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慢性粒细胞白血病急变伴t(3;21)(q26;q22)染色体易位受累基因的研究
目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)急性髓系白血病(AML)变伴t(3;21)(q26;q22)的受累基因.方法对1例CML AML变伴t(3;21)(q26;q22)患者细胞间期和中期分裂相细胞采用荧光原位杂交技术(FISH)检测AML1和bcr/abl基因重排,RT-PCR联合序列分析检测t(3;21)(q26;q22)受累基因.结果der(3)和der(21)染色体上均检测到AML1基因杂交信号,AML1-MDS1-Evi1、AML1-MDS1、AML1-EAP及Evi1基因均表达,未见AML1-Evi1融合基因表达,AML1-MDS1-Evi1基因表达水平是AML1-MDS1、AML1-EAP表达水平的1.58和1.54倍,患者Evi1基因表达水平是HEL细胞系Evi1表达水平的2.71倍.结论t(3;21)(q26;q22)导致形成AML1-MDS1-Evi1、AML1-MDS1融合基因及Evi1基因激活,这些继发的分子遗传学异常是CML急性变伴t(3;21)(q26;q22)患者急变发生的分子基础.
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47例MLL重排急性白血病患者EVI1和BRE基因表达及其临床意义
目的：分析伴有11q23/MLL重排急性白血病（AL）患者中EVI1及BRE基因高表达的发生率、相关性及其临床意义。方法采用骨髓细胞短期培养法制备染色体，R显带技术进行核型分析；采用MLL双色断裂点分离探针和FISH技术对47例患者进行MLL重排检测；实时定量RT-PCR（RQ-PCR）法检测患者EVI1和BRE基因的表达，并对其相关性和临床意义进行分析。结果47例患者核型均涉及11q23易位，FISH检测MLL重排均为阳性。其中37例患者行免疫表型检测，5例表达B淋系抗原CD19、CD79a或CD10，1例表达T淋系抗原CD7，余表达髓系或髓单核系抗原CD33、CD13、CD14和CD15，其中16例同时CD34（+）。RQ-PCR检测显示18例患者EVI1基因高表达，其中以t（6；11）核型和M4/M5亚型多见；t（6；11）组和t（9；11）组EVI1表达水平均高于正常对照组（P值分别为0.038和0.022）。15例患者BRE基因高表达，其中以t（9；11）核型和M4/M5亚型多见。t（4；11）、t（6；11）、t（9；11）、t（11；19）组EVI1表达水平与正常对照组相比均增高（P值均<0.05）；t（4；11）、t（9；11）组均高于t（6；11）组（P值分别为0.004和0.012）。47例患者中35例死亡，12例存活，中位生存期为10.0个月。总体比较EVI1基因高表达组中位生存期较低表达组短（P=0.049）。各MLL对手基因组中，仅t（9；11）组EVI1基因高表达者中位生存期短于低表达者（P=0.024）。t（9；11）伴BRE高表达者中位生存期较低表达者长（P=0.024）。在t（9；11）组中可见BRE高表达而EVI1低表达者预后好于BRE低表达而EVI1高表达者。结论11q23/MLL重排AL患者中EVI1基因高表达发生率高，为预后不良指标。其中尤以t（6；11）和M4/M5多见。BRE基因高表达在该类白血病中发生率较高，以t（9；11）和M5多见。
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447例急性髓系白血病患者EVI1基因表达、临床和细胞遗传学特征研究
目的 分析447例急性髓系白血病(AML)患者EVI1基因的表达及其临床和细胞遗传学特征.方法 检测2007年1月至2015年4月收治的447例初诊AML患者的EVI1基因表达水平,分析其临床和细胞遗传学资料以及部分患者的分子学突变资料,总结EVI1基因高表达患者的特征.结果 EVI1基因高表达者占17.9％,低表达者占82.1％.两组患者的年龄、性别、外周血血红蛋白水平、白细胞计数、血小板计数差异均无统计学意义;EVI1基因高表达组M0、M5和M6患者比例较低表达组显著增高(P值分另为0.027、0.004和0.011).在细胞遗传学特征方面,EVI1基因高表达组11p15重排、11q23/MLL重排、3q26重排、-7/7q-以及t(9;11)患者比例较低表达组显著增高(P值分别为＜0.001、＜0.001、＜0.001、＜0.001、0.014);而正常核型、inv(16)、t(8;21)在EVI1基因低表达组占优势(P值分别为0.001、0.009、0.002).EVI1基因高表达更多见于细胞遗传学高危组.NPM1突变更倾向分布于EVI1基因低表达组(P＜0.001).EVI1基因高表达组缓解率明显低于低表达组(P＜ 0.001).异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)显著改善EVI1基因高表达者的无白血病生存.结论 EVI1基因高表达多见于M5;核型分布中11p15重排、11q23/MLL重排、3q26重排、-7/7q-以及t(9;11)占优势;缓解率低,allo-HSCT能够改善预后.
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EVI1基因对鼻咽癌细胞增殖及侵袭能力的影响
目的 研究EVI1 基因对鼻咽癌细胞增殖及侵袭能力的影响.方法 采用 Western blot检测EVI1基因在鼻咽癌组织及鼻咽炎症蜡块组织中的表达情况.采用RT－PCR检测EVI1基因在鼻咽癌组织及鼻咽炎症蜡块组织的表达差异.构建慢病毒干扰载体,包装慢病毒,用病毒感染鼻咽癌细胞株,建立稳定低表达EVI1蛋白的鼻咽癌细胞.平板克隆实验验证EVI1对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;MTT试验验证EVI1对鼻咽癌细胞生长能力的影响.流式细胞仪检测敲除EVI1 之后对鼻咽癌细胞凋亡比率的影响.细胞迁徙试验、划痕试验分别验证EVI1对鼻咽癌细胞侵袭及迁徙能力的影响.结果 EVI1基因在鼻咽癌组织及细胞中表达水平明显升高.鼻咽癌组织中EVI1表达水平为鼻咽炎症蜡块组织的6.44倍.敲除 EVI1之后,可以使鼻咽癌细胞生长能力减弱.敲除 EVI1 之后,细胞凋亡水平上升(凋亡比率由 6.3%上升至 12.65%).EVI1敲除后,还可以降低鼻咽癌细胞的侵袭能力(细胞迁徙数目由78个降至29个).结论 EVI1为促进鼻咽癌细胞生长及侵袭的一个癌基因, EVI1可能作为鼻咽癌治疗的新靶点.
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急性髓系白血病患者EVI1基因表达的研究
目的 建立EVI1基因不同转录本的定量表达检测方法,并研究其在各型急性髓系白血病(AML)中的表达模式,探讨EVI1基因表达与AML发生、预后的关系.方法 检测AML患者69例,其中男37例,女32例,年龄10 ～ 70岁,中位年龄42岁；按照FAB分类标准,M216例,M336例,M48例.对照为9名健康人.采用荧光定量PCR(Taq Man探针)法检测EVI1基因各转录本的表达,以ABL基因作为内参,计算样本EVI1基因表达差异的倍数(EVI1/ABL),统计分析不同AML患者间EVI1基因的表达差异.结果 EVI1基因的不同转录本在所有健康对照样品中均表达,而且不同转录本之间的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).转录本2和5(同一对引物检测)的表达水平低,其次为转录本1,再次为转录本6,转录本3的表达水平高.在健康对照样品中转录本2(5)、1、6及3的中位表达水平分别是阴性、0.005、0.050及0.512.AML患者EVI1基因的表达与融合基因AML-ETO及CBFB-MYH 11的表达呈负相关.结论 建立了一种稳定、快速、准确的EVI1基因表达的检测方法,而且EVI1基因的表达与AML的预后具有相关性.
