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过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用
目的 利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用.方法 构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞.经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体.收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数.结果 成功构建了成血管细胞特异性表达目的 基因的表达载体,转染目的 基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的 基因.过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍.结论 在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化.
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前列腺外周带基质细胞过表达LMO2基因对前列腺上皮细胞增殖能力的影响
目的 观察前列腺外周带基质细胞过表达LMO2基因对前列腺上皮细胞增殖能力的影响.方法 应用基因芯片筛选前列腺不同带基质细胞的差异基因.RT-PCR、Western印迹验证差异基因LMO2在基质细胞中的表达.CCK-8、EdU实验检测稳定表达LMO2的前列腺基质细胞株(WPMY-1-LMO2)条件培养基对BPH-1、PC3增殖能力的影响.细胞因子芯片检测WPMY-1-LMO2条件培养基中细胞因子的表达.Western印迹检测BPH-1、PC3细胞内增殖相关蛋白的变化.结果 前列腺不同带基质细胞间有显著表达差异基因512条.RT-PCR、Western印迹证实LMO2基因在外周带基质细胞中过表达,外周带基质细胞中LMO2的表达水平比移行带基质细胞高3.36倍(2.89±0.33与0.86 ±0.10,P＜0.01).WPMY-1-LMO2条件培养基孵育BPH-1 (35.0％±2.5％)、PC3(42.7％±6.0％)细胞增殖能力与对照组(23.3％±2.5％、29.3％±3.5％)比较明显增强,细胞内STAT3磷酸化水平升高、CCND1表达增高.细胞因子芯片发现FGF-9及IL-11在WPMY-1-LMO2上清液中表达升高.结论 前列腺外周带和移行带基质细胞中存在差异基因表达,前列腺基质细胞过表达LMO2后,诱导FGF-9、IL-11等细胞因子高表达,并通过旁分泌效应刺激前列腺上皮细胞生长.
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LMO2调控E-cadherin启动子的活性对前列腺癌恶化转移的影响
目的:研究原癌基因LMO2异常表达对前列腺癌恶化转移的影响及其可能机制.方法:采用分子克隆技术构建了一系列不同长度和点突变的E-cadherin基因启动子区序列至pGL-3 basic荧光素酶表达载体,然后将这些重组质粒与LMO2表达质粒共转染Lncap细胞并在24h后检测其荧光素酶活性.结果:过表达LMO2可以显著的抑制E-cadherin启动子荧光素酶报告基因的活性,使荧光素酶活性下降50％左右.通过截短和点突变研究发现其作用机制主要通过结合在启动子区-204/-198处的E-box位点发挥作用.结论:原癌基因LMO2可通过对E-cadherin发挥转录抑制作用来影响前列腺癌的恶化与转移.
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原癌基因LMO2在白血病细胞的表达及对细胞增殖的影响
目的 检测原癌基因LMO2在各种白血病中的表达情况,观察该基因表达量的改变对白血病细胞增殖的影响,探索LMO2在白血病发病中的作用.方法 荧光实时定量聚合酶链反应;Western印迹实验;基因转染建立高表达LMO2的白血病细胞株;siRNA干扰技术;细胞克隆形成实验.结果 LMO2基因在很多急性髓系和淋巴系白血病患者的表达水平高于慢性白血病患者及正常骨髓细胞,但LMO2转染的K562细胞克隆形成率下降,提示该基因在髓系白血病细胞的表达异常是一种伴随结果而不具有致癌作用.强表达LMO2的Molt-4细胞克隆形成率增加,应用特异siRNA可有效地下调其在Molt-4细胞的表达并使细胞克隆形成率下降,提示LMO2在T细胞白血病细胞中的表达有助于维持其增殖潜力.结论 LMO2基因表达异常在T淋巴细胞中具有致癌作用,但在髓系细胞转化中可能只是一种伴随现象.
