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灵芝菌液体生长曲线及麦角甾醇含量测定研究
目的：研究灵芝菌在不同生长天数的菌体数量，绘制生长曲线并测定麦角甾醇的含量变化，为灵芝菌用于双向固体发酵时确定佳接种时间提供理论依据。方法：每天定时取一定量的灵芝菌生长液，通过血球计数法测定菌种数量并绘制生长曲线，通过HPLC法测定麦角甾醇的含量。结果：根据血球计数法绘制生长曲线，在第4天菌种数进入对数生长期。通过HPLC法对样品中麦角甾醇含量测定，显示在第4天进入对数生长期。综上，4L液体发酵罐培养灵芝菌的佳接种时间为第4天。
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HPLC双波长法同时测定桦褐孔菌子实体中麦角甾醇和麦角甾酮的含量
目的 建立高效液相色谱双波长法同时测定桦褐孔菌中麦角甾醇和麦角甾酮的含量.方法 采用的色谱柱为岛津Inertsil ODS-SP C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇;流速为1 mL·min-1;检测波长为282 nm、349 nm;柱温为30℃.结果 麦角甾醇和麦角甾酮的进样量分别在0.404~1.616μg(r=1)、19.88~139.16 ng(r=1)范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为99.32%、99.34%,RSD分别为0.92%、1.02%.结论 所建立的方法准确可靠、重复性好,可用于桦褐孔菌中麦角甾醇、麦角甾酮化学成分的含量测定,为控制该药物的质量提供参考.
关键词： 高效液相色谱双波长法 桦褐孔菌 麦角甾醇 麦角甾酮 -
珊瑚共附生毛壳属真菌中的麦角甾醇成分及肿瘤干细胞增殖抑制活性
目的 研究软珊瑚来源的毛壳属真菌(Cheatomium sp.)中的活性成分.方法 采用多种分离手段对毛壳属真菌的乙酸乙酯提取物进行分离纯化,运用现代波谱技术并结合文献报道数据,鉴定化合物的结构;采用CCK-8方法对化合物的肝癌干细胞增殖抑制活性进行了体外测试.结果 分离得到13个已知的麦角甾醇类化合物,其结构分别鉴定为:麦角甾醇(1),(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-5α,8α-过氧-3β-醇(2),(22E,24R)-麦角甾-5,8(14),22-三烯-3β,15α-二羟基-7-酮(3),(22E,24R)-麦角甾-5,8(14),22-三-烯-3β,15β-二羟基-7-酮(4),(22E,24R)-麦角甾-5,8,22-三烯-3β-羟基-7-酮(5),(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6α,9α-四醇(6),(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-5α,6α-环氧-3β-醇(7),麦角甾-7,22-二烯-6β-甲氧基-3β,5α-二醇(8),(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α-二醇-6-酮(9),麦角甾-7,9(11),22-三烯-3β,5α,6α-三醇(10),(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6α-三醇(11),(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,9α-三醇-6-酮(12),(22E,24R)-麦角甾-8,22-二烯-5α,6α-环氧-3β,7α-二醇(13).在体外活性测试中,化合物3、4、6、8、13对人肝癌Huh7干细胞增殖显示不同程度的抑制活性.结论 化合物5～13为首次从该属真菌中分离得到.本文是对麦角甾醇类化合物抑制肿瘤干细胞增殖活性的首次报道.
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RP-HPLC法测定茶蔗子叶状层菌人工发酵菌丝中游离麦角甾醇的含量
目的:测定茶蔗子叶状层菌[ Phylloporia ribis (Schumach.:Fr.) Ryvarden]菌丝中游离麦角甾醇的含量.方法:采用Agilent 1100 LC高效液相色谱仪,Zorbax eclipse XDB C8,(150mm×4.6 mm)色谱柱,甲醇为流动相,检测波长为282 nm,流速1.0 ml·min-1.结果:标准曲线在质量浓度0.1～～0.5 mg·ml-1范围内线性良好,低质量浓度限量为0.1 mg· ml-1,RSD=0.52%.结论:采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定茶蔗子叶状层菌菌丝中游离麦角甾醇的含量,方法简便、快速、准确可靠,可作为茶蔗子叶状层菌发酵菌丝质量控制指标之一.
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猪苓化学成分及药理作用浅述
猪苓味甘、淡,性平,归肾、膀胱经,功效利水渗湿,常用于治疗小便不利,水肿.泻泄,淋浊等病,现代研究表明:猪苓中所舍麦角甾醇、精蛋白、多糖等成分还具有抗肿瘤、防治肝炎的作用.
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功能性红曲功效成分的含量测定
目的:测定功能性红曲功效成分脂肪酸、麦角甾醇、磷脂酰胆碱、总黄酮的含量.方法:采用索氏抽提法测定红曲中的粗脂肪含量,以气相色谱法(GC)测定其中的脂肪酸组成;采用高效液相色谱法(HPLC)测定红曲中的麦角甾醇的含量;采用分光光度法测定红曲中磷脂酰胆碱及总黄酮的含量.结果:红曲中粗脂肪含量为20.57～52.06 mg/g,其中油酸占38.69%(5份样品平均,下同)、亚油酸占32.21%、棕榈酸占15.44%、硬脂酸占7.512%;红曲中麦角甾醇的含量为0.7366～0.9543 mg/g;红曲中磷脂酰胆碱的含量为0.7513～1.567 mg/g;红曲中总黄酮的含量为1.026～1.362 mg/g.结论:红曲功效成分的含量测定有利于进一步探索其降血脂机制.
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HPLC-ELSD法同时测定冬虫夏草中3个甾醇的含量
目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定冬虫夏草中3个甾醇类成分(麦角甾醇、胆甾醇、谷甾醇)含量.方法 以0.5 mol·L-氢氧化钾-乙醇溶液超声提取样本,色谱柱为Waters Xbridge C18(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为水(A)和0.005％甲酸甲醇溶液(B),梯度洗脱,流速为1.0ml·min-,柱温30℃;ELSD漂移管温度35℃,雾化压力3.5 bar,增益值6,噪音过滤5s.结果 麦角甾醇、胆甾醇和谷甾醇分别在0.35～6.95 μg、0.20～3.98 lμg和0.18 ～3.60 μg范围内呈良好的线性关系;重复性RSD值分别为3.53％、2.99％和3.27％;平均加样回收率分别为100.64％、100.28％和100.20％.采用该方法对冬虫夏草的甾醇进行测定,麦角甾醇含量为3.41～4.72 mg/g;胆甾醇含量为1.09～1.43 mg/g;谷甾醇含量为0.35～ 0.52 mg/g.结论 建立的甾醇测定方法操作简便、重复性好、准确可靠,可应用于冬虫夏草主要甾醇类成分的分析,为冬虫夏草产品质量控制提供了方法参考.
关键词： 冬虫夏草 高效液相色谱-蒸发光散射检测器 麦角甾醇 胆甾醇 谷甾醇 -
星裂硬皮马勃不同部位麦角甾醇含量的高效液相色谱法测定
目的 建立星裂硬皮马勃中麦角甾醇的含量测定方法,并考察其不同部位麦角甾醇的含量.方法 采用高效液相色谱法,汉邦ODS-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇,检测波长282 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃.结果 麦角甾醇在进样量0.209 6 ～1.467 2μg范围内峰面积具有良好的线性关系,回归方程Y=130 328X-37 700(r=1),平均回收率为97.61％,RSD值为1.08％.菌丝中麦角甾醇含量高于孢子,发酵液中不合麦角甾醇.结论 该方法简便、快速、准确,重复性好,麦角甾醇可作为控制星裂硬皮马勃药材及发酵菌丝质量的一个指标成分.
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胶陀螺中麦角甾醇的结构修饰及抗结核作用的研究
目的 研究麦角甾醇及类似物7-脱氢胆甾醇氧化后的抗结核作用.方法 从胶陀螺中分离得到麦角甾醇,对其氧化得到麦角甾醇过氧化物;并对麦角甾醇类似物7-脱氢胆甾醇进行氧化得7-脱氢胆甾醇过氧化物;用MTT法检测其氧化产物的抗结核活性.结果 麦角甾醇过氧化物及其类似物的过氧化物当浓度分别超过20,50 μg/ml时有抗结核活性.结论 麦角甾醇过氧化物及7-脱氢胆甾醇过氧化物具有一定的抗结核活性.
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不同产地、不同采收期猪苓中麦角甾醇及多糖动态变化研究
目的 测定不同产地、采收期猪苓麦角甾醇及多糖的含量,根据含量的差异及动态变化得到佳猪苓产地及佳猪苓采收期.方法 以葡萄糖为对照品,采用紫外-分光光度计法测定不同采收期猪苓中多糖的含量,并采用HPLC法测定其中麦角甾醇含量.结果 不同产地猪苓中麦角甾醇和多糖含量差异较大,其中吉林长白山栽培猪苓的含量高于其他产地,为0.45％和2.19％;9个不同采收期吉林长白山猪苓的含量测定结果显示,麦角甾醇和多糖含量在5月末达到峰值0.26％和2.1％.结论 吉林长白山猪苓质量较好,吉林长白山猪苓5月末药材质量较佳,与传统采收期相符.此方法简便、灵敏、准确,为寻找佳猪苓产地及猪苓佳采收期提供了科学依据.
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药用真菌梨形马勃的生药学研究
目的 对梨形马勃进行生药学研究,为其开发应用提供依据.方法 采集梨形马勃子实体,进行基原鉴别、性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别,结合文献资料确定其为梨形马勃Lycoperdon pyriforme Schaeff..利用薄层色谱法建立梨形马勃专属性的薄层鉴别特征,利用高效液相色谱法测定其化学成分含量.结果 薄层鉴别研究发现梨形马勃具有多个专属性的薄层色谱斑点,并含有麦角甾醇,麦角甾酮.高效液相色谱法测定其麦角甾醇含量为1.02mg/g、麦角甾酮含量为68.5 μg/g.结论 通过梨形马勃性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别、薄层鉴别,可综合鉴别梨形马勃的真伪,为其鉴别提供了参考依据.麦角甾醇和麦角甾酮含量可作为其质量控制的重要指标,也为今后梨形马勃开发利用提供科学依据.
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麦角甾醇体外抗血小板聚集作用
目的 研究麦角甾醇的抗血小板聚集作用及机制.方法 采用家兔体外血小板聚集实验方法,观察麦角甾醇对二磷酸腺苷(4μmol?L-1)、胶原蛋白(4μg?mL-1)、花生四烯酸(1 mmol?L-1)和凝血酶(0.5 U?mL-1)诱导体外血小板聚集的抑制活性?麦角甾醇与奥扎格雷、双嘧达莫、氯吡格雷和阿司匹林联合应用体外抗二磷酸腺苷(0,1,2,4,6μmol?L-1)与纤维蛋白原(0,1,2,4,6,10 mg?mL-1)诱导血小板聚集作用.结果 麦角甾醇对各诱导剂二磷酸腺苷、胶原蛋白、花生四烯酸、凝血酶抑制作用的半数抑制浓度(IC50值)分别为(19.3±0.8),(23.4±1.2),(26.7±0.7),(32.9±1.5)μmol?L-1.麦角甾醇抑制二磷酸腺苷及纤维蛋白原诱导聚集作用的协同相关性的线性佳为双嘧达莫与氯吡格雷.结论 麦角甾醇能显著抑制血小板聚集及其功能活化,为麦角甾醇资源的充分开发及研制新的抗血小板聚集药物提供实验依据.
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地锦草提取物对皮肤真菌麦角甾醇生物合成的影响
目的 研究地锦草提取物对真菌细胞膜中麦角甾醇生物合成的影响.方法 真菌经不同浓度地锦草提取物作用孵育7 d后,经过皂化、提取,采用高效液相色谱法考察其麦角甾醇的含量变化.结果 地锦草提取物能使真菌中的麦角甾醇含量下降(P＜0.01),麦角甾醇含量变化有明显的剂量依赖性.结论 地锦草提取物通过抑制真菌的麦角甾醇生物合成而发挥其高效抗真菌活性.
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人工蛹虫草子实体中游离麦角甾醇的提取及含量测定
目的:从人工蛹虫草子实体中提取游离型麦角甾醇,并测定其含量.方法:采用正交设计法筛选麦角甾醇佳提取条件,用HPLC法测定麦角甾醇含量.结果:麦角甾醇在5.8～58.0μg·ml-1范围内线性关系良好(r=O.999 9),平均加样回收率为99.5%(RSD=1.3%).结论:该提取方法快速、简便,结果准确、可靠.
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灵芝孢子油中麦角甾醇含量测定方法研究
目的:建立灵芝孢子油的含量控制方法.方法:采用HPLC色谱法建立了灵芝孢子油中的麦角甾醇含量测定方法.结果:能准确的测定原料及制剂中的该成分的含量,该方法操作简便,重现性高,特异性强,麦角甾醇在0.316-580 mg/ml范围内呈良好的线性关系;回归方程:Y=1.08581X+1.58888,r=0.9999;平均加样回收率在99.37%-103.80%之间,RSD为1.54%.结论:可作为控制灵芝孢子油类产品质量的有效方法和依据.
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赤芝孢子的三萜和甾体类成分研究
目的:研究破壁赤芝(Ganoderma lucidum)孢子中的化学成分.方法:用硅胶柱色谱法及Sephadex LH-20柱色谱法进行分离纯化,依据理化性质和光谱数据鉴定化合物结构.结果:从破壁赤芝孢子的乙酸乙酯提取物中分离鉴定了8个化合物,分别被鉴定为:灵芝酸A(Ⅰ)、甲基灵芝酸A(Ⅱ)、甲基灵芝酸B(Ⅲ)、灵芝酸C2(Ⅳ)、灵芝酸G(Ⅴ)、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇(Ⅵ)、麦角甾醇过氧化物(Ⅶ)和麦角甾-7,22-二烯-3β-十五酸酯(Ⅷ).结论:化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ和Ⅷ为首次从赤芝孢子中分离得到.
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不同产地、商品规格及生长年限猪苓麦角甾醇及多糖的含量分析
目的:考察17批不同产地猪苓麦角甾醇及多糖的含量,为猪苓的质量标准及种植生产提供一定的依据.方法:分别采用HPLC法测定麦角甾醇的含量;水提醇沉法提取猪苓多糖,以葡萄糖为对照品,采用蒽酮-硫酸比色法测定猪苓多糖含量.结果:麦角甾醇以四川南江栽培猪苓样品含量较高,为0.07％ ～0.18％;四年生高,达0.18％;云南云龙、陕西太白野生猪苓及河南西峡鸡爪苓的麦角甾醇含量低,为0.04％ ～0.06％,低于中国药典标准.多糖含量范围为1.10％ ～2.30％,其中四川南江栽培三年生猪苓样品含量高,为2.30％;南江栽培四年猪苓的多糖含量低,为1.10％.同一产地样品,不同商品规格的猪苓麦角甾醇及多糖的含量差异很大:猪屎苓的麦角甾醇及多糖的含量均高于鸡爪苓;栽培猪苓麦角甾醇的含量高于野生猪苓,多糖含量与野生相差不大.同一产地(四川南江)猪苓麦角甾醇及多糖随着生长年限的增长而变化.结论:不同产地、不同商品规格及生长年限猪苓药材中麦角甾醇及多糖的含量存在较大差异,猪苓药材的质量受自然环境、来源、生长年限的影响.在适宜产区种植猪苓对保证猪苓药材质量和临床药效有积极的意义.
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HPLC法测定不同品种及段木栽培灵芝子实体中麦角甾醇含量
目的:以麦角甾醇为测定指标,建立灵芝子实体质量评价的HPLC方法,对不同品种及段木栽培灵芝子实体中麦角甾醇的含量进行比较研究.方法:采用HPLC法定量分析17个不同品种及14个不同段木树种的栽培灵芝子实体.色谱柱:Diamonsil C(18),流动相:乙腈,流速:1.0 mL/min,柱温:40 ℃.检测波长:282 nm.结果:确定了灵芝子实体中麦角甾醇的提取方法和HPLC含量测定方法.不同品种麦角甾醇含量范围为0.093%-0.243%,其中韩芝-2号、圆芝、明-1、野生1号同时具有较高的麦角甾醇含量和转化率;不同段木树种麦角甾醇含量范围为0.080%-0.227%,以白栎、杨梅的麦角甾醇含量及转化率均较高.结论:本方法操作简便、结果准确,可用于灵芝子实体中麦角甾醇的含量测定和灵芝质量评价研究.为人工栽培灵芝的品种及段木树种的选择提供了参考.
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影响猪苓生长的主要因素分析研究
目的:探索猪苓适宜种植种源、蜜环菌类型及用量、菌材类型和处理方式,为猪苓规模化人工种植提供依据.方法:采用区组法进行猪苓栽培,棋盘式法取样,F检验进行分析,单因素考察种源、蜜环菌、菌材对猪苓产量、质量的影响.结果:不同种源增长率在-20％ ～ 64％,麦角甾醇含量在0.08％～0.19％,多糖含量在1.51％ ～2.16％;苓种用量在0.2～1.0 kg每窖时增长率在14％ ～ 120％,麦角甾醇含量在0.10％ ～0.12％,多糖含量在1.39％ ～ 1.67％;蜜环菌类型及用量增长率在31％ ～ 167％,麦角甾醇含量在0.09％ ～0.13％,多糖含量在0.91％～ 1.64％;不同菌材类型增长率在-12％ ～ 14％,麦角甾醇含量在0.13％ ～0.20％,多糖含量在0.79％ ～ 1.64％;菌材经不同处理后增长率在-22％ ～ 89％,麦角甾醇含量在0.11％ ～0.19％,多糖含量在1.17％ ～ 1.53％.结论:猪屎苓苓种适合基地作种源;不同厂家生产的蜜环菌对猪苓增长率和质量没有显著影响,用量以每窖2瓶为宜;菌材以桦树作为优选,栽培前用1:800 ～1 000高锰酸钾溶液处理较好.
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对中国药典川木通的薄层色谱鉴别方法的商榷(二)
目的:深入探讨中国药典中川木通的薄层色谱鉴别方法.方法:按中国药典的川木通薄层鉴别法对川木通药材进行鉴别,并针对薄层斑点分离成分.结果:药材中均未检出齐墩果酸,但在薄层色谱上显示出一紫红色共同斑点,经过成分分离、鉴定,确定该斑点为麦角甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的混合物.并用HPLC和TLC图谱比对,进一步发现采集的9个小木通药材中均含有豆甾醇.结论:本研究结果为完善中国药典中川木通的质量标准提供了依据.
