法动态观察坐骨神经和后根神经节的病理演变,TUNEL染色观察细胞凋亡.结果:中毒后第11天后根神经节内可见散在大型神经元A被吞噬细胞浸润,电镜下A型神经元胞质内线粒体变性;坐骨神经远端轻微轴索变性,病变逐渐加重并向心性发展.第15天开始出现髓鞘崩解,MRF-1染色显示有少量的吞噬细胞反应.第18天出现明显轴索变性及髓鞘崩解,可见大量浸润的吞噬细胞;后根神经节内A型神经元近于消失,但B型神经元保留良好,B型神经元的上行终末胶状质下区亦出现明显变性.TUNEL染色未观察到节细胞凋亡.采用Western 印迹法观察到坐骨神经及后根神经节神经原纤维及髓鞘蛋白O随中毒时间延长逐渐降低,在第15天后尤为明显,与免疫组化结果相符合.结论:亚急性汞中毒模型中,A型神经元变性可能与汞中毒损伤线粒体膜继发的能量代谢障碍有关;而B型神经元变性则符合逆行性死亡的过程.
关键词： 氯化甲基汞 周围神经 后根神经节 免疫组织化学 Western印迹法 -
PC12-Mint2基因工程细胞株的构建
目的:构建稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株.方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-Mint2;采用脂质体Lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选抗性克隆,有血清培养并传代具有G418抗性的细胞,数代培养后获得工程细胞株;分别提取野生型PC12细胞和PC12-Mint2工程细胞的mRNA及细胞裂解液,RT-PCR方法检测Mint2基因是否整合入PC12细胞基因组,并用Western印迹法检测外源基因Mint2在PC12-Mint2工程细胞中是否正常表达.结果:扩增出的基因片段大小为2 253 bp;pcDNA3.1A-Mint2重组质粒酶切结果表明Mint2基因正确地插入到pcDNA3.1A载体中,测序结果正确;将pcDNA3.1A-Mint2转染PC12细胞,经G418筛选获得PC12-Mint2工程细胞株;RT-PCR结果表明Mint2基因已整合入PC12细胞,Western印迹结果显示在120 000处有特异条带,大小与Mint2蛋白理论计算值一致,表明在PC12-Mint2基因工程细胞中确实有Mint2蛋白表达.结论:本试验成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-Mint2,并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株,为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础.
关键词： 基因亚克隆 Mint2 PC12细胞 转染 Western印迹法 -
UHRF1基因在食管癌中的表达和意义
目的 研究UHRF1基因在食管癌组织及癌旁正常组织中的表达及临床意义.方法 对62例食管癌组织及癌旁正常组织应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其中UHRF1 mRNA表达水平；应用Westernblot法检测62例食管癌组织及对应癌旁正常组织中UHRF1蛋白的表达；同时分析UHRF1的表达与患者临床病理特征之间的关系.结果 食管癌组织中UHRF1 mRNA的表达水平显著高于正常组织(P＜0.01)；Westernblot结果显示在70.9％ (44/62)的食管癌组织中UHRF1蛋白表达较癌旁正常组织高(P ＜0.001)；统计分析结果发现,UHRF1蛋白及mRNA的表达与食管癌患者的淋巴结转移、浸润深度等均无显著性相关(P＞0.05),而与食管癌的分化程度呈负相关(r=-0.176,P＜0.05),分化程度越低者UHRF1表达越高,各不同分化组间UHRF1表达差异具有统计学意义(P=0.001),UHRF1高表达患者的五年生存率较差.结论 UHRF1在食管癌组织中的表达量显著升高,而且与食管癌分化程度和患者预后相关,可能成为判断食管癌及预后的重要分子生物标志.
关键词： UHRF1基因 反转录聚合酶链反应 Western印迹法 食管肿瘤 -
星状孢菌素对近紫外线损伤的兔晶状体上皮细胞通讯血管内皮生长因子的保护作用
目的 观察近紫外线对兔晶状体上皮细胞通讯功能的影响,探讨星状孢菌素在近紫外线辐射时对细胞通讯功能的保护作用.方法 建立体外培养兔晶状体上皮细胞的近紫外线辐射模型,星状孢菌素作为实验因素,设为正常组、对照组和实验组,应用激光共聚焦显微镜荧光光漂白恢复技术检测细胞的荧光恢复率以评估细胞的通讯功能,采用免疫印迹法分析各组连接蛋白(Cx)43的表达水平.结果 近紫外线照射15 min后,实验组及对照组的细胞形态均发生变化,但实验组的变化较对照组轻.近紫外线照射10和15 min后,实验组荧光恢复率均显著高于对照组(P值均＜0.05).近紫外线照射10 min后,实验组晶状体上皮细胞Cx43的表达显著高于对照组(P＜0.05),但显著低于正常组(P＜0.05).结论 近紫外线辐射可损伤晶状体上皮细胞的通讯功能,星状孢菌素对细胞通讯功能具有显著的保护作用.
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BAMBI在非小细胞肺癌细胞系中的分布及表达
目的 观察BAMBI在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中的表达分布情况,并探讨其表达与NSCLC病理分型及侵袭潜能之间的关系.方法 利用免疫荧光技术检测人肺腺癌细胞系A549以及人肺巨细胞癌具有不同侵袭潜能的亚系BE1、LH7中BAMBI的分布,采用逆转录聚合酶链反应及Western印迹法检测3种细胞中BAMBI的mRNA及蛋白表达.结果 BAMBI mRNA在A549细胞系中的表达(0.574±0.035)显著低于BE1细胞系(0.731±0.051)及LH7细胞系(0.734±0.049,P值均<0.001),后两者间的差异无统计学意义(P=0.216).A549细胞系中BAMBI蛋白相对含量(0.769±0.103)显著低于BE1细胞系(0.963±0.061)及LH7细胞系(0.957±0.048,P值均<0.001),后两者间的差异无统计学意义(P=0.096).BAMBI在A549细胞膜上的染色强度较弱,且呈现颗粒状不均一性;在BE1、LH7细胞膜上的染色较强,连续且均匀一致.结论 BAMBI在NSCLC中的表达定位于细胞膜上以及靠近细胞膜的细胞质中,其在肺巨细胞癌细胞中的表达高于肺腺癌细胞,且其表达高低可能与肺巨细胞癌细胞的侵袭潜能无关.
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成年大鼠纹状体区α-羟甲基恶唑丙酸型受体亚单位谷氨酸受体1的研究
目的 研究膜α-羟甲基恶唑丙酸型(AMPA)受体亚单位谷氨酸受体1(GluR1)及其磷酸化形式在大鼠纹状体中的表达.方法 采用Western印迹法、免疫组织化学法检测纹状体AMPA受体亚单位GluR1表达及磷酸化状态.结果 纹状体有GluR1的表达,GluR1有(30.00士4.36)%的磷酸化胞内羧基端831位丝氨酸(GluR1S831)和(31.00士1.56)%的磷酸化胞内羧基端845位丝氨酸(GluR1S845)形式表达;GluR1以及磷酸化GluR1S831和磷酸化GluR1S845主要在纹状体背外侧区表达,所有小清蛋白阳性的神经元均表达GluR1以及磷酸化GluR1S831和磷酸化GluR1S845,且所有GluR1以及磷酸化GluR1S831和磷酸化GluR1S845阳性的神经元均为小清蛋白阳性的神经元.结论 AMPA受体亚单位GluR1独特地在纹状体小清蛋白阳性的神经元表达,且存在明显磷酸化GluRlS831和磷酸化GluR1S845表达,为深入研究病理情况下AMPA受体的特性奠定了基础.
关键词： α-羟甲基恶唑丙酸型 Western印迹法 磷酸化 小清蛋白 -
反复给予氯胺酮对大鼠海马神经元磷酸化丝切蛋白表达的影响
目的 观察反复给予氯胺酮对大鼠海马神经元磷酸化丝切蛋白(p-cofilin)表达的影响,探讨其参与氯胺酮导致认知功能障碍发生的机制.方法 将40只2月龄Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为氯胺酮组和0.9％氯化钠溶液组(对照组).氯胺酮组和对照组大鼠每天分别予腹腔内注射氯胺酮(50mg/kg)或等体积的0.9％氯化钠溶液(1 mL/kg),连续7d.停止注射氯胺酮2d后应用Morris水迷宫行定位航行实验和空间探索实验,检测两组大鼠的学习记忆能力,并从氯胺酮组中筛选出认知功能障碍大鼠(认知障碍组).采用Western印迹法检测认知障碍组和对照组大鼠海马内p-cofilin和丝切蛋白(cofilin)的表达量.结果 氯胺酮组实验第3、4、5天的逃逸潜伏期均显著长于对照组同时间点(P值均＜0.05).氯胺酮组的穿越平台次数显著少于对照组(P＜0.05);平台象限停留时间也显著缩短(P＜0.05);两组间游泳速度的差异无统计学意义(P＞0.05).认知障碍组大鼠海马内p-cofilin蛋白表达量显著低于对照组(P＜0.05),而两组间cofilin蛋白表达量的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 反复给予氯胺酮可导致大鼠发生认知功能障碍,且大鼠海马内p-cofilin的蛋白表达量降低.
关键词： 氯胺酮 磷酸化丝切蛋白 丝切蛋白 Morris水迷宫 Western印迹法 -
紫外线照射对卵巢癌细胞NFkB和p53的影响
目的 研究NFkB家族蛋白、p53在卵巢癌细胞系的表达及紫外线照射后所引起的变化.方法 培养11株卵巢癌细胞系,收获细胞,对其进行胞浆、胞核蛋白质提取,Western印迹法观察NFkB家族蛋白及其抑制物的表达,并用同法观察p53的表达;采用20 J/m2剂量紫外线照射细胞,继续培养并提取蛋白质进行检测.结果 ①11个卵巢癌细胞系p50、p65和IKB-α胞浆表达阳性率分别为:63.6％、45.5％、81.9％,胞核表达阳性率分别为:63.6％、54.5％、18.2％.②紫外线照射后胞核p50、p65和IKB-α阳性率分别为:81.9％、72.7％、36.4％.③p53在卵巢癌细胞表达阳性率为:45.5％.紫外线照射后阳性率为:72.3％.结论 ①紫外线照射可导致胞核p50、p65及p53阳性率提高.②NFkB家族蛋白尤其是p50对卵巢癌的发生、发展有一定作用.
关键词： 卵巢癌细胞 NFKB田家族蛋白 P53 Western印迹法 紫外线照射 -
NFkB家族蛋白对乳腺癌细胞发生及耐药的影响
目的:研究NFkB家族蛋白在乳腺癌细胞的表达及与乳腺癌细胞化疗耐药性关系.方法:培养14个乳腺癌细胞系,对其进行胞浆、胞核蛋白质提取,Western印迹法观察NFKB家族蛋白及其抑制物的表达,并用MTT药敏实验观察NFkB家族蛋白与乳腺癌细胞化疗耐药性关系.结果:p50、p65和IkB在细胞浆内表达阳性率分别为100%、71%和50%,p50、p65同时在胞核内表达,p50尤为明显,阳性率分别为63%和35%;5个乳腺癌细胞系细胞核MTT检测IC50值大于20μg/ml,p50表达全部阳性,p65 2例阳性;p50胞核表达阳性者的IC50值明显高于胞核表达阴性,而p65无明显关系.结论:p50在乳腺癌细胞的发生中起一定作用,且与乳腺癌细胞的耐药关系密切,可望成为预后判断的新标志物.
关键词： NFKB家族蛋白 乳腺癌细胞株 蛋白质提取 Western印迹法 MTT药敏实验 -
沙眼衣原体噬菌体衣壳蛋白Vp1血清抗体的检测
衣原体噬菌体作为一种侵袭衣原体的病毒可使衣原体解体,具有抗感染的作用.目前已经发现6种衣原体噬菌体,其上的Vp1蛋白为衣原体噬菌体的衣壳蛋白.是主要的结构蛋白.该蛋白高度保守并可诱导机体产生抗体反应,适用于作为噬菌体的诊断抗原[1].沙眼衣原体是引起非淋球菌性尿道炎的主要病原体,其诊断困难、并发症严重.目前尚未在沙眼衣原体中发现噬菌体的存在.我们以豚鼠结膜炎衣原体(GPIC)噬菌体(PhiCPGI)的莺组Vp1纯化蛋白为抗原,通过ELISA法初步了解Ct感染者血清中针对Vp1蛋白的抗体,并用Western印迹法验证该抗体的特异性,推测Ct感染者血清中Vp1蛋白的存在,为沙眼衣原体与噬菌体的研究提供参考.
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Persephin在顺铂诱导的急性肾损伤小鼠中的作用初探
目的：观察顺铂诱导急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）模型中肾皮质Persephin（PSP）的变化。方法：雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组及模型组，模型组应用顺铂单次腹腔注射（15mg/kg）制备AKI小鼠模型，对照组小鼠予以同等容积的0.9%的生理盐水单次腹腔注射，造模3天后观察各组小鼠肾功能变化、肾脏病理学改变、实时PCR法及Western印记法检测肾脏皮质PSP的表达。结果：与对照组相比，模型组小鼠出现精神萎靡不振，反应迟钝，活动减少，造模后第3天尿素氮明显上升（P＜0.05），肾脏病理改变中模型组肾小管管型计数（0.63±0.62个/HPF）及坏死计数（3.71±1.14个/HPF）均高于正常对照组（P＜0.05）。PSP在模型组肾皮质的表达高于对照组（P＜0.05）。结论：AKI模型中肾脏皮质PSP表达升高，提示PSP可能参与了AKI的病程，但其相关作用机制尚需进一步研究。
关键词： 急性肾损伤 顺铂 Persephin 实时PCR法 Western印迹法
