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chk1、chk2反义寡核苷酸转染HL-60细胞株增加其放疗后凋亡敏感性
目的通过反义封闭chk1、chk2基因,阻断细胞周期检测点信号传导通路,从而增加HL-60细胞放疗敏感性.方法对HL-60细胞进行chk1、chk2正义链和反义链的单转染与共转染,于转染后24 h进行放射线照射,照射后24?h用Western blot测量chk1蛋白的变化,用流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡率.结果反义封闭chk1可增加HL-60细胞放疗后凋亡敏感性,细胞凋亡率为26.31%,明显高于正义链的10.34%,二者比较差异有显著性(P<0.05).转染chk1反义链的HL-60细胞G2/M期阻滞现象减弱,G2/M期细胞为38.42%,转染chk1正义链为54.64%,二者比较差异有显著性(P<0.01).联合反义封闭chk1、chk2具有协同增效作用.结论反义封闭chk1、chk2基因可增加HL-60细胞放疗后凋亡敏感性.
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Plk1、Chk1/2在原发性肝癌组织及HepG2细胞中的表达研究
目的：：研究保罗样激酶1(Polo-like kinase1,Plk1)、细胞周期检测点激酶1、2(Checkpoint kinase 1/2,Chk1/2)在原发性肝癌组织与人肝癌细胞HepG2中的表达情况。方法：使用免疫组织化学Envision法检测40例原发性肝癌组织及16例肝非肿瘤组织中Plk1、Chk1/2蛋白的表达。提取培养后的HepG2细胞蛋白。利用蛋白免疫印记( Western blot)技术定性分析Plk1、Chk1/2蛋白在HepG2细胞中的表达情况,并测定灰度值进行定量分析。结果：原发性肝癌组织中Plk1、Chk1蛋白的阳性表达率分别是57．5%、75%,高于它们在肝非瘤组织中的表达率0%、25．0%(P<0．05)。 Chk2在原发性肝癌组织中的表达阳性率22．5%,低于肝非肿瘤组织中的表达率56．3%(P<0．05)。 Plk1、Chk1/2蛋白在HepG2细胞中均有表达。其相对表达量分别是：0．39±0．0226、0．08±0．0249、0．01±0．0066,三者之间的差异均有统计学意义,其表达的顺序依次为Plk1>Chk1>Chk2。结论：Plk1、Chk1蛋白在原发性肝癌组织中表达上调,而Chk2蛋白在原发性肝癌组织中表达下调。 Plk1、Chk1/2基因作为细胞周期调控中的重要激酶在HepG2细胞中均有表达,其表达顺序为Plk1>Chk1>Chk2。Plk1、Chk1具有相对意义的肿瘤选择性表达,可能成为肝癌生物治疗中新的治疗靶点。
